VITEK-2全自动微生物鉴定仪在蜡样芽孢杆菌检测中应用分析

铁岭市疾病预防控制中心 （ 辽宁 铁岭 112000）

内容提要： 目的：分析蜡样芽胞杆菌采用VITEK-2全自动微生物鉴定仪检测的结果。方法：使用标准方法对蜡样芽胞杆菌的标准菌株、阳性菌株检测，使用VITEK-2全自动微生物鉴定系统检测，对比两种检测方法的检出时间和检出率。结果：标准方法与VITEK-2全自动微生物鉴定仪在19株蜡样芽胞杆菌检测中符合率为100.00%，缩短检测时间为7～47h。结论：VITEK-2全自动微生物鉴定系统在鉴定蜡样芽胞杆菌中具有较高的准确性，且检测速度更为快捷，操作步骤更为简便等特点，对于食源性疾病监测、食物中毒检测工作中更适合。

在芽胞杆菌中包括蜡样芽孢杆菌，存在于土壤、水、空气以及动物肠道，菌体细胞呈现杆状，末端方，成短链（至少1.0～3.0μm）或长链（1.2～3.0μm），适宜生长温度在20～45°C，若生长温度在10°C以下则会减慢生长速度或者停止生长。现阶段关于蜡样芽孢杆菌细菌的报道中，多以食源性疾病为主，在食物中检出此细菌的概率较大。若人体过多摄入蜡样芽孢杆菌细菌，会增大食物中毒症状的发生概率。所以，进行蜡样芽孢杆菌细菌的快速、精准检测，对于保障人们健康有着至关重要的影响。蜡样芽孢杆菌细菌分布范围较广，是菌体细胞中典型的一种，某些菌株可生出1.5μm有色杆状肠毒素，其孢子为椭圆形，会出现腹泻型胃肠炎肠毒素和致呕吐型胃肠炎肠毒素两类，因此，对于该细菌的检查对临床具有重要的意义。对于VITEK-2检测仪的应用，能在避免人为误差发生的同时，通过对反应结果自动读取、生成，实现对食源性疾病的高效检测。且相较于传统API生化鉴定的应用，VITEK-2检测仪的准确性更高。目前对于蜡样芽孢杆菌的检查通常采用检验室标准的方法，VITEK-2全自动微生物鉴定系统检测是今年发展起来的检查方法，而本次研究为了改善蜡样芽胞杆菌的检测结果，利用并分析VITEK-2全自动微生物鉴定系统和标准方法检测蜡样芽胞杆菌阳性菌株及蜡样芽胞杆菌的结果，内容如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 菌株来源

本单位工作中分离、疾控中心、中国药品生物制品鉴定所、中国普通微生物菌种保藏中心分别提供10株、5株、2株、2株蜡样芽胞杆菌。

1.1.2 培养基和检测仪器

VITEK-2全自动微生物鉴定仪、浊度仪（型号XA22-STZ-A1）、BAC芽孢杆菌鉴定卡（型号REF V1304：20张卡片/盒）。

1.2 方法

1.2.1 标准方法。根据GB/T4789.14-2003蜡样芽胞杆菌的方法检测，选取GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂，使用GB//T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定。

1.2.2 VITEK-2全自动微生物鉴定仪检测。复苏1 9株蜡样芽胞杆菌阳性菌株和苏云金芽孢杆菌1菌株，在甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基上接种，温度32°C，时间13h，选取典型菌落，划线并分离，置于血琼脂平板和含有多黏素菌B的琼脂平板上，温度、时间分别为32°C、13h，实施溶血和纯培养试验。分离纯培养的菌株，同氯化钠0.9%溶液+菌苔充分混匀，调菌悬液至0.3～0.5麦氏度，置于鉴定卡架上，连接菌液管和BAC鉴定卡，输入鉴定卡信息至VITEK-2全自动微生物鉴定系统，鉴定卡置入仪器充填室实施自动填充，完成后将鉴定卡取出置入孵育室实施自动培养和检测，15～18h后得到结果。

