肺腺癌中miR-22-3p的表达及与CT征象的相关性

鲍志国 雷威

肺癌已成为我国发生率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中肺腺癌发病率占原发性肺癌的30%左右，因此早期诊断并积极治疗对改善患者预后具有重要意义[1]。螺旋CT 在检查及诊断肺癌中具有准确率高且创伤性小等优点[2]。近年来随着分子生物学飞速发展，微小RNA 研究在临床日益增多，属于小的非编码的RNA 能够靶向调控mRNA 影响蛋白表达，形成相应的生物学改变，在不同组织中对细胞生长、细胞周期及细胞分化进行影响，还可以作为促癌因子或者抑癌因子参与恶性肿瘤的发生、发展和转移过程。miR-22-3p 可通过下调靶基因抑制肝癌的增殖和转移，但其在肺腺癌中的研究较少[3]。本研究分析了肺腺癌中miR-22-3p表达水平，同时和CT征象进行对比研究，探讨两者之间的关系，以期为临床提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2017年1月～2019年3月我院保存的肺腺癌组织标本98例，其中男55例，女43例；年龄＜60岁者45例，≥60岁者53例；病灶＜3cm 者50例，≥3cm 者48例。同时选取癌旁组织（距癌组织边缘＞5cm）30例作为对照。纳入标准：①均经病理学确诊为肺腺癌；②初次发病；③临床影像资料保存完整；④术前无放化疗等抗肿瘤治疗史。排除标准：①有其他系统恶性肿瘤；②有心、肝、肾等其他重要脏器疾病。

1.2 方法患者均行平扫加强化扫描，仪器为德国西门子Samatom Sensation 16层螺旋CT机，从肺尖直至肺底区域进行检查，扫描参数设定：螺距1.08，电压120kV，电流250mA，重建层厚5mm，扫描时间为5～7s，矩阵512×512。同时开展高分辨率靶扫描，参数设定：螺距0.64，电压120kV，电流300mA，重建层厚1mm，扫描时间为5～7s，矩阵1 024×1 024，按照高分辨算法进行计算。采用双盲法进行阅片，由影像科主治医生和副主任医师进行分析，对肺结节、支气管开展观察，若有分歧进行讨论获取一致意见。

1.3 RT-PCR检测对肺腺癌肿瘤组织和癌旁组织的总RNA 按照MirNeasy Mini Kit 试剂盒说明书进行提取，总RNA 的浓度和纯度由紫外分光光度计检测。按照TaKaRa 公司提供的试剂盒说明书上的反应条件设置温度，在PCR 仪上进行cDNA 逆转录。PCR反应过程：激活聚合酶50℃ 2min，预变性95℃30s；变性95℃ 5s，退火和延伸60% 34s，经过40个循环扩增。按照2-△△CT凹法对结果进行分析，计算肺腺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中表达情况。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0 软件，miR-22-3p相对表达量采用表示，组间比较采用t检验，miR-22-3p 相对表达量与临床分期、淋巴结转移、胸膜凹陷征和血管集束征相关性采用Spearman 秩相关分析。检验水准α 为0.05。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺腺癌和癌旁组织miR-22-3p表达比较肺腺癌组织miR-22-3p 相对表达量0.544±0.112 明显低于癌旁组织1.011±0.106，差异有统计学意义（t=20.228，P＜0.05）。

2.2 miR-22-3p表达与肺腺癌临床病理资料关系临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的肺腺癌组织miR-22-3p 相对表达量明显低于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的肺腺癌组织，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 miR-22-3p表达与肺腺癌临床病理资料关系

2.3 miR-22-3p表达与CT征象的关系miR-22-3p相对表达量与胸膜凹陷征、平扫CT值、血管集束征有一定关系（P＜0.05），见表2。

表2 miR-22-3p表达与CT征象关系

续表2

2.4 相关性分析miR-22-3p 相对表达量与临床分期、淋巴结转移、胸膜凹陷征和血管集束征呈负相关（r=-0.454、-0.473、-0.357 和-0.360，P＜0.05）。

3 讨论

近年来肺癌发病率呈升高趋势，危及患者生命安全，因此对于肺癌早期诊断、精确分期和合理治疗至关重要[3，4]。对肺癌进行快速有效的早期诊断是降低肺癌病死率的重要手段[5，6]。螺旋CT 检查在肺癌诊断中发挥了很大作用，CT 可以显示某个断面组织密度，分辨率高，受组织结构的干扰较小，该方法利用X 线球管连续性的旋转曝光并配合纵轴的匀速移动完成螺旋形空间分布的扫描并进行数据采集[7]。肺腺癌在管腔内呈现息肉状、菜花样新生物突起，因此CT 容易出现肺不张征象，而小细胞肺癌则表现为血管怒张，黏膜粗糙肥厚，容易出现管腔狭窄，但是完全闭塞导致的肺不张较少见[8]。CT值是实体瘤的密度评价指标，主要由组织成分决定，由于肿瘤具有丰富的新生血管，缺乏平滑肌细胞与神经支配，仅由不完整基底膜内皮细胞组成，因此利用造影剂进入新生血管及裂隙后使病灶强化[9]。

