新辅助化疗对ⅠB～ⅡB期宫颈癌病灶内恶性生物学特征的影响

汤明，方春田，彭唯

作者单位：1洪湖市人民医院，a肿瘤科，b妇产科，湖北 荆州433200；

2洪湖市妇幼保健院妇产科，湖北 荆州433200

宫颈癌作为女性发病率最高的恶性肿瘤性疾病之一，早期确诊并采取恰当的治疗方式是优化病人结局的最佳方式。对于肿瘤分期较早的ⅠB～ⅡB 期宫颈癌病人，根治性手术是首选方式，直接开展手术或是先行新辅助化疗目前仍存在争议。新辅助化疗是一种术前应用的保守治疗方式，通过静脉给予化疗药物预先减小病灶体积，为后续手术实施奠定基础。本研究选择接受新辅助化疗的宫颈癌病人作为研究对象，对比其化疗前后宫颈癌组织恶性生物学行为的差异，具体从宫颈癌相关增殖基因、侵袭基因、自噬基因三方面展开阐述。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2015 年4 月至2018 年1 月间在洪湖市人民医院接受治疗的ⅠB～ⅡB 期宫颈癌病人157 例，均接受术前新辅助化疗＋根治性手术治疗。留取新辅助化疗前后宫颈癌组织标本各157份作为研究对象。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 入组及排除标准

入组标准：（1）病理组织确诊原发性宫颈癌；（2）首次确诊、入院前未经任何治疗；（3）顺利完成新辅助化疗及后续手术，标本保存完好、相关数据收集完整；（4）本人或近亲属签署知情同意书。

排除标准：（1）合并其他类型原发恶性肿瘤性疾病；（2）合并宫颈组织严重感染；（3）无法耐受新辅助化疗所致毒副作用或者自主中断治疗。

1.3 新辅助化疗

入组病人接受紫杉醇、顺铂联合化疗，具体如下：紫杉醇140 mg/m溶入5%葡萄糖液500 mL 中，静脉滴注，d1；顺铂75 mg/m溶入5%葡萄糖液250 mL 中，静脉滴注，d3。以21 d 为1 疗程，连续化疗2疗程后行根治性手术。

1.4 宫颈癌病灶中恶性生物学行为相关基因表达量检测

新辅助化疗前后，均留取病人的宫颈病灶组织标本，采用荧光定量PCR 法检测其中恶性生物学行为相关基因的表达量，具体包括增殖相关基因：FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2、TSLC1；侵袭相关基因：FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2；自噬相关基因：Beclin1、LC3-B、PI3KC3。

1.5 统计学方法

数据分析选择SPSS 19.0 统计软件，以x ± s 描述定量资料，t 检验；以例数结合率描述定性资料，行χ检验。以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 增殖相关基因

新辅助化疗后，宫颈癌组织中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表达量低于新辅助化疗前，TSLC1 mRNA 的表达量高于新辅助化疗前，均差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

2.2 侵袭相关基因

新辅助化疗后，宫颈癌组织中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表达量低于新辅助化疗前，均差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表1 ⅠB～ⅡB期宫颈癌病人157例新辅助化疗前后各157份宫颈癌组织标本中增殖相关基因表达量的比较/x ± s

表2 ⅠB～ⅡB期宫颈癌病人157例新辅助化疗前后各157份宫颈癌组织标本中侵袭相关基因表达量的比较/-x ± s

2.3 自噬相关基因

新辅助化疗后，宫颈癌组织中Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表达量均高于新辅助化疗前，均差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3。

表3 ⅠB～ⅡB期宫颈癌病人157例新辅助化疗前后各157份宫颈癌组织标本中自噬相关基因表达量的比较/x ± s

3 讨论

ⅠB～ⅡB 期宫颈癌病人的治疗以根治性手术为主，目前较多学者推荐在术前应用新辅助化疗，旨在杀灭微小转移灶并缩小肿瘤体积，为后续手术实施创造便利条件。新辅助化疗能否为早期宫颈癌病人带来较大的临床获益存在争议，本次研究对比新辅助化疗前后原发性宫颈癌病人癌细胞的恶性生物学行为差异，为此类病人术前辅助治疗提供借鉴。

