血清miR-377在原发性肝癌患者并发脉管癌栓中的价值研究*

张彬彬,郁 皓△,刘 慧,曹 斐,吴晓霞,殷 媛

(1.江苏省无锡市第五人民医院肿瘤科 214000;2.江苏省无锡市第四人民医院肿瘤研究所 214062)

原发性肝癌(primary liver cancer，PLC)是世界五大恶性肿瘤之一，为临床上严重威胁人类生活质量和生命安全的疾病[1-2]。随着当前社会环境的变化，PLC的发病率逐年增加[3-4]。PLC的侵袭和转移为其发生、发展过程中较为严重的生物学行为，严重影响患者生命的同时，还会限制其治疗和预后[5-6]。然而PLC患者的脉管内出现癌栓在PLC的侵袭和转移中起到十分关键的作用，即PLC发生侵袭和转移时患者的脉管内癌栓的发生率明显升高[7]。微小RNA(microRNAs，miR)为体内长度较小的RNA，与机体的多种生物学功能相关[8-10]。其中的miR-377为近年来miR的研究热点，与肿瘤的关系密切[11-12]。然而miR-377与并发脉管内癌栓的PLC间的关系并不清楚。因此，本研究观察PLC患者miR-377的表达水平、肿瘤直径、肿瘤标志物[甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、大分子糖蛋白抗原(carbohydrate antigen,CA)242和CA724]、转移侵袭标志物[基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和胰岛素样生长因子-2(insulin like growth factor-2，IGF-2)]的水平，并探讨miR-377和并发脉管内癌栓的PLC间的相关性，以期为并发脉管内癌栓的PLC的侵袭和转移提供更可靠的诊断和治疗手段，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年11月至2019年11月无锡市第五人民医院肿瘤科收治的100例PLC患者为研究对象，其中并发脉管内癌栓的50例PLC患者作为观察组，未并发脉管内癌栓的50例PLC患者作为对照组。纳入标准：(1)符合《原发性肝癌诊疗规范 2017 版》[13]中PLC的诊断标准；(2)患者的意识清楚，生命体征较为稳定，自愿参与本研究者。排除标准：(1)合并出血倾向、免疫系统疾病、其他恶性肿瘤、心肺肾功能疾病、血液系统疾病和严重的精神系统疾病的患者；(2)依从性差不能配合完成研究的患者。所有患者均知情同意，且本研究经无锡市第五人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

记录患者性别、年龄、病理分期和卡氏(KPS)评分。采用病例对照研究方法，患者入院时及治疗结束后，于清晨空腹抽取2 mL静脉血，室温静置20 min至凝固，2 800 r/min离心20 min分离血清，仪器使用ELx800全自动酶标仪，利用南京森贝伽生物科技有限公司的试剂盒检测miR-377、肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)和PLC转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平，并使用B超检测肿瘤直径。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 一般资料比较

观察组年龄45～73岁，KPS评分62.13～72.21分；对照组年龄44～76岁，KPS评分60.35～73.18分；两组性别、年龄和KPS评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般资料比较(n=50)

2.2 两组miR-377水平和肿瘤直径比较

与对照组比较，观察组miR-377水平更高，肿瘤直径更大，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组miR-377水平和肿瘤直径比较

2.3 两组肿瘤标志物水平比较

观察组肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组肿瘤标志物水平比较

2.4 两组转移侵袭标志物水平比较

观察组转移侵袭的标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 两组转移侵袭标志物水平比较

2.5 miR-377和肿瘤直径、肿瘤标志物的相关性分析

Pearson线性相关性分析显示，miR-377与肿瘤直径、肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)和转移侵袭的标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)呈正相关(P<0.05)，见表5。

表5 miR-377和肿瘤直径、肿瘤标志物的相关性分析

3 讨 论

流行病学调查结果显示PLC的发病率逐年增高，严重危害人们的健康和生命，而PLC的侵袭和转移是影响肿瘤恶性程度的关键因素，严重影响患者的生命安全，限制患者的治疗和预后。因此，需要临床医生对PLC的转移和侵袭做到早发现、早诊断和早干预。然而，最有效的诊疗体系应将临床诊断和治疗直接有效关联，即通过更加准确的诊断方法而直接提供相应的治疗药物，更加直接准确地对发生侵袭和转移的PLC患者进行治疗，方可获得满意的疗效。因此，需要建立更加完善的PLC发生转移的诊断指标，以期更加有效地提供治疗策略。因此，本研究首次针对PLC患者，观察miR-377表达水平、肿瘤直径、肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)、转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平，并探讨miR-377和并发脉管内癌栓的PLC间的相关性，发现PLC患者的血清miR-377水平升高，且并发管内癌栓的miR-377水平升高更加明显。

miR是长度为18～24个核苷酸的一组非编码蛋白质的小RNA，与机体细胞的多种生物学过程相关，包括生长、发育、分化、衰老和炎症。此外，还与多种疾病相关，包括肿瘤、阿尔兹海默症和自身免疫病等。miR-377为近年来miR的研究热点，且过往研究证明其与肿瘤的关系密切，在肿瘤的发展、演化过程中发挥着至关重要的作用，如可以明显地抑制胰腺癌和非小细胞肺癌的肿瘤细胞的生长发展变化，还与胰腺癌的肿瘤直径、有无转移密切相关[14]。此外，还有研究表明miR-377可抑制肝纤维化的进程[15]。因此，可推断miR-377在PLC患者体内水平升高，且并发管内癌栓时的水平升高更加显著。因miRNAs具有稳定性、组织特异性、易获得性和高度保守性的特点和优势，可以用来作为一种有效的肿瘤标志物，预测PLC的发生，还可针对miR-377作为治疗的靶点进行精准治疗。

本研究还发现PLC转移侵袭的标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平亦升高，因肿瘤发生侵袭和转移需降解和破坏肿瘤表面的细胞外基质，而MMP为水解细胞外基质十分关键的蛋白水解酶，MMP-2和MMP-9为其中较为典型的2种因子，可参与细胞外基质的破坏，进而参与肿瘤的浸润和转移[16-17]。VEGF则是肿瘤细胞形成的重要促血管形成因子，可参与肿瘤的发生、侵袭和转移[18-19]。而IGF-2亦可提高VEGF的水平，进而在肿瘤的增殖分化、侵袭和转移中发挥关键的促进作用[20]。本研究结果同样符合过往研究结果，并发管内癌栓的PLC患者转移侵袭的标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平明显升高。

本研究针对PLC患者探讨外周血miR-377与肿瘤直径、肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)、转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的相关性，发现miR-377与肿瘤直径、肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)、转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)呈明显正相关(P<0.05)。即当外周血miR-377水平增高、肿瘤直径更大时，肿瘤标志物(AFP、CA242和CA724)和转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平更高。该结论的得出可为并发管内癌栓的PLC诊断提供便捷的方法，通过miR-377的检测即可了解PLC肿瘤直径、肿瘤标志物和转移侵袭标志物的表达情况。

综上所述，miR-377可逐渐被挖掘为临床上并发管内癌栓的PLC的诊断依据，亦为进一步的临床治疗提供有效、精准的治疗方法。