木尼孜其赛甫拉合剂质量标准研究

郭 鑫 张雨欣 李治建 霍仕霞

1.乌鲁木齐市妇幼保健院药剂科，新疆乌鲁木齐 830001；2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药剂室，新疆乌鲁木齐 830049

木尼孜其赛甫拉合剂是民族医常用的制剂，由睡莲花、菊苣根、天山堇菜等8 味药材组成。能够调节内分泌、抗炎、提高机体免疫力、改善新陈代谢[1-2]。目前该合剂作为院内制剂，应用于各大维吾尔医医院，治疗白癜风、银屑病和湿疹等皮肤病效果显著[3-5]；在治疗盆腔炎性疾病后遗症、乳腺增生等妇科病方面也有广泛应用[6]。目前木尼孜其赛甫拉合剂质量标准为院内制剂内部标准，除常规制剂检查以外，没有定性或定量方法，造成成品质量差异较大，为了控制其质量，本研究对该制剂中的各药材进行了系统的研究，建立合剂中睡莲花、菊苣薄层色谱（TLC）鉴别和秦皮乙素含量测定，初步建立木尼孜其赛甫拉合剂的质量控制方法。

1 材料

1.1 仪器

LC-2030D 高效液相色谱仪（日本岛津）；SQP 电子天平（赛多利斯，万分之一）；WD-9403A 型双光观察照相仪（北京沃德）；WG1-070 超声波清洗器（上海科导）；DHG-9123A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏）；XMTD-7000 电热恒温水浴锅（北京永光明）。

1.2 试药

秦皮乙素对照品（批号：11731-200501）、烟花苷对照品（批号：112007-201602），紫云英苷对照品（批号：20180725），菊苣对照药材（批号：121388-20092）均购自中国食品药品检定研究院。天山堇菜（批号：201705001）、菊苣根（批号：201702001）、菊苣子（批号：201709001）均购自北京时珍堂（宜昌）药业有限公司；睡莲花（批号：H30180804）、刺糖（批号：Z30091305）均购自新疆麦迪森维药有限公司饮片厂；玫瑰花（批号：171203）购自毫州市云中药业有限公司；红枣（批号：201810001）购自湖北一方制药有限公司，经维吾尔医药研究所闫明研究员鉴定为正品。木尼孜其赛甫拉合剂（批号：181002-8）为新疆维吾尔医药研究所自制。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 睡莲花 取木尼孜其赛甫拉合剂10 mL，水浴蒸干，残渣加甲醇10 mL，超声30 min，滤过，取续滤液浓缩至2 mL，作为供试品。取睡莲花药材2 g，同法制备睡莲花样品。另分别取烟花苷、紫云英苷对照品适量，加甲醇分别制成均含1 mg/mL 的对照品。同时制备阴性样品。吸取对照品溶液3 μL、供试品、阴性、睡莲花各7 μL，点于同一HSGF254 板，以乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶2）上层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液显色，105℃烘干，365 nm 下检视[7-9]，供试品色谱中，与对照品、睡莲花相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。见图1。

图1 木尼孜其赛甫拉合剂中睡莲花薄层色谱图

2.1.2 菊苣根、菊苣子 取木尼孜其赛甫拉合剂20 mL，加石油醚（60～90℃）30 mL，超声30 min，滤过，取续滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯∶甲醇（1∶1）混合液1 mL 溶解，作为供试品。另取菊苣对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。同时制备阴性样品。吸取上述溶液各10 μL，点于同一GF254 板，以石油醚-二氯甲烷（1∶4）为展开剂，4℃下展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液显色，105℃烘干，于365 nm 下和日光下检视[10-16]，供试品色谱与对照药材相应位置上，显相同颜色的荧光斑点或斑点。见图2。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 Inertsil ODS-SP 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-0.2%H3PO4水溶液（9∶6∶85）；342 nm，1.0 mL/min；柱温：30℃[17-22]。

2.2.2 对照品的配制 取秦皮乙素适量，精密称定，置棕量瓶中，加甲醇制成1 mL∶800 μg 的对照品贮备液。

图2 木尼孜其赛甫拉合剂中菊苣根、菊苣子薄层色谱图

2.2.3 供试品 精密吸取木尼孜其赛甫拉合剂2 mL 置10 mL 棕量瓶中，甲醇稀释定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性样品 按处方比例，取除地锦草、菊苣根、菊苣子、天山堇菜外的其余药味，按照木尼孜其赛甫拉合剂制备方法制得阴性样品。

2.2.5 专属性 分别精密吸取秦皮乙素对照品、供试品、阴性样品测定。结果阴性样品色谱峰在秦皮乙素相应的保留时间未出峰，表明该方法专属性好。见图3。

图3 阴性样品、秦皮乙素对照品、木尼孜其赛甫拉合剂高效液相色谱图

2.2.6 线性关系 取对照品贮备液逐步稀释成163.04、81.52、40.76、20.38、10.19、5.09 μg/mL 的标准溶液。浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，Y=39 920X+9163，r=1.0 000，表明秦皮乙素在浓度5.09～163.04 μg/mL 内线性关系良好。

2.2.7 精密度 取秦皮乙素对照品溶液连续进样6 次，RSD 为0.19%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 重复性 取同一木尼孜其赛甫拉合剂制备6 份供试品进样，RSD 为1.34%，表明该方法重复性好。

2.2.9 稳定性 取同一木尼孜其赛甫拉合剂，分别于0、2、4、6、8、12 h 进样，RSD 为0.44%，表明供试品在12 h 内较为稳定。

2.2.10 加样回收率 精密量取已知含量的木尼孜其赛甫拉合剂9 份，分别加入高、中、低浓度的秦皮乙素对照品溶液，混匀，加甲醇稀释定容，测定，平均回收率为100.99%，RSD 为1.56%。见表1。

表1 加样回收率（n=9）

2.2.11 样品含量测定 取7 批木尼孜其赛甫拉合剂处理后测定，按外标法计算，结果7 批木尼孜其赛甫拉合剂中秦皮乙素平均含量为0.1032 mg/mL。

3 讨论

木尼孜其赛甫合剂是新疆维吾尔自治区各地维吾尔医医院常用的院内制剂，疗效得到了广大患者的认可，但因质控标准低，造成成品质量差异较大，层次不齐。本研究对处方中的各药材进行成分分析、比对，采用薄层色谱法及高效液相色谱法进行定性定量研究。木尼孜其赛甫拉合剂中睡莲花的TLC 鉴别以乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶2）上层为展开剂，喷硫酸乙醇溶液显色后，供试品与对照品在相同位置显相同斑点。木尼孜其赛甫拉合剂中菊苣子和菊苣根的TLC 鉴别，耐用性试验表明温度对展开效果影响较大，4℃温度下展开效果及分离度最佳，斑点清晰。秦皮乙素是菊苣、天山堇菜、地锦草等药材的共有有效成分，研究[23-25]发现秦皮乙素具有良好的抗炎、抗菌、抗氧化及抗肿瘤活性等药理作用。本研究以秦皮乙素为指标性，优选出最佳色谱条件，色谱峰保留时间适中，分离度较好，能够满足分析要求。所建立的定性定量方法可作为木尼孜其赛甫拉合剂的质控标准，为其临床用药的安全性、有效性提供质量保证。