宫颈癌细胞的恶性生物学行为首先表现为其无限增殖潜能，多种增殖相关基因共同调控癌细胞的这一行为。FOXP3 对维持Treg 细胞功能具有重要作用，推测其在肿瘤细胞的免疫逃逸过程中发挥重要作用，目前已经在人类胰腺癌、肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤性疾病中存在该基因的过度表达。HOXA7包含转录因子，在早期发育过程中扮演重要作用，已经在胃肠道恶性肿瘤细胞中发现该基因异常高表达，敲低该基因后肿瘤细胞增殖活力下降。USP22参与组蛋白H2A的泛素化，可调控基因转录、表达。研究发现，在宫颈癌组织中存在USP22 基因异常高表达，可促进Hela 细胞增殖且降低机体对化疗药物的敏感性。Sox2 是发现最早的干细胞转录因子，可维持胚胎干细胞多潜能性、器官发生及细胞分化。作为原癌基因，Sox2 可促进细胞周期进展并增强其增殖能力、抑制细胞凋亡。TSLC1 是最先发现于肺癌组织中的抑癌基因，该基因有助于保持上皮间紧密连接并抑制细胞迁移。目前已经在膀胱癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤组织中发现其表达减少甚至缺失，且在宫颈癌细胞实验中利用腺病毒过表达TSLC1 后，发现癌细胞的增殖能力下降。文中宫颈癌病人接受术前新辅助化疗后，病灶组织中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表达量较治疗前下降，TSLC1 mRNA的表达量较治疗前增加，证实新辅助化疗可有效抑制宫颈癌细胞的增殖活力。

宫颈癌进展必然伴随着癌细胞的侵袭转移，其本质是多种促侵袭基因异常高表达、侵袭抑制基因异常低表达。FAK 是存在于细胞质中的非受体酪氨酸激酶，参与细胞内多条信号通路传导。研究发现FAK 在多种实体瘤及非实体瘤中国均存在异常高表达，在调节癌细胞运动、迁移方面具有重要意义。MACC1 是HGF/c-Met 信号通路中的关键调节因子，与启动子结合激活该通路后，可调控下游分子转录并促使c-Met 本身发生磷酸化，促使肿瘤细胞发生侵袭转移。GRP94 属于葡萄糖调节蛋白，具有调控新陈代谢等重要作用，目前该基因在肿瘤发生发展中的作用备受关注，研究证实其过度表达与癌细胞淋巴结转移及肿瘤复发相关。PRPS2 是核苷酸合成关键酶，是促进肿瘤发生的关键基因，在Burkitt’s 淋巴瘤模型中存在PRPS2 过表达，且特异性敲低PRPS2 基因表达后Burkitt’s 淋巴瘤细胞凋亡活性增加。TPX2 的表达水平与细胞周期密切相关，是调节细胞有丝分裂的蛋白质，在宫颈癌细胞中过表达TPX2 可抑制癌细胞凋亡并增强其侵袭能力。文中宫颈癌病人接受术前新辅助 化 疗 后，病 灶 组 织 中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表达量较治疗前大幅下降，证实新辅助化疗可有效抑制宫颈癌细胞的侵袭活力。

自噬参与恶性肿瘤的发生发展，在肿瘤发生早期自噬可清除致癌分子并防止其在细胞内堆积、发挥抑癌作用；随肿瘤进展，自噬可帮助肿瘤细胞逃避缺血缺氧等造成的应激状态并提高其生存能力、促进肿瘤发展及耐药性形成。Beclin1 是一种重要的自噬相关基因，经活化PI3K 而形成自噬小体、增加细胞自噬活性。研究发现，Beclin1 基因表达缺失的小鼠易发生肿瘤性疾病。LC3-B 是细胞自噬的标记性分子，其表达量与细胞自噬活性相关，与Beclin1 联合形成细胞自噬中心，其异常低表达参与多种恶性肿瘤发生。PI3KC3 是PI3K 的核心结构，可促进Atg21 等自噬蛋白结合到膜上并形成PAS，参与自噬延伸，将受损、变性蛋白质运输到溶酶体中进行消化降解。文中宫颈癌病人接受术前新辅助化疗后，病灶组织中自噬相关基因Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表达量均大幅增加，证实新辅助化疗可有效增强宫颈癌细胞的自噬活力。

综上所述，ⅠB～ⅡB期宫颈癌病人接受术前新辅助化疗，可有效抑制癌细胞的增殖及侵袭活力、增强自噬活性，为后续根治性手术实施创造良好条件，推荐在日后同类病人中普及应用。