嗜碱性粒细胞／肥大细胞CD203c 的表达在过敏性疾病临床应用中的研究进展

崔函，刘婉君，林丽娜，陈丽萍

（1. 沈阳医学院临床医学专业2017 级硕士研究生，辽宁 沈阳 110034；2. 临床医学专业2016 级硕士研究生，3. 沈阳医学院附属第二医院呼吸与危重症医学科）

过敏性疾病又称为变态反应性疾病，主要包括过敏性皮炎、荨麻疹和湿疹等［1］。近年来由于生活方式的改变和环境污染问题的加剧，导致过敏性疾病的发病率逐年增加，给患者及家属造成巨大的经济负担和心理压力［2-3］。CD203／磷酸二酯酶（ectonucleotide pyrophosphatase／Phosphodiesterase，ENpp）家族中有 7 个成员，CD203c（ENPP3）就是家族成员之一［4］。随着流式细胞术的发展和嗜碱性粒细胞活化实验（basophil activation test，BAT）的应用，大量研究表明采用流式细胞术检测嗜碱性粒细胞／肥大细胞膜表面的CD203c的活化情况和功能状态，对过敏性疾病的研究具有重要的价值［4-7］。本文基于最新研究进展，对嗜碱性粒细胞／肥大细胞CD203c 的表达与其在过敏性疾病临床应用中的研究作一综述。

1 BAT 的应用

研究发现，40%的美国人对一种或多种常见的吸入或食物过敏原过敏，其中50%人群在未接触过敏原时就会出现症状［8］。过敏性疾病的诊断主要依靠病史和过敏原的检测，目前临床上对过敏原的检测方法大致分为两类［9］，一类为体内实验，以皮肤点刺试验最常见；另一类为体外实验，以特异性免疫球蛋白E（specific immunoglobulin E，sIgE）和总IgE 含量的测定为主。BAT 是用流式细胞仪测定 CD203c、CD63 等膜蛋白，在遇到过敏原刺激后嗜碱性粒细胞的活化情况。近些年随着流式细胞仪的发现和使用，人们开始使用BAT 辅助诊断过敏性疾病。皮肤点刺试验简便易行，因药物和皮肤反应性等因素的影响，引起假阳性或假阴性结果的概率比较大［10］。国内学者通过分析50 487 例临床病例发现，sIgE 测量阳性的受试者出现过敏反应症状的仅占40%，血清sIgE 阴性的受试者仍可能被诊断为过敏性疾病［11］。Imoto等［12］纳入1 987 名日本柳杉花粉 sIgE 阳性的受试者，发现其中552 名受试者在有日本柳杉花粉传播的季节没有出现任何过敏症状，研究人员对所有受试者使用BAT 测定CD203c 后发现，与日本柳杉花粉传播的季节无症状的sIgE 阳性的受试者相比，有症状的花粉sIgE 阳性的受试者 CD203c明显升高。与皮肤点刺试验和 sIgE 测定相比，BAT 不仅安全、准确，不容易受药物和皮肤反应性的影响，而且BAT 能更准确地显示机体对于过敏原刺激的反应性，间接评估出受试者过敏性鼻炎发生的风险程度。朱晓敏等［13］认为BAT 不仅能帮助诊断sIgE 阳性的过敏患者，也对非sIgE 介导的过敏的诊断有帮助。因此临床应用BAT 对于诊断过敏性疾病具有重要价值。

2 嗜碱性粒细胞的CD203c 的表达和过敏性疾病

嗜碱性粒细胞是罕见的粒细胞，在外周血白细胞中所占的比例不到1%，胞质内的异染颗粒可被甲苯胺蓝等碱性染料着色［14-15］。嗜碱性粒细胞作为参与过敏性炎症的重要细胞，只存在于血液循环中，成为过敏性疾病研究的重要突破点。CD203 是调节嘌呤代谢的胞外酶，其家族中的CD203c 是一种糖基化Ⅱ型跨膜分子，又称为神经细胞表面分化抗原，属于胞外核苷焦磷酸二酯酶家族，催化寡核苷酸，磷酸核苷和 NAD 的水解［10，12］。虽然 IgE 与嗜碱性粒细胞结合能引起Ⅰ型超敏反应，但 Bühring 等［16］认为在外周血中，树突状细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和B 细胞等也可检测到IgE 的表达，因此IgE 对嗜碱性粒细胞无特异性。在外周血中，CD203c 只表达在嗜碱性粒细胞的表面，存在于其成熟的各个阶段，影响嗜碱性粒细胞的分化。因此CD203c成为嗜碱性粒细胞表面特异性活化和识别标记［17］。

