浅谈数码偏光显微镜对红花药材的显微鉴定分析

吴艳红，商冲，胡亮，马春清，田慧娜，李娜，朱国娟，张燕

（山东丹红制药有限公司，山东 菏泽）

0 引言

红花又名红蓝花、草红花，为菊科植物的干燥花，主产于新疆，全国均有栽培，是我国传统常用的中药材，为常用的活血化淤药，每年5～6 月份，当花瓣由黄变红时采摘，管状花，阴干即可入药。正品红花为干燥的管状花，呈橙红色，花管狭细，雄蕊5 枚，花药黄色，联合成管，高出裂片之外，其中央有柱头露出，有种特异的香气，用手触之，感觉质地柔软，手感好，味微苦，以花片长、色鲜红、染色少、手感柔者为佳。红花主要以下列几种方法鉴别：（1）重量鉴别；（2）颜色鉴别；（3）手感鉴别；（4）水鉴别。而准确可靠的是显微监别方法，数码偏光显微镜对红花药材的鉴别是比较先进、准确、可靠的。偏光显微镜用于检测双折射性的物质，和普通显微镜不同的是，其光源前有偏振光（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中装有另一偏振片（检偏器，一个偏振方向与起偏器垂直的检偏器）。这种显微镜的载物台是可以旋转的，当载物台上放单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个编振光是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物质。

1 实验材料

材料：红花药材。

2 仪器与试剂

仪器：数码偏光显微镜、盖玻片、载玻片、酒精灯、解创针。试剂：水合氯醛试液（水合氯醛又称水合三氯乙醛，纯水合氯醛是无色透明、有强烈辛辣气味的单斜片状结晶固体）。水合氯醛试液配制：取水合氯醛50 g，加水15 mL 与甘油10 mL 溶解，即得。

3 实验方法

（1）粉末制备：取红花干燥药材，用小型磨碎机磨成细粉（过四号筛），装瓶，贴上标签。制备粉末时，注意取样的代表性。（2）粉末制片：用解创针挑取样品粉末少许，置载玻片的中央，加水合氯醛试液1 滴，用针搅匀，待液体渗入粉末后，用左手食指与拇指夹持盖玻片的边缘，使其左侧与药液层左侧接触，再用右手持小镊子或解创针托住盖玻片的右侧，缓缓放下，使液体逐渐漫延充满盖玻片下方。如液体未充满盖玻片，应从空隙相对边缘滴加液体，以防产生气泡，若液体过多，用滤纸片吸去溢出的液体，最后在盖玻片的左端贴上标签或写上标记。（3）显微鉴别：①将标本片放在载物台上，用片夹固定，借助于载物台移动手轮将标本移至视野中心。②开启显微镜摄像头，调节曝光时间与白平衡，选择适宜的图片效果。③先用10×物镜观察，转动粗调手轮至视野中出现模糊像时，再转动微调手轮，把物像调节清晰，然后再转换其他高倍物镜，此时只需调节微调手轮即可获得清晰的图像。④点击“捕获”采集图片，保存当前图片。

4 实验结果

在偏光显微镜下（不同倍镜）可看到清晰的红花粉末内部结构，粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见；有长管状分泌细胞，常位于导管旁，含黄棕色至红棕色分泌物；花冠裂片清晰可见；花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，具有3 个萌发孔，外壁有齿状突起；草酸钙方晶存在于薄壁细胞中；分泌导管清晰可见；花丝碎片清晰可见。

5 结论

红花药材制片以水合氯醛试液为试剂（此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等，加热后透化效果更明显）。红花药材为双折射性物质，在数码偏光显微镜下可看到清晰的图像[1-2]。红花有很好的活血化瘀作用，在临床药理界已有深入的研究，得到了广泛的应用，但易于伪红花相混淆，其真伪优劣直接影响临床用药的安全、疗效。因此对粉末进行真伪优劣的鉴别，保证其质量尤为关键。对于中药材的鉴定方法很多，常见的有基源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别四大鉴定方法。随着中药研究的不断深入，新技术、新方法不断涌现，一些检验方法逐渐被淘汰，而显微鉴定在中药材中的应用更深入、更广泛，因为它比其他方法更具有可操作性、方便、快捷、准确、可靠。这类药材的前处理及后期的图像处理是其显微鉴定过程中较为关键也是较为复杂的环节[3]。近年来兴起的数码显微鉴别，主要用光学显微观察，运用显微镜数码成像系统与计算机图像处理软件相结合的方法处理图像，拍摄的数码照片，更真实、直观地反映了药材的显微结构，用这种先进的数码显微鉴定方法为该红花药材的显微鉴定提供了参考。