间接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体检测方法的结果比较

于 潇

（沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部，辽宁 沈阳 110164）

抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）是抗中性粒细胞颗粒和单核细胞溶酶体的IgG抗体。肾肺综合征的发病率与ANCA密切相关且已有许多关于靶抗原的报道[1-3]。抗原蛋白酶3（PR3）检测和抗原髓过氧化物酶（MPO）检测可有效的诊断非传染性非典型肺炎[4-6]。目前临床ANCA实验室检测技术主要有临床间接免疫荧光法（IIF）、临床酶联免疫吸附法（ELISA）、临床放射免疫法（RIA）、临床免疫印迹法（IB）和临床流式细胞仪（FCM）检测，其中临床IIF和临床ELISA法在临床上应用较为广泛。笔者用IIF和ELISA检测ANCA并对两种临床方法的结果进行了一致性分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至2019年1月在沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部的抗中性粒细胞胞质抗体检测样本200例进行IIF和ELISA检测，所有阳性结果的血清分管并置零下75 ℃保存。

1.2 方法 仪器及试剂：①IIF试剂由德国奥蒙公司的粒细胞镶嵌检测试剂盒批号为F100134Y。每个试验区包含四种生物切片即乙醇固定颗粒细胞生物切片、甲醛固定颗粒细胞生物切片、Hep2细胞生物切片和灵长类肝组织生物切片。②荧光显微镜由德国奥蒙宫制造的欧洲之星荧光显微镜。③Pr3试剂、MPO试剂由德国奥蒙公司的MPO和Pr1酶联免疫吸附试剂盒，分别为E04234BK和E09235AQ批次；IIF法严格按照制造商的试剂说明操作，阴性和阳性对照血清清稀释比为1∶14并在500倍荧光显微镜下用异硫氰酸荧光素（FITC）和乙醇固定中性粒细胞基质板标记荧光抗体。均匀胞质颗粒特异性荧光对胞质型（CANCA）呈阳性并对核周型抗体（PANCA）呈阳性。由于抗核抗体ANCA（ANA）会干扰乙醇固定的中性粒细胞基质ANCA的判断，故Hep2细胞全部阳性荧光模型由两名有经验的中级技术人员进行判断。用ELISA定量检测Pr3和MPO时，应严格按照检测程序进行，且阳性截止值大于25 RU/mL。

1.3 统计学方法 使用SPSS20.0对数据进行分析且，临床IIF检测阳性、阴性检测例数为计数资料，行χ2检验，P＜0.05表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检验方法检测ANCA结果比较 两种方法的一致性较好且差异具有临床统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两种检验方法检测ANCA结果比较

3 讨论

ANCA在小血管炎发病机制、诊断、病程监测及复发预测等方面的临床价值已得到证实[3]。单独使用IIF法或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测非传染性非典型肺炎准确率较高，并随着临床生物基质片制备工艺的标准化和商业化及ANCA重组混合抗原和锚定结合技术的应用使两种临床方法的检测结果基本一致[4]。结果表明IIF阴性和酶联免疫吸附试验阳性样品中的Pr3和MPO浓度均低于其他样品，这种低浓度的样品导致了很弱的荧光或IIF法的负荧光发生，IIF法在一些研究中也得到了类似的结果[7-10]。ANA法和ANCA同时存在的现象非常普遍，一些研究报道了ANA对临床IIF检测ANCA结果的干扰[11-12]。本研究采用四种生物切片，用乙醇固定颗粒细胞生物切片，甲醛固定的粒细胞生物切片，Hep2细胞生物切片，灵长类肝组织生物切片，在一个血清样品中临床检测ANCA。临床IIF试验能部分消除ANA的干扰。一些同时有ANCA和ANA阳性的样本，由于无法识别其差异，可能被判定为临床阴性，但选择特定的酶联免疫吸附试验也不会导致漏检[13-14]。研究发现ANCA与炎症性肠病病变、肾小球基底部病变、膜疾病病变、Felty综合征、慢性呼吸道感染也相关[15-16]。在这些疾病中，ANCA试验的临床荧光表现主要是PANCA，但有学者认为此表现不同于典型表现，但在临床实际工作中很难做出明确的区分[17-18]。因此有研究将其归类为PANCA，与这些疾病相关的ANCA的靶抗原主要是非MPO[19]。有报道称粒细胞特异性蛋白酶、人体乳铁蛋白、人体组织蛋白酶G、人体人溶菌酶相光膜蛋白2等靶抗原感染有关[20-21]。分析原因认为，IIF是粒细胞固定的，且基质片剂可以检测几乎所有抗出血性血清中，与ANCA相关靶抗原的抗体，但ELISA只能检测单个抗原成分，并且取决于试剂情况。ANCA靶抗原可以采用常规检测法，IIF法可以提供更丰富的临床信息[12]，因此，可以根据个体的临床差异，筛选出更多种类的ANCA相关靶抗原。笔者研究发现临床两种方法的临床一致性较好，差异具有临床统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，IIF和ELISA单独检测抗中性粒细胞胞质抗体均有漏检，联合临床检测的效果最佳。