血清GP-2、hs-CRP、HMGB1联合检测在重症胰腺炎早期诊断中的价值

周莹 朱传卫 张良 孙小虎

急性胰腺炎是临床上常见的一种高发急腹症，约80%患者病情较轻，主要表现为胰腺水肿，预后良好，另10%～20%病情严重患者，常继发腹膜炎、休克、感染等，病死率较高属于重症急性胰腺炎[1]。近年来，随着医疗技术进步，重症急性胰腺炎的病死率有所降低，但由于其早期诊断缺乏灵敏、准确方法，预后仍较差[2]。因此，提高重症急性胰腺炎早期诊断效率具有非常重要的临床意义。已证实急性胰腺炎患者血清糖蛋白2(glycoprotein，GP-2)、超敏C-反应蛋白(hypersensitive c-reactive protein，hs-CRP)和高迁移率族蛋白B1(high mobility family protein B1，HMGB1)水平异常，与病情严重程度有关，在重症急性胰腺炎诊断中具有一定的价值[3,4]。但三者联合检测是否能够提高重症急性胰腺炎的早期诊断效率尚不清楚，本研究分析重症急性胰腺炎患者血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平，探讨其联合检测在重症急性胰腺炎早期诊断中的价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年3月至2019年6月在本院诊治的99例急性胰腺炎患者作为研究对象，其中重症胰腺炎50例(重症组)，轻症胰腺炎49例(轻症组)。重症组男31例，女19例；年龄55～76岁，平均年龄(64.53±9.86)岁；轻症组男29例，女20例；年龄53～80岁，平均年龄(63.91±8.89)岁。另选同时期体检各项生命体征均正常的45例健康者作为对照组，其中男27例，女18例；年龄50～80岁，平均年龄(65.04±10.13)岁。3组性别比、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P<0.05)，具有可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)患者均符合《急性胰腺炎诊治指南(2014)》中诊断标准[5]；(2)重症组急性生理与慢性健康评分(APACHE-Ⅱ)≥8分；(3)受试者及其家属对本研究知情并签署知情同意书。排除标准：(1)急性肠梗阻、急性阑尾炎、消化道溃疡穿孔、急性胆囊炎和胆石症等急腹症；(2)合并有糖尿病、高血压等；(3)合并心、肝、肾等系统疾病；(4)长期服用糖皮质激素、利尿剂等；(5)患有肝硬化、慢性胰腺炎和恶性肿瘤；(6)患有血液系统疾病或自身免疫性疾病。本研究经宣城市中心医院伦理委员会批准。

1.3 方法 采集患者入院第2天空腹时肘静脉血5 ml，健康者体检当日采集肘静脉血5 ml，采集血样均在3 h内，离心，分离血清保存。

1.3.1 指标检测:取上述血清，采用DNM-9602酶标仪(北京普朗有限公司)检测血清糖蛋白2(glycoprotein 2，GP2)水平；酶联免疫吸附法(ELISA)检测高迁移率族蛋白B1(high mobility family protein B1，HMGB1)，人HMGB1 ELISA试剂盒来自于日本Shino Test公司；采用FS-112飞测Ⅱ(免疫荧光检测仪，广州万孚生物技术股份有限公司)检测血清超敏C反应蛋白(hypersensitive c-reactive protein，hs-CRP)水平。

1.3.2 疾病严重程度评估:①APACHE-Ⅱ评分[6]：该评分包括急性生理评分、慢性健康评分和年龄评分3部分，理论最高值71分，分值越高说明病情越严重。②Balthazar CT评分(CTSI)[7]：该评分包括CT评分5级：A级胰腺正常记0分，B级胰腺实质改变(局部或弥漫的胰腺腺体增大)记1分，C级胰腺实质改变及周围炎症、渗出记2分，D级胰腺周围渗出明显、胰腺内外出现单个液体积聚记3分，E级胰腺内外大量积液、出现胰腺脓肿、坏死记4分；③坏死评分4项：胰腺无坏死记0分，30%以下胰腺坏死记2分，30%～50%胰腺坏死记4分，50%以上胰腺坏死记6分。评分范围0～10分，评分越高说明病情越严重。

2 结果

2.1 3组血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平 重症组和轻症组血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平均显著高于对照组(P<0.05)，重症组血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平均显著高于轻症组(P<0.05)，3组血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平比较

2.2 急性胰腺炎患者APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分 重症组APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分均高于轻症组，2组APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 急性胰腺炎不同分组患者APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分比较 分,

2.3 急性胰腺炎患者血清指标与病情评分的关系 急性胰腺炎患者血清GP-2与APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分分别呈显著正相关关系(r=0.709、0.758，P=0.001、0.000)，血清hs-CRP与APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分分别呈显著正相关关系(r=0.654、0.692，P=0.009、0.005)，血清HMGB1与APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分分别呈显著正相关关系(r=0.791、0.819，P=0.000、0.000)。见表3。

