斯钙素2、转移抑制基因23-H1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

高辉，张雪，刘文月

沈阳市妇婴医院病理科，沈阳 110011

宫颈癌原发于女性子宫颈，是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，据统计2018年全球宫颈癌的发病率为3.2%，约有56.9万例，病死率为3.3%，约有31万例，主要分布于经济发展较差的地区，是导致女性死亡的常见疾病，严重危害着女性的身体健康。宫颈癌的发生主要为高危型人乳头状瘤病毒感染所致，该病毒的结构和致病机制目前已被广泛研究，有上游调节区、早期基因区和晚期基因区3个基因区，其中早期基因区编码的相关蛋白主要参与病毒基因的复制和转录，通过诱导宿主细胞发生转化，进而引起宫颈癌的发生。人机体内多种基因蛋白异常表达与宫颈癌的发生、发展密切相关，斯钙素2（stanniocalcin 2，STC2）是一种分泌性糖蛋白激素，有调节机体钙、磷平衡的作用，广泛分布于各组织中，目前已被作为一种新的肿瘤标志物被研究；转移抑制基因23-H1（non-metastasis gene 23-H1，NM23-H1）在恶性肿瘤中主要起着转移调控作用，对诊断肿瘤转移和预后具有重要意义。本研究通过观察STC2、NM23-H1在宫颈癌组织中的表达情况，分析其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2012年5月至2019年5月沈阳市妇婴医院收治的宫颈癌患者的病历资料。纳入标准：①符合宫颈癌的诊断标准；②未行放化疗等抗肿瘤治疗；③无其他宫颈及生殖系统疾病；④临床资料完整；⑤年龄18～80岁。排除标准：①肝肾功能不全；②患有其他恶性肿瘤。根据纳入、排除标准，共纳入90例宫颈癌患者（宫颈癌组），年龄34～68岁，平均（50.12±8.65）岁，取90例宫颈癌患者的病变组织进行研究。另选取30名健康女性（正常组），年龄35～67岁，平均（49.25±8.14）岁，取其宫颈组织。

1.2 免疫组织化学法

将组织样本使用4%多聚甲醛固定72 h后进行石蜡包埋，制成蜡块后保存备用。取蜡块4 μm连续切片，切片采用二甲苯脱蜡及梯度酒精水化，磷酸盐缓冲液清洗，修复抗原，山羊血清封闭。滴加一抗（兔抗人STC2抗体、兔抗人单克隆NM23-H1抗体），4℃过夜，磷酸盐缓冲液洗3次，加入二抗[辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）抗兔二抗]，室温孵育，磷酸盐缓冲液洗2～3次，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素复染，脱水，中性树胶封片，显微镜下观察结果。按照免疫组织化学SP法试剂盒说明书由2名病理科人员严格操作并进行判读，如判读结果有差异由2人协商确定最终结果。

1.3 结果判断

STC2定位于细胞膜或细胞质，以出现棕黄色或黄褐色颗粒为阳性，染色强度按无色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别计为0～3分；随机取10个高倍视野（×400）计算阳性细胞百分比：阳性细胞百分比＜1%为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，＞80%为4分；将染色强度与阳性细胞百分比计分相乘计算总分，以总分＞4分作为阳性表达。NM23-H1阳性细胞主要为细胞质中出现弥漫性棕黄色（少数位于细胞膜和细胞核内），结果判读：NM23-H1阳性细胞百分比≥30%为阳性，＜30%为阴性。

1.4 资料收集

收集入组患者临床资料，包括年龄、肿瘤直径、病理分型、浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况等，由专人统计、核查和录入。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 STC2、NM23-H1表达情况的比较

宫颈癌组组织中STC2阳性表达率明显高于正常组，NM23-H1阳性表达率明显低于正常组，差异均有统计学意义（

P

＜0.01）。（表1）

表1 两组组织中STC2、NM23-H1表达情况的比较[n（%）]

2.2 STC2、NM23-H1阳性表达与宫颈癌的相关性

Spearman相关性分析显示，STC2阳性表达与宫颈癌的发生呈正相关（

r

=0.358，

P

＜0.01），NM23-H1阳性表达与宫颈癌的发生呈负相关（

r

=-0.361，

P

＜0.01）。

2.3 不同临床特征的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2、NM23-H1表达情况的比较

不同年龄、肿瘤直径、病理分型的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2阳性表达情况比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05）；不同浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2阳性表达情况比较，差异均有统计学意义（