近年来分子生物学的飞速发展使血清学指标成为肺腺癌诊断的理想方法，需求更为敏感、可靠的分子生物学指标为临床提供诊疗依据一直是研究的热点。微小RNA 属于小的、非编码RNA，可以结合靶向mRNA3'非翻译区域诱导翻译机制，靶向调控mRNA 影响蛋白的表达过程，导致相应生物学变化[10]。目前已经证实miR-22-3p 能够下调靶基因抑制肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭，在食管癌患者中起到抑癌因子的作用，表达升高对延长患者生存时间具有重要意义[11]。有学者发现miR-22-3p 对细胞的凋亡不会产生明显的影响，其在肺腺癌中抑制微小RNA 可以促进肺腺癌细胞前移和转移，影响肺腺癌发展。还有学者利用双荧光素酶报告实验发现，在视网膜母细胞癌中miR-22-3p 与ENO1 烯醇化酶之间具有结合位点，其对ENO1 表达有直接的负调控作用，可以影响视网膜母细胞癌细胞增殖过程[12]。

本研究分析miR-22-3p 同肺腺癌CT征象之间的关系，分叶征是肺腺癌的主要征象，主要是肿瘤生长不均或多核发病及相互融合或肿瘤组织受周围肺组织、血管、支气管阻挡造成，但是同miR-22-3p表达之间没有关系，这还需要进一步分析。空泡征同样是重要征象，主要是肿瘤结节内在CT 影像出现小灶性透光区域，肿瘤直径越小，空泡征发生率越高，但是与miR-22-3p表达之间没有关系，提示空泡征与肿瘤恶性生物学行为之间意义不大[13]。胸膜凹陷征则是肿瘤同胸膜之间线形或三角形影像变化，主要是肿瘤内纤维化导致，新生肿瘤血管结构不完整，血管内皮间隙较大，血液中纤维蛋白更容易渗透进入组织间隙，恶性肿瘤细胞增殖加速会造成组织内缺氧，形成病变纤维化收缩[14]。miR-22-3p表达同胸膜凹陷征关系密切，提示具有胸膜凹陷征肺腺癌患者恶性程度高，但是也有学者持反对意见，还需要深入论证。血管集束征属于病灶近或远肺门侧1～3 条增粗的线条影朝向病变部位集聚，在病灶的边缘截断或病灶边缘区出现点网状表现，其出现提示肿瘤供血血管增多、增粗或肿瘤已侵入相邻血管[15]。miR-22-3p 同血管集束征存在密切关系，提示miR-22-3p 对肺腺癌内血管状况及血流情况的反映，而且同肿瘤体内血管特别是小血管数量和密度关系密切，这同以往研究结果相似[15]。本研究通过相关性分析发现，miR-22-3p 相对表达量与临床分期、淋巴结转移、胸膜凹陷征和血管集束征呈负相关，提示了肺腺癌患者CT征象同miR-22-3p表达量之间相关联，可以通过测定miR-22-3p 浓度对患者临床分期以及淋巴结转移等情况进行早期预判。

本研究发现，肺腺癌组织miR-22-3p 相对表达量明显低于癌旁组织，说明在肺腺癌患者中存在miR-22-3p 低表达，这和以往研究结果相似[16]。通过与肺腺癌患者病理资料关系进行分析发现，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的肺腺癌组织miR-22-3p 相对表达量明显低于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的肺腺癌组织，说明在分期靠后和出现淋巴结转移的肺腺癌患者肿瘤组织中miR-22-3p表达量降低。与CT 结果对比发现，有胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌组织miR-22-3p 相对表达量为0.487± 0.109 和0.481±0.106，明显低于无胸膜凹陷征、无血管集束征肺腺癌组织，说明存在胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌患者肿瘤组织中miR-22-3p表达量更低。本研究miR-22-3p 在肺腺癌组织中呈现低表达，但是本研究进一步证实了不同CT征象肺腺癌患者体内miR-22-3p表达情况存在差异，有助于临床对患者病情发展进行分析，这在以往的研究中较为少见。近年来随着肿瘤微小RNA研究领域的发展，通过分析微小RNA 作用关系为进一步阐明肿瘤发生发展的分子机制提供了新的切入点，有助于为肿瘤的治疗提供新的靶点。但由于入组患者数量有限，需要进一步扩充样本量并在微小RNA 潜在作用机制上深入分析。

综上所述，肺腺癌中miR-22-3p表达下调，与临床分期、淋巴结转移、胸膜凹陷征和血管集束征有关。