PAS染色及真菌荧光染色在皮下真菌病诊断中的应用

徐艳 张恋 钟白玉 张静 翟志芳

(陆军军医大学第一附属医院皮肤科，重庆 400039)

皮下真菌病(subcutaneous mycoses)是指侵犯真皮、皮下组织和骨骼的真菌感染[1]，部分可播及周边组织，如足菌肿等，有些则沿淋巴管扩散，如孢子丝菌病、着色芽生菌病，对人体造成较大危害。这类疾病病程缓慢，早期临床表现不典型，为疾病的早期诊断带来一定困难。真菌培养是其诊断的“金标准”，然而，真菌培养阳性率偏低，重要的是部分早期病例不容易考虑到真菌感染，多在组织病理提示后才考虑到深部真菌感染的可能性。病理学检查中，特殊染色，如PAS染色对真菌感染的诊断具有重要意义。近年来，随着真菌荧光染色方法的逐步推广，为了解真菌荧光染色方法在组织病理学中的应用，我们比较了经真菌培养确诊的皮下真菌病的组织病理检查中PAS染色及真菌荧光染色的检测效果，探讨两种染色方法在组织病理检查过程中，对皮下真菌病的诊断价值。

1 材料和方法

1.1 临床资料

选择2013年1月至2018年2月就诊于我科，经真菌培养确诊同时行皮肤病理检查的皮下真菌病病例共42例，其中孢子丝菌病36例，着色芽生菌病6例，男23例，女19例，年龄5～88岁。

1.2 方法

所有蜡块重新切片，同时进行PAS染色和真菌荧光染色，比较两种染色方法诊断皮下真菌病的

实验室价值。

1.3 染色原理

过碘酸雪夫染色液(PAS)：PAS染色是组织病理学中最常用的真菌特殊染色法，以亮绿或苏木素复染，真菌着红色，组织中细胞核着绿色或蓝色。真菌荧光染色液：采用贝索真菌荧光染色液，常规石蜡切片脱蜡至水，滴1滴荧光染色液，加盖玻片，通过250～400 nm滤镜的荧光显微镜下观察，判断真菌的存在。

1.4 统计学分析

应用SPSS 18.0统计软件，采用χ2检验，以α=0.05为判断标准。

2 结 果

42例病例中，孢子丝菌病36例，着色芽生菌病6例。PAS染色阳性19例，其中6例着色芽生菌病PAS染色均找见硬壳细胞(100%)，孢子丝菌病中仅13例阳性(36.11%)。真菌荧光染色阳性21例，着色芽生菌病阳性仅2例(33.33%)，孢子丝菌病19例阳性(52.78%)，见表1。见图1、2。对PAS染色及真菌荧光染色阳性率进行统计学分析，χ2=0.191，P>0.05，两种方法差异无统计学意义。

3 讨 论

皮下真菌病是指侵犯真皮、皮下组织和骨骼的真菌感染，主要包括孢子丝菌病、着色芽生菌病、暗色丝孢霉病及足菌肿。不同真菌引起的皮肤真菌病需要相互鉴别，还需要与其他感染性皮肤病相鉴别，如皮肤结核、非结核分支杆菌感染、麻风、梅毒、利什曼病等鉴别，也需要与非感染性皮肤病相鉴别，因此，当临床怀疑皮肤真菌时，需要进行直接镜检、真菌培养或组织病理检查，必要时进行分子生物学检查，获得明确诊断[1]。

表1 42例皮下真菌病PAS染色与真菌荧光染色结果分析

图1 真菌荧光染色×400 图2 PAS染色 ×400Fig.1 Fungal fluorescence stain ×400Fig.2 PAS stain ×400

皮下真菌病的诊断可以通过直接镜检、真菌培养及组织病理学检查来明确诊断。病理学检查中，特殊染色，如PAS染色对真菌感染的诊断具有重要意义。一般用组织标本进行直接镜检相对浅部真菌较为繁琐困难，另外真菌培养物需排除污染菌的可能性。近年来，真菌荧光染色在临床的应用逐步推广，在组织病理检查中对真菌感染检测的应用也越来越广泛。真菌荧光染色试剂可用于人体组织或样本的染色处理，包括皮屑、甲屑、毛发、尿液、体液及阴道分泌物等，在荧光显微镜下定性检测真菌。主要原因是荧光增白剂与组织中可能存在的真菌细胞壁β-多糖结合，如几丁质和纤维素等，在紫外光的激活下，可使真菌显示出荧光。目前关于真菌荧光染色的应用，更多用于皮屑、甲屑、毛发等标本，关于其敏感性和特异性，已有不少文献肯定[2-3]，在组织病理中的应用，还需要更多的临床佐证。

本次回顾性分析可见对于着色芽生菌病PAS染色敏感性高于真菌荧光染色，可能是由于着色芽生菌病的组织病理表现多是硬壳细胞，荧光增白剂与细胞壁β-多糖结合无法完全结合显示荧光。而对于孢子丝菌病，PAS染色不及真菌荧光染色。可能是由于孢子丝菌孢子比较小，如果在组织分布较少，不容易着色。另有一个原因是孢子在组织内分布不在一个层次，如果未连续切片可能造成有些切片有真菌孢子，有些没有。PAS染色一直作为组织病理检查中一种经典的染色方法，相较于革兰染色、硝酸银染色等，PAS染色有对真菌特异性强、着色鲜艳等优点[4]，还能根据一些特征性结构，简便鉴别菌属，比如硬壳细胞、星状体等，因此对于真菌病的诊断有着决定性的意义。

因本次分析样本量有限，两种方法阳性率之间无明显统计学差异，PAS染色与真菌荧光染色对皮下真菌病的诊断价值差异不大，但临床实践中可两种方法互补，以提高组织病理真菌检验结果的阳性率。