广州市及其周边地区马群中盖塔病毒血清流行病学调查

左媛媛，元正菊，何于雯，任炜杰，孟锦昕，王淑娟，钟江国，李 楠，王 娟，王静林，徐天刚

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.云南省畜牧兽医科学院，云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，云南昆明 650224；3.广州市动物卫生监督所，广东广州 510440）

盖塔病毒（Getah virus，GTV）可通过蚊虫叮咬感染猪、马等动物，并导致其出现临床症状，其传播媒介主要是蚊虫[1]。近年来在云南和新疆等地猪、牛、羊等家养动物圈舍内采集的蠓虫中亦分离到GTV[2-3]，提示蠓虫有可能作为一种传播媒介参与GTV的自然循环。目前已知，马是GTV自然循环过程中的主要扩散宿主之一，感染后常出现发热、后肢球节水肿僵硬、颌下淋巴结肿胀疼痛、抑郁、轻度黄疸、阴囊水肿、荨麻疹等症状[4-5]。据文献[6]记载，1978—1983年日本马场曾多次暴发GTV流行。1990年印度也报道有GTV流行[7]。日本最近一次报道发生在2014年秋天，美浦一赛马场发生GTV感染疫情，共有33匹马出现临床症状[4]；后续对诊赛马场血清流行病学调查发现，2015年从周边私人马场进入赛马训练中心的马匹，其GTV血清阳性率呈逐渐上升趋势（8月为11.8%，9月为21.7%，10月为34.9%）[8]。GTV流行给当地赛马产业带来不小的冲击。

在我国，广州市赛马运动发展较早，基础较好，为迎接第16届亚运会马术比赛，从2007年开始，农业部按照世界动物卫生组织（OIE）动物疫病区域化管理原则，指导广州市建设无马病区，并于2010年通过欧盟无规定马属动物疫病区认可。随着人民生活水平日益提高，与马相关竞技和休闲产业日渐发达，马匹群体数量不断增加，因此加强马病，尤其是新发病监测，将有助于维持相关产业健康和可持续发展。鉴于近年来马匹中GTV流行不断加重的趋势和潜在危害，中国动物卫生与流行病学中心在对广州市及其周边地区开展常规马病监测基础上，与云南省畜牧兽医科学院合作，首次开展了该地区马匹中GTV血清学回顾调查，以期了解马匹中GTV流行情况，从而为该病科学防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 血清样品

由广州市动物卫生监督所按照《世界动物卫生组织陆生动物诊断试验与疫苗手册》要求，2019年从广州市及其周边地区17个采样点马匹中无菌颈静脉采集184份血清样品，送中国动物卫生与流行病学中心-20 ℃保存。

1.2 病毒来源和病毒复苏

GTV NM20株分离自内蒙古采集的羊血液样品，经鉴定后，保存在云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室毒种库。

从-85 ℃冰箱中取出NM20毒株，取500 μL病毒液接种在75 cm2培养瓶中刚好长满单层BHK-21细胞上，待75%细胞出现细胞病变（CPE）后，收获细胞上清，离心，每管0.5 mL分装，作为检测用病毒，放入-85 ℃冰箱保存备用。

1.3 微量中和试验

1.3.1毒价测定 从-85 ℃冰箱中取出检测用病毒液，用pH7.4 MEM培养基连续10倍稀释（10-1～10-10）；在96孔板上，每孔加入50 µL稀释的病毒悬液，每个稀释度重复8个孔，空白对照加50 µL细胞培养液；随后每孔加入50 µL细胞密度为106个/L的细胞悬液；37 ℃培养，逐日观察CPE，用Karber方法计算毒价（TCID50）。

1.3.2中和试验 具体步骤参照文献[9]进行：血清样本56 ℃灭活30 min，然后作1:10～1:1 280稀释，每个稀释度重复2个孔，每孔分别加入50 µL各稀释度血清和50 µL病毒悬液（100 TCID50/50 µL），同时设100、10、1 TCID50和空白对照；混匀，37 ℃中和1 h；加100 µL细胞悬液（106个/mL），放入37 ℃ 5% CO2培养箱中培养5 d。在各对照成立的条件下，读取判定结果。被检血清孔1孔以上（含1孔）不出现CPE的最高稀释度即为被检血清中和抗体滴度。当中和抗体滴度≥1:10时判为阳性。

