香芹酚的解酒护肝作用的研究

易 杭 徐启钟 陈桢昌 欧仲越 谢晓桐 黄乐琪 朱晓琴

1 广州医科大学第二临床学院(广州 510045) 2 广州医科大学基础学院机能实验中心(广州 510045)

近年来，酒精性肝病发病率在我国有明显增多的趋势，世界卫生组织报告指出，全球每年因饮酒死亡的 280 万人中，中国男性占了一定的比例，对酒精的过度依赖已然成为了中国社会的严峻的问题之一[1- 2]。

香芹酚( carvacrol，CAR) 是对异基甲苯的衍生物，它的生物效应主要为抗菌和抗氧化[3- 4]。据报道，香芹酚对D-氨基半乳糖( D-Ga1N) 诱导的大鼠肝损伤及缺血再灌注肝损伤有保护作用[5]。香芹酚主要通过维持肝细胞膜结构的完整性和维持肝细胞内的氧化—抗氧化平衡，从而发挥保护作用。目前，对香芹酚的研究大多侧重于探索其抗菌作用以及对其他器官的抗氧化作用，尚未发现有关香芹酚通过抗氧化应激来发挥解酒护肝功效的报道。本研究拟通过小鼠实验，探讨香芹酚的解酒护肝作用。

1 资料与方法

1.1 主要实验材料

香芹酚(浓度：99%，Macklin生产)；阳性对照药：海王金樽片，深圳市海王健康科技发展有限公司。水飞蓟宾(Macklin生产) ；56°红星二锅头(北京红星股份有限公司)。超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、 丙二醛(MDA)测试盒(Elabscience公司)，BCA 蛋白定量测试盒(上海碧云天生物技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 SPF级KM种小鼠，健康，雄性，6～8周龄，购自广州中医药大学实验动物中 心。所有小鼠均遵循实验动物伦理学要求进行饲养及实验操作。饲养环境模拟自然昼夜条件，养殖3天后，随机分成5组，每组8只，每只体质量(24±2.0)g。①生理盐水对照组：生理盐水灌胃；②低剂量香芹酚组：10 mg/kg香芹酚灌胃；③中等剂量香芹酚组：20 mg/kg香芹酚灌胃；④高剂量香芹酚组：40 mg/kg香芹酚灌胃[6]。

1.2.2 醉酒最适浓度探索 SPF级KM种小鼠，雄性，40只，6～8周龄，养殖3天后，随机分成5组。各组分别给予12 mL/kg,13 mL/kg,14 mL/kg,15 mL/kg,16 mL/kg的56°白酒灌胃，对照组给予等量的生理盐水，观察醉酒数量和死亡数量[7]。

1.2.3 小鼠防醉实验 生理盐水对照组用等量的生理盐水灌胃，香芹酚各组先以相应剂量的香芹酚灌胃， 30 min后再以 56°白酒 ( 14 mL/kg) 灌胃处理，空白对照组给予等量生理盐水。醉酒的指标为翻正反射消失，记录给药时间、翻正反射消失时间，翻正反射恢复时间，醉酒潜伏期和醉酒时间。其中，翻正反射消失时间减去给药时间为醉酒潜伏期；翻正反射恢复时间减去翻正消失时间为醉酒时间。

1.2.4 香芹酚对小鼠血液中的乙醇浓度 生理盐水对照组用等量的生理盐水灌胃，香芹酚各组先以相应剂量的香芹酚灌胃， 30 min后再分别给予56°红星二锅头( 14 mL/kg) 灌胃，生理盐水对照组以等体积生理盐水灌胃，以小鼠翻正反射消失作为醉酒指标，1 h后眼球取血，通过重铬酸钾-分光光度计法测定血液乙醇浓度。取90%的硫酸和2%的重铬酸钾溶液，体积比为1:1，配备重铬酸钾酸性溶液2 mL，再加入0.3 mL含有乙醇的血液，100 ℃水浴加热10 min，观察颜色变化，在600 nm波长测量吸光度。通过公式换算出血液乙醇浓度。

1.2.5 肝脏大体的的影响的探究 取出完整的肝组织，用滤纸吸干表面血渍，观察肝脏大体，称量肝脏重量，算出肝指数。

1.2.6 香芹酚的保肝作用研究 生理盐水对照组用等量的生理盐水灌胃，香芹酚各组先以相应剂量的香芹酚灌胃， 水飞蓟宾组以37.8 mg/kg灌胃，30 min后再以 56°白酒 ( 14 mL/kg) 灌胃，连续7天。各组小鼠末次灌胃1 h后，处死小鼠(颈椎脱臼法)，取出肝，用4 ℃的0.9%氯化钠冲洗除肝表面的血液，制备10% 肝匀浆，分别用于 MDA 含量(TBA 法) 和 SOD检测。

