P16蛋白联合高危型人乳头瘤病毒测定在宫颈疾病中的筛查效果及诊断效能研究

江亚宁

(湖南省妇幼保健院，湖南 长沙 410000)

宫颈是女性重要的内生殖器，而宫颈疾病是指宫颈区域发生的病变，包括炎症、损伤、肿瘤等，是女性常见的疾患之一[1]。患者发病早期临床症状缺乏典型性，临床多表现为白带增多、下腹及腰骶部疼痛、外阴瘙痒及排尿困难，影响患者生活[2]。阴道镜活组织检查是宫颈疾病患者常用的检查方法，并将其视为“金标准”，但是该检查方法风险性、创伤性较大，导致患者诊断耐受性、依从性较差。研究表明[3]，P16蛋白属于肿瘤相关基因蛋白，在肿瘤发生、发展中呈过表达现象。P16蛋白与高危型人乳头瘤病毒(HPV)基因用于宫颈疾病筛查，具有方法简单、易于操作、能减少经济支出等优点[4]。因此，本研究探讨了P16蛋白联合HPV测定在宫颈疾病中的筛查应用效果及诊断价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年3月—2019年4月宫颈病变患者240 例，年龄(47.84±4.71) 岁；宫颈上皮内瘤变CINⅠ 83 例，CINⅡ 104 例，CINⅢ 34 例，鳞癌19 例。纳入标准：符合宫颈疾病诊断标准，且患者均经阴道镜检查最终确诊；能遵医嘱完成P16和HPV检查，且患者均能耐受；意识清楚，能与医生进行沟通、交流。排除标准：合并已经确诊的宫颈癌患者、入院资料不全者；精神状态异常患者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

所有患者入院后均取病灶组织与病灶旁组织(≥3 cm)，石蜡包埋后，常规制备切片，备用。

1.2.2 P16蛋白测定

采用免疫组化技术测定不同组织中P16蛋白阳性表达水平。取上述获得的病灶组织与癌旁组织，利用多聚甲醛4%常温下固定，经石蜡包埋后制备4 μm切片，向切片中加入浓度为3%的过氧化氢(H2O2)阻断内源性过氧化物酶，分别加入P16一抗(以PBS代替一抗作阴性对照)，4 ℃下过夜，然后加入生物素标记的P16二抗，常温下完成10 min孵育，用DAB显色后进行苏木素染色，用中性树胶常规封固。免疫组化染色下随机取10 个非重叠视野，完成细胞阳性比例计算[5]。判断方法：P16阳性信号位于胞核或胞浆，上述抗体的阳性对照染色强度均记为2+；对于待测肿瘤细胞无信号为0，弱于对照组记为1+，等于记为2+，强于记为3+。估算阳性区域百分比。0和1+为阴性，2+和3+为阳性[6]。

1.2.3 HPV定量检测

借助美国Digene公司提供的HPV试剂盒完成13 种高危HPV亚型检测，包括HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。但是，该方法不能对单一HPV进行分型，对于任何一种高危型人乳头瘤病毒基因检测(HPV-DNA)超过设定的阈值或正常值时，测定结果视为阳性[7]。

1.2.4 诊断效能

绘制接受者操作性(ROC)曲线，分析P16蛋白联合HPV检测在宫颈疾病中的诊断敏感性、特异性。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 宫颈疾病不同组织P16蛋白阳性率比较

宫颈疾病病灶组织中P16蛋白阳性患者183 例(76.25%)，高于病灶旁组织[P16蛋白阳性5例(2.08%)](P<0.05)。免疫组化结果表明：宫颈疾病组织中多数细胞呈阳性，染色呈褐色；而在病灶旁组织中阳性细胞较少，呈淡黄色(见图1)。

A B

2.2 不同类型宫颈疾病HPV阳性率比较

240 例患者均完成HPV检测，结果表明：HPV阳性患者184 例(阳性率76.67%)。HPV阳性率前三位为鳞癌、CINⅢ和CINⅡ，分别占100.00%，91.18%和90.38%(见表1)。

表1 不同类型宫颈疾病HPV阳性率比较

2.3 P16蛋白联合HPV测定在宫颈疾病中的诊断效能

ROC曲线结果表明：P16蛋白联合HPV测定宫颈疾病诊断敏感性、特异性均高于单一P16蛋白和HPV检测(P<0.05)(见表2)。

表2 P16蛋白联合HPV测定在宫颈疾病中的诊断效能

3 讨 论

近年来，P16联合HPV测定在宫颈疾病中广泛应用，且效果理想[8]。本研究中，宫颈疾病病灶组织中P16蛋白阳性患者183 例(阳性率76.25%)，高于病灶旁组织(P16蛋白阳性5 例，阳性率2.08%)(P<0.05)；免疫组化结果表明：宫颈疾病组织中多数细胞呈阳性，染色呈褐色，而在病灶旁组织中阳性细胞较少，呈淡黄色，说明P16联合HPV测定能为临床诊疗宫颈疾病提供参考依据。P16是一种抑癌基因，能参与细胞周期G1期的抑制，促进凋亡与修复。同时，P16能通过经典信号途径实现对细胞周期的抑制作用，从而引起该途径失控，细胞过度增殖。研究表明[9]：高危型HPV能诱导P16蛋白过表达，而过度表达的P16亦可引起P16-pRb(抑癌基因)反馈循环破坏，难以发挥肿瘤抑制作用。HPV是一种能特异性地感染人皮肤、黏膜鳞状上皮细胞，引起多种良、恶性病变的DNA病毒。同时，HPV感染是宫颈鳞癌、上皮肉瘤发生的必要条件，持续的HPV感染能增加宫颈癌发生率。本研究结果表明：HPV阳性患者184 例，阳性率为76.67%。HPV阳性率前三位分别为鳞癌、CINⅢ和CINⅡ，分别占100.00%，91.18%和90.38%。临床上将P16蛋白联合HPV测定用于宫颈疾病中能发挥不同测定方法的优势，可获得较高的诊断效能。本研究中，ROC曲线结果表明：P16蛋白联合HPV测定宫颈疾病诊断敏感性、特异性，均高于单一P16蛋白和HPV检测(P<0.05)。因此，宫颈疾病患者加强P16蛋白、HPV检测能帮助患者确诊，避免延误最佳诊疗时机[10]。

综上所述，P16蛋白在宫颈疾病组织中呈高表达，联合HPV检测诊断宫颈疾病组织具有较高的诊断敏感性、特异性，能为临床诊疗提供参考依据。