2.结果

2.1 检测结果

蜡样芽胞杆菌19株在营养琼脂平板（包含多粘菌素B）菌落形态是融蜡状、边缘不整、不透明、灰白色。

2.2 蜡样芽胞杆菌采取标准方法检测

2.2.1 证实试验。革兰阳性杆菌，芽胞全部在菌体内。明胶液化、动力、硝酸盐还原、厌氧下葡萄糖发酵、过氧化氢酶、甘露醇分别为（+）、（+）、（+）、（+）、（+）、（-）。

2.2.2 鉴别苏云金芽孢杆菌试验。红色结晶小体和游离芽胞均不存在，结果是阴性。

2.3 VITEK-2全自动微生物鉴定仪系统检测蜡样芽胞杆菌

19株菌株的鉴定结果：调兵山8#菌株、7#菌株98%蜡样芽胞杆菌；调兵山10#菌株、11#菌株、9#菌株、6#菌株、5#菌株、1#菌株，开原2#菌株、3#菌株、4#菌株96%蜡样芽胞杆菌；调兵山2#菌株、3#菌株、4#菌株，开原1#菌株91%蜡样芽胞杆菌。标准1#菌株、标准2#菌株分别为100%蜡样芽胞杆菌、100%苏云金芽孢杆菌。鉴定时间为15h。

3.讨论

蜡样芽胞杆菌摄入量直接影响到患者食物中毒的发生概率，以＞105CFU/g（mL）为标准值，若人体蜡样芽胞杆菌摄入量超过上述阈值，极易引起食物中毒现象的发生。具体症状表现为类似于金黄色葡萄球菌的呕吐型和以及类似于气荚膜梭菌的腹泻、腹痛型，不同症状的潜伏期不同。

标准的检验蜡样芽胞杆菌的方法中，病原菌鉴定利用生化性状观察形态、培养特性等证实试验进行鉴定，在具体工作中，因为复杂的检测样本和蜡样芽胞杆菌导致的中度症状是非特异性，鉴定病原菌工作具有很大难度，常常需要利用较多项技术实施综合验证和判断[1]。同时在标准方法中，鉴别苏云金芽孢杆菌也比较繁琐同时鉴定时间大大延长，是由于此类均同蜡样芽胞杆菌生化特性、培养形态相似度较高[2]。

VITEK在检测蜡样芽胞杆菌是利用VITEK-2鉴定系统生化鉴定纯培养的菌落[3]。生化反应项目超过30项，较标准方法生化反应项目多很多[4]。本研究结果可知，19株蜡样芽胞杆菌、阳性标准菌株VITEK可信度分别为96%、100%，根据有动力特征性反应、强溶血、典型的纯培养菌落特征，可对VITEK的鉴定结果进行证实。同时完成鉴别苏云金芽孢杆菌。所以利用VITEK鉴定蜡样芽胞杆菌使实验步骤减少，降低实验结果受到不良因素影响而出现的误差概率，缩短检测时间，较标准方法检测节省7～47h[5]。

VITEK特点为重复性、操作简单、敏感性、特异性、认为误差小，同时可自动分析、定期扫描、联机孵育[6]。本研究利用VITEK快速鉴别蜡样芽胞杆菌，验证了标准方法和形态学，说明其准确性和可靠性[7]。所以，给予VITEK鉴定可快速鉴别食品中的蜡样芽胞杆菌。

利用标准方法鉴定食物中毒病原菌需要时间较长，工作量大，尽管有时会将可疑菌株分离出来，但是因为条件不具备、经验不丰富等原因对于正确的判断很难实现[8]。对VITEK充分利用，按照蜡样芽胞杆菌的生化特性和培养可短时间内鉴定，并减少人工，在检测较多样本时保证有序和冷静的检验。保证检测报告及时且准确，将科学依据提供给食源性疾病的处理工作中，应用价值较高。