表3 急性胰腺炎患者血清指标与病情评分的相关性分析

2.4 血清GP-2、hs-CRP和HMGB1单独及联合诊断重症胰腺炎的效能 血清GP-2单独诊断重症胰腺炎的ROC AUC为0.739，敏感性为64.81%，特异性为76.17%；血清hs-CRP单独诊断重症胰腺炎的ROCAUC为0.699，敏感性为56.92%，特异性为79.59%；血清HMGB1单独诊断重症胰腺炎的ROC AUC为0.796，敏感性为66.67%，特异性为79.76%；血清GP-2、hs-CRP和HMGB1联合诊断重症胰腺炎的ROC AUC为0.866，敏感性为76.47%，特异性为85.71%。联合诊断的效能最高。见图1，表4。

图1 血清GP-2、hs-CRP和HMGB1单独及联合诊断重症胰腺炎的ROC曲线

表4 血清GP-2、hs-CRP和HMGB1单独及联合诊断重症胰腺炎的效能

3 讨论

GP-2是胰腺酶原颗粒膜的主要成分之一，通过糖基-磷脂酰肌醇(GPI)在膜上固定，人类GP-2存在两种亚型：GP-2a和GP-2t，胰腺正常分泌时，GP-2释放进入胰导管，当胰腺发生急性炎症时，局部结构被破坏，GP-2释放进入血液导致血清GP-2水平升高[8]。Roggenbuck等[9]研究表明，急性胰腺炎患者血清GP2a和GP-2t水平均显著升高，重症患者显著高于轻症患者，提示GP2a对急性胰腺炎具有较高的诊断准确性。本研究结果，重症组和轻症组患者血清GP-2水平显著高于对照组，重症组血清GP-2水平显著高于轻症组，说明急性胰腺炎患者血清GP-2水平明显升高，且在重症患者中升高更加明显。APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分是目前常见的用于急性胰腺炎病情严重程度评估的评分系统，对早期评估患者病情严重程度具有较高的准确性[10]。本研究对患者进行APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分，结果重症组APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分均显著高于轻症组，相关性分析显示，血清GP-2与APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分分别呈显著正相关关系，说明血清GP-2与胰腺炎患者病情严重程度密切相关，病情越严重血清GP-2水平越高，与以往研究结果一致。进一度ROC曲线分析显示，血清GP-2a单独诊断重症胰腺炎的ROC AUC为0.739，敏感性为64.81%，特异性为76.17%，其诊断特异性较好但敏感性较差。

HMGB1是HMG家族中含量最多的一种核结合蛋白，遍布机体脾脏、肺、淋巴、胸腺等组织，由215个氨基酸组成，含有A-box和B-box 2个结合域，是多种疾病的生物标志物和药物靶点[11]。正常生理条件下，HMGB1主要存在于细胞核和细胞膜，发挥促进核小体互动，基因转录、促进细胞迁移、轴突生长等作用[12]。而病理状态下，机体受刺激后HMGB1由免疫细胞分泌到细胞外，另外受损或坏死细胞细胞核中HMGB1也被释放到细胞外，参与免疫、炎症、浸润等病理过程[13]。研究表明，急性胰腺炎中炎性反应是通过胰腺酶原和核因子kB的细胞内活化引起的，其炎性反应可扩大至全身炎症高反应综合征(SIRS)和器官功能障碍[14]。近年来越来越多的研究表明，HMGB1参与并促进急性胰腺炎从局部炎症到发生SIRS的过程，并对患者预后产生不良影响[15]。本研究结果，重症组和轻症组血清hs-CRP和HMGB1水平均显著高于对照组，重症组血清hs-CRP和HMGB1水平均显著高于轻症组，说明重症急性胰腺炎患者血清hs-CRP和HMGB1水平明显升高更加明显，相关性分析显示，血清hs-CRP、HMGB1与APACHE-Ⅱ评分和CTSI评分分别呈显著正相关关系，说明血清血清hs-CRP、HMGB1与急性胰腺炎患者病情严重程度密切相关。

韩晓禹等[16]研究报道，血清CRP诊断急性胰腺炎的灵敏度为64.2%，特异度为86.5%。张亭等[17]研究报道，血清hs-CRP诊断重症急性胰腺炎后期感染性胰腺坏死的敏感度为85.2%，特异度为82.6%，提示早期检测血清hs-CRP对重症急性胰腺炎后期感染性胰腺坏死具有较好的诊断价值，周小娜等[18]也有类似报道。本研究ROC曲线分析显示，血清hs-CRP诊断重症胰腺炎的敏感性为56.92%，特异性为79.59%，略低于前人研究，可能是因为检测技术水平差异及病例较少。重症急性胰腺炎血清HMGB1水平与患者肠黏膜屏障损害、肾功能损害、内皮细胞活化等并发症密切相关[19]。严苹等[20]研究报道，HMGB1诊断重症急性胰腺炎的特异性达93.1%。本研究ROC曲线分析显示，血清HMGB1诊断重症胰腺炎的66.67%，特异性为79.76%，均高于GP-2和hs-CRP单独检测。本研究为进一步分析发现，三者联合诊断重症急性胰腺炎的敏感性为76.47%，特异性为85.71%，其诊断敏感性和特异性均升高。

综上所述，重症急性胰腺炎患者血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平均显著高于轻症患者，联合检测血清GP-2、hs-CRP和HMGB1水平能够弥补单项检测敏感性低的缺陷，提高诊断准确性，对病情作为准确判断，有助于早期干预治疗，降低患者病死率，改善预后。本研究不足之处在于样本量较少，结果可能存在一定偏倚和局限，下一步将继续扩大样本深入探究。