miR-182表达与早期胃癌患者内镜黏膜下剥离术后复发的关系

武云飞，孟岩 ，张卫彬，杨成，李博

1锦州市中心医院普外二科，辽宁锦州121000；2锦州市中心医院消化科

胃癌是临床常见恶性肿瘤之一，早期胃癌是指病变局限于黏膜层或黏膜下层。近年来随着人们生活水平的提升和胃镜检查的普及，我国早期胃癌的检出率升高，接受内镜下手术切除的早期胃癌患者越来越多［1］。内镜黏膜下剥离术（ESD）由内镜下黏膜切除术发展而来。研究表明，ESD治疗早期胃癌的组织学治愈性切除率和局部复发率均优于内镜下黏膜切除术，5年生存率可达90%［2］。尽管ESD治疗早期胃癌疗效确切，但术后仍有部分患者会发生局部复发，影响患者生命质量［3］。因此，早期预测ESD后复发具有重要意义。微小RNA（miR）是一种非编码小分子RNA，因其具有促癌或抑癌作用被广泛关注。近年来大量研究显示，miR-182在多种实体肿瘤组织中表达上调，参与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、耐药等［4-5］。胃癌组织中miR-182表达明显增加，可作为胃癌诊断和预后评估生物学标志物［6］。但尚无研究报道miR-182表达对早期胃癌ESD后复发的预测价值。本研究观察了早期胃癌组织中miR-182的表达变化，并分析其与ESD后复发的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取锦州市中心医院2015年1月—2017年12月收治的胃癌患者104例为胃癌组，其中男58例，女46例；年龄33～78（55.82 ± 8.73）岁；分期：T1a期38例、T1b期66例。纳入标准：术后病理检查确诊；TNM 分期 T1N0期［7］，具备 ESD 治疗指征［2］；患者及家属均知情同意；临床资料完整，可接受随访；初次确诊，未接受任何抗肿瘤治疗；无淋巴结转移；肿瘤直径＞2 cm。排除标准：合并其他部位肿瘤；既往有恶性肿瘤病史；入组前和术后接受放化疗；心、肝、肾功能严重受损。另选取同期接受胃镜下胃黏膜活检且病理检查证实胃黏膜正常者53例为正常对照组，男33例，女20例；年龄31～75（53.58 ±8.80）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 组织中miR-182表达检测 采用RT-PCR。收集两组术中切除的组织标本，用TRIzol总RNA抽提试剂盒（无锡百泰克生物技术有限公司）提取组织中总RNA，琼脂糖凝胶电泳验证验证总RNA完整性，Qiagen逆转录试剂盒（上海研卉生物科技有限公司）合成cDNA，加入miR-182引物0.6μL（上游引物序列5'-TGCGGTTTGGCAATGGTAGAAC-3'、下游引物序列5'-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3），混匀。RTPCR仪（美国伯乐公司）扩增，反应条件：95℃20 s，95 ℃ 10 s、60 ℃ 20 s、70 ℃ 10 s共循环40次。以U6为内参（上游引物序列5'-GTCCTATATGGTCATTCCGA-3'、下游引物序列5'-ATACGACATTTTCGGCATGG-3）。用2-ΔΔCt法计算miR-182相对表达量。

1.3 随访 胃癌患者均接受ESD治疗，治疗结束后通过门诊复查和电话方式随访，随访至2020年12月，记录患者局部复发情况。术后≥6个月原切除部位及周围1 cm出现肿瘤病灶为复发［2］。

1.4 统计学方法 采用SPSS26.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验；符合正态分布且方差齐的计量资料以±s表示，比较采用t检验；用Cox回归分析早期胃癌ESD后复发的影响因素；用ROC曲线分析miR-182表达对早期胃癌ESD后复发的预测价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组组织中miR-182表达比较 胃癌组、正常对照组胃黏膜组织中miR-182相对表达量分别为4.69±2.18、0.84±0.12。与正常对照组比较，胃癌组胃黏膜组织中miR-182相对表达量高（t=12.843，P＜0.05）。

2.2 miR-182表达与早期胃癌患者临床病理特征的关系 miR-182表达与早期胃癌直径、T分期有关（P均＜0.05），与患者性别、年龄及组织分化程度无关（P均＞0.05）。见表1。

表1 miR-182表达与早期胃癌患者临床病理特征的关系（-x± s）

2.3 早期胃癌患者ESD后复发影响因素的单因素分析 随访3年，104例胃癌患者复发11例（10.58%）。复发患者与未复发患者miR-182相对表达量分别为6.56±1.24、4.47±2.17。复发患者T1b期比例、miR-182相对表达量高于未复发患者（P均＜0.05）。其他影响因素分析见表2。

