抑癌基因PTEN在非小细胞肺癌中表达及其与非小细胞肺癌的相关性

吴春娇 马丽霞 王艳萍 柳影

(吉林省肿瘤医院，吉林 长春 130012)

非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中最为常见，约占全部数量的80%～85%，其发病率和病死率常年居高不下〔1〕。随着医学的飞速发展，NSCLC的治疗已取得相当进展，但整体预后仍不乐观，5年生存率未达15%〔2〕。研究表明，肺癌的发生发展与多因素的参与有关，是一个多阶段过程，而细胞癌变的分子基础多为原癌基因的激活与抑癌基因的失活，因此，基于肺癌相关基因的研究引起了广泛重视。近年来随着对肿瘤发病机制的深入研究及分子生物学的快速发展，多种原癌基因和抑癌基因被发现。Li等〔3〕先后从人类第10q23.3染色体位点上分离克隆得到了3种新的抑癌基因，分别命名为第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因、多进展期癌中发生突变的基因(MMAC)1、转化生长因子(TGF)-β调节的上皮细胞富含的磷酸酶(TEP1)，后发现3者均定位于第10q23.3染色体，并且具相同编码蛋白，证实为同一基因，统称“PTEN”。PTEN是继p53基因后新发现的又一肿瘤抑癌基因，目前该基因与NSCLC的关系众说纷纭，但多项研究结果支持NSCLC中PTEN蛋白下降或缺失〔4～6〕，本研究观察了NSCLC组织中PTEN的表达变化并进行了相关性研究。

1 材料与方法

1.1临床资料 入组选择：2016年3～12月吉林省肿瘤医院收治的NSCLC患者29例，其中男20例、女9例；年龄56～75岁，中位年龄63岁，其中>70岁10例；组织学类型为鳞癌12例、腺癌17例；分化程度为高分化8例、中分化3例、低分化18例；临床分期依1997年国际抗癌联盟TNM分期标准〔7〕分别为：Ⅰ期5例、Ⅱ期7例、Ⅲ期17例；患者术前未经化疗及其他抗肿瘤治疗，均行肿瘤切除术，术中留取肿瘤组织标本，同时留取相应癌旁正常组织(取自距肿瘤组织边缘不少于4 cm处)设为对照组。组织标本以10%的中性甲醛固定，制备石蜡包埋切片。

1.2实验试剂 兔抗人PTEN单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，免疫组化及二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3实验方法 采用SP免疫组化法进行PTEN检测。所有操作严格按试剂盒说明书进行：柠檬酸缓冲液修复，浓缩型DAB试剂显色，苏木素复染。阳性对照组选择已知受检蛋白为阳性的病理切片；阴性对照组以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗完成检测。中性树胶封片。显微镜下观察结果。结果判定根据文献〔8〕：显色细胞比例及染色强度分别计1～3分，以两项乘积≥3计为阳性；<3计为阴性。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0软件进行χ2检验。

2 结 果

2.1肿瘤组织及癌旁组织中PTEN表达 PTEN的阳性产物主要表达在细胞核中，表现为细胞核染为棕黄色。肿瘤组织及相应癌旁组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为34.48%(10/29)和68.97%(20/29),差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2肿瘤组织中PTEN表达与临床病理特征的相关性分析 PTEN表达与患者年龄、性别、病理分型及分期未见统计学相关，与肿瘤分化程度呈显著相关(P<0.05)。见表1。

表1 PTEN在NSCLC 组织中的表达与临床病理特征相关性(n)

3 讨 论

目前发现与肺癌相关的原癌基因有鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Ras)基因、原癌基因蛋白质c-Pim-1(Pim-1)基因、原癌基因人表皮生长因子受体(Her)2基因等，均被证实在肺癌中呈高表达，而几种抑癌基因如相关抑癌基因如P16、肿瘤转移抑制基因(nm)23、P53、PTEN等在肿瘤发生早期均不同程度的失活或缺失异常，提示抑癌基因的异常可作为肺癌早期诊断的生物标志物之一，对肺癌的及时发现与治疗意义重大〔9〕。

PTEN是目前发现的第一个具有双重磷酸酶活性的抑癌基因，被认为是继P53基因后突变率最高的肿瘤抑癌基因，PTEN可抑制肿瘤细胞的迁移和肿瘤组织内血管生成，有效维持机体免疫系统的稳定与平衡，PTEN突变、纯合性或杂合性缺失等均能引起其异常表达〔10,11〕。研究显示，人类的多种肿瘤中出现PTEN基因失活，从而导致其丧失应有的抑癌作用，而且PTEN的低表达或者异常缺失则导致肿瘤细胞对化疗药物的耐药及对放疗抵抗〔12,13〕；而PTEN的增加则可以提高肿瘤细胞对辐射的敏感性，联合PTEN与γ射线照射疗法可以有效抑制AKT的表达，抑制肿瘤细胞DNA的修复，提高肿瘤杀伤率〔14〕。PTEN基因在肿瘤的发生发展治疗及预后中均起到重要作用〔15〕，虽然目前有关PTEN蛋白表达与肺癌相关性研究结论不一〔3,4〕，但都一定程度地反映了PTEN表达缺失与NSCLC的发生发展有关。

研究证实，病情发展及预后受肿瘤的分化程度、临床分期、有否淋巴结转移等诸多因素影响，本研究结果亦提示NSCLC患者肿瘤中PTEN水平与如上部分因素的相关性，表明PTEN的表达与NSCLC发生发展具重要关联，有可能成为NSCLC的早期诊断与判断病情发展及预后的独立预测指标。

本实验因样本数有限，关于PTEN与NSCLC组织学分型、临床病理分期及有否淋巴结转移的相关性及PTEN与其他癌基因、抑癌基因的相互作用关系有待进一步研究考证；对PTEN在NSCLC中的缺失机制及在亚细胞分布的调节机制、特别是miRNA对PTEN的调节机制及PTEN的抑癌机制和其与肺癌的相互作用等等方面都需进一步深入研究，从而为肺癌的早期诊断和基因治疗提供更多的思路与方法。