嗜碱性粒细胞的CD203c 在无过敏原刺激时低表达，在接触过敏原刺激时，CD203c 的表达会迅速升高，在刺激大约5 min 后达到峰值，可能是因为胞内预存的CD203c 分子能够快速转移到细胞膜表面，引起 CD203c 活化后的迅速高表达［17-18］。Eberlein-König 等［19］检测了 25 例健康受试者和 43例对昆虫毒液过敏的患者嗜碱性粒细胞CD203c 的表达情况，发现昆虫毒液致敏的患者嗜碱性粒细胞CD203c 表达水平上调，与其他活化标记相比，CD203c 的灵敏度更高。Itoh-Nagato 等［20］研究发现，蛋清过敏的受试者在接触过敏原后，嗜碱性粒细胞 CD203c 表达水平上调。Kim 等［21］研究发现，对头孢克洛过敏的受试者，在接触过敏原后，CD203c 表达水平明显上调。CD203c 作为嗜碱性粒细胞的活化标记，不仅用于过敏性疾病的体外诊断，还可以判断过敏性疾病的严重程度和评估疾病的预后和治疗效果。蒋家利等［22］通过流式细胞仪检测哮喘患儿嗜碱性粒细胞的活化情况，发现急性发作期的过敏性哮喘患儿嗜碱性粒细胞CD203c 表达水平明显上调，急性发作次数越多，嗜碱性粒细胞 CD203c 的表达水平越高。Gernez等［23］研究显示，对坚果过敏的患者血液中嗜碱性粒细胞CD203c 的表达水平上调，接受过敏原刺激后嗜碱性粒细胞CD203c 进一步上调，这两种情况在注射奥马珠单抗（抗IgE 单克隆抗体）后，嗜碱性粒细胞CD203c 的表达水平降低。这提示奥马珠单抗通过阻断IgE 与嗜碱性粒细胞表面的受体（FcɛRI）结合，阻断了嗜碱性粒细胞活化，使嗜碱性细胞 CD203c 表达水平下调。Ye 等［24］研究发现，慢性荨麻疹患者中的嗜碱性细胞CD203c 表达水平显著高于健康对照组，重度慢性荨麻疹患者的嗜碱性粒细胞CD203c 表达水平明显高于非重度慢性荨麻疹患者。Caruso 等［25］发现对墙草类过敏的过敏性鼻炎患者，通过口服脱敏剂治疗12 个月后，CD203c 表达水平明显降低。过敏原进入人体后与 IgE 结合，IgE 与 FcɛRI 结合，嗜碱性粒细胞发生活化，其细胞膜表面的CD203c 表达水平上调，阻断 IgE 后 CD203c 的表达水平降低，采用BAT 检测嗜碱性粒细胞CD203c，未来有可能成为诊断过敏性疾病的可靠方法。

3 肥大细胞CD203c 的表达和过敏性疾病

肥大细胞起源于骨髓中的CD4＋造血干细胞，经血液循环迁移到皮下组织并在此成熟，最终进入黏膜或结缔组织，在那里发育为成熟的肥大细胞［26］。肥大细胞与外周血中的嗜碱性粒细胞相似，能触发包括 IgE 和非 IgE 介导的各种变态反应［14，27］。CD203c 作为一种膜蛋白，在黏膜组织中仅仅表达在肥大细胞的表面，2005 年Krauth 等［28］采用单克隆抗体和间接免疫荧光染色技术建立了人胃肠肥大细胞膜表型，进一步研究发现人胃肠道肥大细胞 CD203c 存在高表达。肥大细胞CD203c 在过敏领域的研究比较晚，Valent 等［29］和Hauswirth 等［30］研究发现肥大细胞性增多症患者的肥大细胞CD203c 表达水平上调，与IgE 受体交联后进一步上调。Cop 等［26］在体外培养正常人外周血中的肥大细胞时发现，IgE 与受体结合后促进肥大细胞 CD203c 表达水平上调。国外研究发现，CD203c 通过水解ATP 负性调节嗜碱性粒细胞和肥大细胞的慢性过敏性炎症反应，在缺乏CD203c 的情况下，嗜碱性细胞和肥大细胞被过度激活，引起严重的慢性过敏性炎症［31-32］。近年来有研究表明RNA 测序可以判断IgE 受体介导的肥大细胞活化情况，此研究可以为肥大细胞对过敏性疾病发生机制研究提供新的认识［33］。

4 测定CD203c 的表达应用于临床的局限性

与皮肤点刺试验和血清sIgE 测定相比，嗜碱性粒细胞CD203c 表达水平测定，诊断过敏性疾病敏感性、特异性和准确性更高。但是目前测定嗜碱性粒细胞CD203c 的表达水平，仍然存在很多需要解决的问题，因此并未被广泛应用于临床。CD203c 的表达水平的测定对标本的要求比较严格，但是目前国际上对标本的存放条件、存放时间和处理没有统一的标准，仍需要进一步探索和确认［34］。CD203c 表达水平的测定作为一种新型实验，在测定过程中需要对CD203c、CD123 和HLA-DR 等使用免疫荧光标记，还需要使用流式细胞分析仪等仪器，价格普遍比较昂贵，成本太高，推广比较困难［1］。成熟的肥大细胞不存在于血液中，只存在于黏膜或结缔组织中，相较于血液样本，提取比较繁琐，在提取样本的过程中肥大细胞的损失不可避免，直接影响到测定肥大细胞CD203c 表达水平的敏感性。肥大细胞CD203c 表达水平的测定在过敏领域的研究起步比较晚，发展比较缓慢，临床研究比较少，未来应用于临床，还有很长的路要走。

5 小结

过敏性疾病病因复杂，发病率不断激增，急性发作的风险高，WHO 已经将过敏性疾病列为当今世界重点研究和诊治的疾病之一。与目前临床上常用的过敏性疾病的检测方法相比，BAT 测定CD203c 的表达水平不仅可以诊断过敏性疾病，还可以监测疾病的严重程度和评价治疗效果。但是嗜碱性粒细胞CD203c 的表达水平的测定在临床验证的过程中仍然存在很多问题，主要包括标本的处理标准未统一和仪器的价格比较昂贵。肥大细胞CD203c 表达水平的测定在过敏领域的临床研究比较少，对过敏性疾病的临床研究和诊断，有待未来行进一步深入研究。