表2 早期胃癌患者ESD后复发影响因素的单因素分析［例（%）］

2.4 影响早期胃癌患者ESD后复发的多因素分析 多因素Cox回归分析显示，T1b期、miR-182高表达为早期胃癌ESD后复发的独立危险因素（P均＜0.05）。见表3。

表3 影响早期胃癌患者ESD后复发的多因素Cox回归分析

2.5 miR-182表达对早期胃癌患者ESD后复发的预测价值 miR-182表达预测早期胃癌患者ESD后复发的曲线下面积为0.807（95%CI0.718～0.878），取约登指数0.640，最佳截断值为5.19，敏感度、特异度、准确度分别为90.91%、73.12%、75.00%。

3 讨论

内镜下切除术是无淋巴结转移风险的早期胃癌首选治疗方式。目前，早期胃癌内镜下切除术主要包括内镜下黏膜切除术和ESD。ESD可一次性完整切除直径2 cm以上的黏膜病变，且切除深度包括大部分黏膜下层、黏膜肌层、黏膜全层。相比传统内镜下黏膜切除术，ESD避免了病灶分片切除，因此可获得更理想的组织学治愈性切除率，同时病灶整块切除也有效降低了局部复发概率。但ESD仍然存在着潜在的复发风险，故还需筛选早期胃癌ESD后复发高危因素，以指导临床治疗，改善患者预后。

T分期表示胃癌浸润深度，国内外均有研究报道，T分期为早期胃癌ESD后复发独立危险因素［8-9］。本研究结果显示，术后3年有11例患者出现局部复发，复发率为10.58%，略高于上述研究报道，可能与本研究选择病例和随访时间较长有关。进一步分析显示，T分期为早期胃癌ESD后复发的独立危险因素，与上述研究报道一致。说明早期胃癌向黏膜下浸润是导致患者ESD后复发的主要因素之一。胃癌病灶浸润机制复杂，其中癌细胞增殖和侵袭为关键环节。

近年研究发现，肿瘤的发生发展过程中存在多种非编码基因和编码基因异常表达［10］。miRNA是一类长19～25个核苷酸的内源性非编码小RNA，可通过结合靶基因的3'非翻译区，抑制靶基因转录或降低靶基因稳定性，且大多位于肿瘤相关的脆性位点或基因区域，因此在癌细胞增殖、侵袭过程中发挥重要调控作用［11］。miR-182最早于小鼠眼中发现，与miR-96、miR-183组成基因簇，位于人染色体7q32.2，同其他miRNA分子一样可调控生物体生长、发育等行为，在肿瘤形成过程中发挥抑癌基因或致癌基因作用。研究显示，肾细胞癌组织中miR-182表达下调，可通过靶向胰岛素样生长因子1受体抑制癌细胞侵袭和迁移［12］。肝细胞癌组织中miR-182表达上调，可通过抑制转移抑制因子1促进肿瘤转移［13］。miR-182在胃癌中的作用尚不明确，大多数研究认为胃癌组织中miR-182表达上调，具有致癌基因作用。研究显示，胃癌组织中miR-182表达增加，可通过抑制RAS癌基因家族Rab27a促进癌细胞增殖［14］。但有部分研究显示，miR-182在胃癌中具有抑癌基因作用。胃癌组织中miR-182表达降低，可通过靶向环磷腺苷效应元件结合蛋白抑制癌细胞增殖［15］。本研究结果显示，胃癌组织中miR-182表达明显高于正常胃黏膜组织，与胃癌直径、T分期相关。提示miR-182可能作为一种致癌基因参与胃癌进展。

相关临床研究证实，miR-182可作为结直肠癌［16］、非小细胞肺癌［17］预后预测指标，但关于miR-182表达对早期胃癌术后复发的预测价值尚无报道。本研究结果显示，T1b期、高表达miR-182为早期胃癌患者ESD后复发的独立危险因素，且miR-182表达与T分期相关。结果表明miR-182高表达与早期胃癌患者ESD后复发密切相关。癌组织中miR-182表达越高表示癌灶侵犯越深，ESD切除范围未能完全覆盖肿瘤组织，切缘残存病变，导致复发。ROC曲线分析显示，miR-182表达预测早期胃癌患者ESD后复发的截断值为5.19，曲线下面积、敏感度、特异度、准确度均较高。提示miR-182可作为预测早期胃癌患者ESD后复发的生物学标志物。

综上所述，miR-182在早期胃癌组织中高表达，是ESD后复发的独立危险因素，可作为预测ESD后复发的生物学标志物。但miR-182调控早期胃癌ESD后复发的分子机制尚不明确，后续还需研究miR-182在早期胃癌患者ESD后复发中的相关靶基因和信号通路。