1.4 统计分析

采用SPSS 17.0软件，对不同采样点GTV血清抗体检测结果进行卡方检验，用Excel软件制作柱状图。

2 结果与分析

2.1 阳性率分布

在17个采样点采集的184份马血清样品中，GTV中和抗体滴度≥1:10的48份，平均抗体阳性率为26.09%（48/184）。不同采样点的GTV中和抗体阳性率介于0～43.75%，差异明显（P＜0.05），其中动物园、马场1、马场2、马场4、马场6等5个采样点中和抗体阳性率较高，均大于30%（表1）。

表1 广州市及其周边地区不同采样点GTV中和抗体检测统计结果

2.2 抗体滴度分布

2.2.1采样点分布 对不同采样点抗体滴度进行统计发现，马场6的病毒中和抗体滴度为1:10～1:640（1匹马为1:640，其余3匹为1:10），马 场4为1:10～1:80（1匹马为1:80，5匹 在1:20以上），马场1和动物园的中和抗体滴度为1:10～1:40，其他马场均为1:10～1:20（图1）。

2.2.2年龄分布 从采样马年龄分布看，0～5岁马匹的中和抗体阳性率为33.33%，抗体滴度为1:10～1:40；＞5～10岁的中和抗体阳性率为22.36%，抗体滴度为1:10～1:80；＞10～15岁的中和抗体阳性率为27.14%，抗体滴度为1:10～1:40；＞15～20岁的中和抗体阳性率为35.29%，抗体滴度为1:10～1:640（图2）。

图2 广州市及其周边地区GTV中和抗体滴度年龄分布

3 讨论

GTV为重要家畜病原体，可引起马、猪等家畜的严重疾病[5]。在亚洲的日本、印度、中国等国家马匹和猪群中已多次出现GTV感染流行[7-8，10]，同时中国、日本、印度和朝鲜多次在马匹中检测到GTV中和抗体阳性，阳性率为6.0%～93.0%[7，11-14]，表明在这些国家GTV已呈地方性流行趋势。GTV不但影响马和猪等家畜的健康养殖，而且会造成较大经济损失。目前我国已从蚊虫、蠓虫以及发病的猪、马中分离到多株GTV[2，3，5，10]，在人血清以及鸡、鸭、牛、猪、马等多种动物血清中检测到GTV中和抗体，其中马和猪中的抗体阳性率较高[13]，表明马和猪是GTV主要易感宿主。

本研究在广州市及其周边地区不同马场检测的GTV平均中和抗体阳性率为26.09%，与海南省马匹中GTV抗体阳性率相似[15]。本调查发现部分采样点马血清中GTV中和抗体阳性率较高，如动物园、马场4、马场6的中和抗体阳性率均≥40%，马场1和马场2的中和抗体阳性率＞30%，而且其中1匹马抗体滴度高达1:640，提示这些地区马匹中GTV感染可能较为严重。马场2和马场5的GTV中和抗体阳性率较低（分别为0和5.7%），进一步调查发现，马场5曾是为服务广州亚运会而兴建的马匹隔离区设施，而马场2是香港赛马会出资兴建的符合国际标准的马术比赛场。上述两场地相对而言设计规格起点高，各项防护措施如防虫等相对到位。这可能是其抗体阳性率较低的主要原因，表明防蚊虫和蠓虫等吸血昆虫是预防GTV感染最有效的措施之一。

广东省位于我国南部，属于热带亚热带气候，降雨量丰富、湿度较大、气温较高，适合蚊虫等GTV传播媒介滋生。近年来，在广东省蚊虫和蠓虫等媒介昆虫中，已分离或检测到登革病毒、乙型脑炎病毒、南定病毒、芒市病毒等多种虫媒病毒[16-19]。2018年8月首次报道广东省发现首例马感染GTV而出现临床症状病例，并从中分离到病毒[10]，同年8月在广东省佛山市的猪中检测到GTV[20]。

本次调查采样范围涉及广州市、东莞市、深圳市等地区，涵盖地域面积约1.2万km2，且各采样点间相距20 km以上，因此本次调查结果可以反映出GTV在该区域流行范围较广。本次调查的采样点周边3 km范围内均无猪场等家畜养殖场，但有稻田种植区，因此存在适合传播媒介蚊虫滋生的条件。本次调查发现0～20岁年龄段马匹均具有较高感染率，提示大部分采样点可能已经存在导致GTV持续感染的自然生境或可能存在GTV感染的自然循环，因此需要在该地区加强马匹的GTV监测和研究。

4 结论

调查发现，广州市及其周边地区马匹中存在GTV感染或流行，且部分地区感染较严重，提示当地相关部门应进一步加强马匹的GTV监测，并采取相应的控制措施，以减少该病流行和可能带来的经济损失。