34例儿童重症肺炎经支气管镜下行快速现场评价后不同病原菌感染的特征性分析

靳蓉 陈敏 程星 孙永烽 王琦 吴炜

(贵阳市妇幼保健院贵阳市儿童医院呼吸科，贵州 贵阳 550002)

重症肺炎是严重威胁我国儿童生命健康的呼吸系统疾病，引起重症肺炎的病原菌多种多样：细菌[1]、病毒[2]、支原体、真菌[3]、寄生虫及非典型病原菌均可导致，早期诊断具有一定困难；尤其是病原学的诊断，一直以来都是临床医生面临的棘手问题[4]。快速现场评价技术(ROSE)因其借助于支气管镜下取材，经特定染色后，由受训的临床医师通过显微镜观察病灶部位细胞的分类、计数、背景及微生物学形态等特征，对疾病作出评价和诊断的实时快速细胞学判读技术[5]。本研究通过总结儿童重症肺炎经支气管镜下行快速现场评价后不同病原菌感染的特点。

1 资料与方法

1.1一般资料 入选对象均符合《2019年版儿童社区获得性肺炎诊疗规范》中重症肺炎诊断标准。选取我院2019年6月至2019年12月符合上述诊断标准的住院患儿34例，入院后第1～7天在家长知情同意后经支气管镜下行快速现场评价，其中男患儿22例，女患儿12例；0～3岁19例，4～6岁12例，7～15岁3例，平均年龄(4.7±1.3)岁。所有患儿一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)

1.2设备 根据患儿年龄及体重选择不同型号的支气管镜：年龄≤3岁，体重≤15 Kg，选择Olympus BF-P260F型号(外径为2.8 mm，内径1.2 mm)的支气管镜，年龄>3岁，体重>15 Kg，选择Olympus BF-P40型号(外径为4.0 mm，内径2.0 mm)的支气管镜；迪夫快速细胞染色液AB液(珠海贝索生物技术有限公司)；显微镜(Olympus CX-33)及佳能700D数码成像系统;“冯氏”防污超细毛刷。

1.3方法 所有研究对象均于晚12时后禁食禁饮，次日空腹行支气管镜检查。患儿取仰卧位，鼻导管吸氧，术中严密监测生命体征，应用利多卡因气管内黏膜表面局部麻醉的方法“边麻边进”行支气管镜检查术，按照《儿科呼吸内镜诊疗技术管理规范2013》，由我院呼吸内镜中心具备三级及以上支气管镜下操作资质的主治及以上职称医师按照规定流程行支气管镜检查，检查操作至影像学提示的病灶部位后快速推送“冯氏”防污超细毛刷，行病灶部位刷检。

1.4标本处理与结果判读 制片(细胞刷涂抹制片法)：经支气管镜活检孔道插入“冯氏”防污超细毛刷(F-PSB)，待毛刷前端送至病灶处后，迅速在病灶部位刷检，继之取出毛刷，将刷头推出，在医用玻片中下1/3处涂抹约1 cm×1 cm厚薄适度的圆形标本，每次刷检3张标本送检。染色：分别在玻璃染缸中制备迪夫AB溶液、磷酸盐缓冲液和清水。把玻片浸泡于迪夫A溶液(20 s～30 s)；再在磷酸盐缓冲液中洗掉迪夫A溶液；而后再把玻片浸泡于迪夫B溶液(30 s～40 s)；最后用清水洗掉染液，用吸水纸将玻片上残留的液体吸干。判读：由受训的临床医师用显微镜观察细胞成分、背景、聚类及形态。

2 结 果

34例重症肺炎患儿经支气管镜下行快速现场评价后判断为细菌感染的患儿17例(50%)；判断为病毒感染的患儿7例(20.58%)；判断为支原体感染的患儿4例(11.76%)；判断为混合感染的患儿3例(8.82%)；判断为非感染性疾病的患儿2例(5.88%)；判断为曲霉菌感染的患儿1例(2.94%)。

3 讨 论

引起重症肺炎的病原菌种类多样，加之抗生素、激素及免疫抑制剂的广泛使用，使病原体呈现了复杂化、多样化和耐药化的趋势，导致病原菌难以确定；其次，传统的病原微生物学检测手段在敏感度、特异度方面较低，且耗时长。快速现场评价技术(ROSE)是一项实时伴随于支气管镜检查中的病理学诊断技术，可分为快速现场细胞学评价(C-ROSE)和快速现场微生物学评价(M-ROSE)，其中M-ROSE在儿科领域更具实用价值[6]。现快速现场评价被越来越多的应用于呼吸道感染的病原学分析中，由于具有及时性，床旁即可得到意向性结果；同时操作简便，通过组织染色后细胞胞核与胞质所显现的不同颜色鉴别固有细胞与成分细胞，反应机体在炎症下的状态；也可以通过正常细胞和病原体之间形态学特点，甄别病原菌的种类；为临床诊断提供有力的病原学依据、指导治疗，避免误诊和漏诊[7]。

本研究通过分析儿童重症肺炎经支气管镜下行快速现场评价后不同病原菌感染的特点，总结出：细菌感染的重症肺炎患儿，快速现场评价下的特征性表现为：以变性、坏死、增生为主的细胞学背景，同时伴随大量中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞浸润为特点；病毒感染的重症肺炎患儿，快速现场评价下的特征性表现为：以细胞增生为主的细胞学背景，同时伴随多核巨噬细胞浸润[8-9]；支原体感染的重症肺炎患儿，快速现场评价下的特征性表现为：以单核细胞为主的细胞学背景，伴随多种炎症细胞的浸润，尤其是多核巨噬细胞及泡沫巨噬细胞浸润；真菌感染的重症肺炎患儿，快速现场评价下的特征性表现为：以坏死、变形为主的细胞学背景，曲霉菌感染可见典型的有隔膜、具折光性的菌丝[10]；非感染性疾病如哮喘表现为以嗜酸性粒细胞为主的细胞学背景。由于ROSE涉及较多儿童交叉学科，同时分析ROSE结果时还要有严密的临床专科逻辑整合能力；需结合病史、查体、影像学、实验室检查等结果综合分析，做出正确判断[11]。

综上，总结重症肺炎经支气管镜行快速现场评价后不同病原菌感染的特征，不仅为临床重症肺炎的微生物学诊断提供了直观的依据，指导治疗，也为今后进一步完善儿童快速现场评价标准提供一定的循证学依据。