1.3 统计学分析

采用 SPSS 19.0 统计软件进行处理， 计量资料以均数±标准差表示， 组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，P<0.05为差异有显著统计学意义。

2 结 果

2.1 最适的醉酒浓度探索

由此分析可得，最佳醉酒浓度为14 mL/kg。随后实验中，小鼠摄入酒精浓度均为14 mL/kg。见表1。

表1酒精浓度对小鼠醉酒的影响

2.2 小鼠防醉实验

由表2可知，与生理盐水对照组比较，香芹酚低中高剂量可小鼠延长醉酒潜伏期(P<0.05)。与生理盐水对照组相比，对减短醉酒时间不具作用(P>0.05)。

表2香芹酚对小鼠醉酒的预防作用

2.3 香芹酚对小鼠血液中的乙醇浓度的影响

由表3可知，香芹酚低中剂量组与生理盐水对照组相比有差异(P<0.05)，其余各组与生理盐水对照组相对比没有差异。

表3 香芹酚对小鼠血液中的乙醇浓度的影响 (n=8)

2.4 香芹酚对小鼠肝脏大体的影响

实验表明，各浓度香芹酚均具有良好的护肝作用(P<0.05)。见表4。

表4香芹酚对小鼠肝脏大体的影响 (n=8)

2.5 香芹酚对小鼠肝组织的SOD，MDA含量的影响

实验表明，各浓度香芹酚可有效降低炎症反应，提高SOD含量，降低MDA活性。见表5。

表5 香芹酚对小鼠肝组织中SOD,MDA的影响(n=6)

3 讨 论

饮酒过多会引起一系列的问题，而对身体造成严重的威胁：饮酒会导致肝脏、肾脏、大脑等器官的炎症。醉酒是指人体摄入过多的酒精，过多的酒精经血液循环进入大脑，造成的行为异常。

酒精进入循环系统后，90%均需通过肝脏进行氧化代谢[8]。在肝内，酒精代谢为乙醛，乙醛在体内蓄积，导致肝微粒体自由基产生增多，自由基能引起肝细胞损伤，从而引起氧化应激[9-10]。造成肝细胞损伤。长期地过量饮酒会导致酒精性脂肪肝，酒精性肝炎，肝硬化甚至是肝细胞癌。而目前市面上的解酒护肝药主要通过加快酒精在体内代谢而发挥作用。加快酒精在体内代谢的机理包括加快肝脏中乙醇的氧化代谢、增强清除自由基的能力等[11]。

本文探讨了不同剂量的香芹酚在实验条件下的解酒护肝效应，实验中发现，低、中、高剂量香芹酚能显著延长醉酒时间，而低、中剂量的香芹酚能降低血液中的乙醇浓度，进而对醉酒小鼠有一定的解酒作用。实验结果充分表明，香芹酚对急性酒精性肝损伤小鼠具有较为显著的解酒作用。但由于高剂量的香芹酚对降低血液中的乙醇浓度缺乏统计学差异，该数据有待进一步考究。实验中还发现，与生理盐水对照组比较，香芹酚组能够减轻酒精对小鼠肝细胞的损伤，显著降低肝组织中MDA，但低、中、高浓度之间缺乏统计学差异，该数据有待进一步考究；肝组织中SOD活性明显增高，低、中、高浓度之间缺乏统计学差异间，该数据有待进一步考究。由此可见，香芹酚有一定的解酒护肝作用。但目前香芹酚在酒精性肝损伤的小鼠中的解酒护肝作用尚不明确。有文献表明，香芹酚具有良好的抗氧化活性以及清除自由基的能力[12]，香芹酚对 D-氨基半乳糖( D-Ga1N) 诱导的大鼠肝损伤具有明显保护作用。另有实验证明，香芹酚对缺血再灌注肝损伤也有保护作用，而香芹酚对肝损伤的保护作用与其维持肝细胞膜结构的完整性和肝脏的氧化—抗氧化平衡有关[13]。因此，我们推测，香芹酚主要是通过抗氧化活性、清除氧自由基来降低醉酒反应、保护肝脏，这为香芹酚作为解酒护药提供一定理论支撑。