χ

=3.979、4.016、4.388、7.107，

P

＜0.05）。不同年龄、肿瘤直径、病理分型、浸润深度、分化程度、TNM分期的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2阳性表达情况比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05）；不同淋巴结转移情况的宫颈癌患者的宫颈癌组织中NM23-H1阳性表达情况比较，差异有统计学意义（

χ

=17.431，

P

＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2、NM23-H1表达情况（n=90）

2.4 STC2、NM23-H1表达影响因素的Logistic回归分析

以STC2、NM23-H1表达为因变量（STC2阳性表达=1，STC2阴性表达=0；NM23-H1阳性表达=1，NM23-H1阴性表达=0），以各临床特征为自变量，Logistic回归分析显示，浸润深度＞1/2肌层、低～未分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移均是STC2阳性表达的独立危险因素（

P

＜0.05），淋巴结转移是NM23-H1阴性表达的独立危险因素（

P

＜0.05）。（表3、表4）

表3 STC2阳性表达影响因素的Logistic回归分析

表4 NM23-H1阴性表达影响因素的Logistic回归分析

3 讨论

肿瘤的发生、侵袭、转移是多基因、多因素相互作用的结果，在宫颈癌的发生、发展过程中致癌基因和抑癌基因发挥了重要作用，致癌基因激活后可促使正常细胞癌变，并与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关，其激活方式与病毒感染、基因扩增、点突变等有关；抑癌基因在肿瘤的发生、发展过程中则起着负调节作用，主要控制肿瘤细胞生长、增殖和分化，与致癌基因相互制约，维持着正负调节信号的稳定性，此类基因缺失、失活或突变则可引起肿瘤的发生和进展。宫颈癌患者基因异常改变与高危型人乳头状瘤病毒感染有关，人乳头状瘤病毒DNA整合到宿主DNA中，并产生肿瘤蛋白，干扰细胞周期性调控，与此同时还可以阻碍宿主细胞抑癌基因的作用，致使其对致癌因子敏感。

本研究通过数据分析后发现宫颈癌组组织中STC2阳性表达率明显高于正常组，NM23-H1阳性表达率明显低于正常组；Spearman相关性分析显示，STC2阳性表达与宫颈癌的发生呈正相关，NM23-H1阳性表达与宫颈癌的发生呈负相关，该分析结果表明STC2、NM23-H1表达异常与宫颈癌的发生密切相关。在王晓旭等的研究表明STC2具有促进宫颈癌细胞增殖的能力，在常海平等最近两篇研究中表明通过上调宫颈癌患者NM23-H1表达可以抑制宫颈癌细胞的侵袭能力，这与本研究结果类似。STC2是斯钙素的一种亚型，其基因位于染色体5q35上，有报道发现STC2在一系列宫颈癌细胞（C4-1、MS751、HeLa、HT-3、SW765等）中呈高表达，其过表达可以促进宫颈癌细胞增殖，而低表达则会抑制肿瘤细胞增殖，其调控机制可能是通过调节丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路的活动进而调控肿瘤细胞的增殖和凋亡。

NM23-H1

是一种肿瘤转移抑制基因，该类基因编码的蛋白酶能够抑制具有促进转移作用的蛋白，从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，其调控肿瘤的机制与调节核苷二磷酸激酶有关，可参与二磷酸鸟苷转化，排斥肿瘤细胞微管蛋白聚合和解聚，通过影响细胞骨架状态从而抑制肿瘤细胞转移。STC2阳性表达可能与宫颈癌浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关，NM23-H1阳性表达可能与宫颈癌淋巴结转移有关，Logistic回归分析显示，浸润深度＞1/2肌层、低～未分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移是STC2阳性表达的独立危险因素，淋巴结转移是NM23-H1阴性表达的独立危险因素，表明宫颈癌浸润深度、分化程度、临床分期、淋巴结转移是影响STC2异常表达的相关因素，STC2表达水平升高可提示宫颈癌细胞分化程度降低及增殖、侵袭、转移能力增强，意味着患者肿瘤进展或转移的风险可能增加，因此STC2表达变化可作为预测宫颈癌是否出现病情进展的重要指标；淋巴结转移则是影响NM23-H1阴性表达的独立因素，在Wu等的研究中也表明NM23-H1表达异常与宫颈癌细胞的迁移能力有关，NM23-H1阴性表达提示抑制肿瘤细胞转移能力下降，宫颈癌患者有出现淋巴结转移的风险，可作为评估患者淋巴结转移的重要证据。

综上所述，STC2、NM23-H1异常表达与宫颈癌的发生、发展密切相关，通过观察STC2、NM23-H1表达情况有助于临床宫颈癌的诊断和病情进展评估。