芜湖地区丙型肝炎病毒基因型分布与病毒载量及肝功能的关系*

陈继梅 李 劲 胡娅娴

芜湖市第三人民医院，安徽 芜湖 241000

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染是一个全球性的健康问题，每年有近200万新感染发生，其中高达85%的感染成为慢性感染，构成严重的长期健康风险[1]。我国是丙肝的低流行区,但2004年至2014年中国病毒性肝炎感染大数据调查资料显示，我国大多数省丙肝发病率报告呈明显增加趋势[2]。前所未有的治疗发展速度和更多的直接作用抗病毒药物的问世，特别是口服、高效、泛型直接作用抗病毒药物(DAAs)的发展现在已经为治疗感染慢性丙肝病毒铺平了道路，丙肝患者获得更高的持续病毒学应答率，使得丙肝病毒可能成为全球第一个被根除的慢性病毒感染[3]。该药存在的一些问题逐渐暴露，如对HCV部份基因型应答率差等[4]，因此在我国丙肝防治指南中明确指出HCV基因型及亚型的检测是制定抗病毒治疗方案和确定疗程的基础[5]。我们通过对芜湖地区双阳丙肝患者(即抗HCV阳性及HCV RNA阳性)进行基因分型检测，同时对基因型与病毒载量高低和肝功能指标关系进行探讨，以了解本地区丙肝基因型分布特征，为丙肝诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2014年5月至2017年12月期间在芜湖市第三人民医院住院或门诊诊治的丙肝患者，入选标准为经检测血清抗HCV阳性及HCV RNA阳性(大于1×103拷贝/mL)的双阳性患者，并排除合并乙型、戊型肝炎病毒等其他病毒感染，共获得140份病例资料，所有入选患者诊断均符合《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》中的诊断标准[5]。

1.2 检测方法

1.2.1抗HCV抗体检测 抗HCV抗体检测采用酶联免疫法(ELISA)，试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司，仪器为KHB ST-360酶标仪，严格按照说明书操作，采用双波长检测。

1.2.2HCV RNA定量检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法。仪器为美国ABI-7300荧光定量检测仪，试剂购自艾康生物技术(杭州)有限公司，以病毒载量结果>1×103IU/mL为阳性。

1.2.3HCV基因分型检测 由艾迪康医学检验中心采用直接测序法进行检测，检测1～6型及各亚型，检测灵敏度1 000 IU/mL。

1.2.4肝功能检测 所用仪器为日立7180全自动生化分析仪，本次研究以 TBIL、ALT、AST、CHE四项做为观察指标， ALT、AST、CHE采用速率法，TBIL采用钒酸盐氧化法测定，试剂购自浙江东瓯诊断产品有限公司。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 140例双阳丙肝患者HCV基因分型结果

140例丙肝患者136例成功进行了基因分型(全为单基因型),检出率97.14%，4例未能分型，共检出4种基因型、6种基因亚型，其中，HCV-la型 3例(2.21%)，HCV-lb型117例(86.03%)，HCV-2a型6例(4.41%)，HCV-3a型4例(2.94%)，HCV-3b型4例(2.94%)，HCV-6a型 2例(1.47%)，不同基因型检出率差异具有统计学意义(χ2=565.80，P<0.001)，提示芜湖地区HCV-lb型占绝对优势，是芜湖地区目前主要流行的HCV基因亚型，同时存在la、2a、3a、3b、6a等多基因型分布。

2.2 不同性别的双阳丙肝患者基因型分布、肝功能及HCV RNA载量情况

成功进行基因分型的136例双阳丙肝患者中，男性51例，女性85例，女性检出率明显高于男性，差异具有统计学意义(P<0.001)；年龄15～76岁，平均年龄(51.04±12.92)岁，男女性年龄比较差异也具有统计学意义(P=0.002)；男女性丙肝基因亚型分布、肝功能指标及HCV RNA载量差异无统计学意义(P均>0.05)。具体见表1。

表1 不同性别的双阳丙肝患者基因型分布情况

2.3 不同HCV基因型与HCV RNA病毒载量及肝功能指标的关系

芜湖地区基因1型占绝大部分，本研究仅讨论基因1型和非1型与病毒载量及肝功能的关系。结果显示，HCV-1型和非Ⅰ型相比，除了ALT水平差异具有统计学意义外(P=0.012)，HCV RNA载量及其他肝功能指标差异均无统计学意义(P均>0.05)。具体见表2。

表2 不同HCV RNA基因型患者肝功能、病毒载量结果分析

3 讨 论

根据HCV基因组核苷酸序列的差异，可将HCV分为6种基因型及大约70余种亚型，不同HCV基因型的地域分布、传播途径、致病性及治疗应答存在差异，可以根据HCV基因型来评估丙肝患者预后[6]。我国最新的指南中指出HCV防治应基于病毒基因型用药，以达到经济有效的效果[5]。2017年中国国家食品药品监督管理总局批准直接抗病毒药物方案用于治疗成人HCV-1b型患者[7]，了解本地区的基因分型有助于治疗方案及疗程的选择。

通过对我院140例双阳丙肝患者HCV基因分型发现，共检出4个基因型及6个亚型，经比较显示， HCV-l型占绝对优势，HCV-lb为目前主要流行的基因亚型(P<0.001)，同时也检出少量HCV-2a、HCV-3a、HCV-3b、HCV-6a等基因型。芜湖地区HCV-lb为主要感染基因型，占86.03%，基本符合国内HCV亚型仍以lb为主的特征，与各地研究基本相同[8-9]。但芜湖地区HCV-lb比例略高于国内不同地区的报道[8]，分析原因可能是因为不同HCV感染途径导致HCV亚型不同，例如吸毒人群以6型号为主，共感染以1b、2a为主，输血与手术感染丙肝患者以HCV-lb为主[10]，说明芜湖地区HCV感染途径较单一，有必要进一步跟踪患者的感染途径。

对我院成功分型双阳性丙肝患者情况分析发现，本地区丙肝双阳性女性患者发病率高于男性患者(P<0.001)，女性患者的年龄远高于男性患者(P=0.002)。除此之外，性别差异对于HCV RNA载量、肝功能指标及HCV基因型分布特征不存在影响(P均大于0.05)。初步预测，本地区性别差异对于丙型肝炎治疗方案的选择不存在影响。

我们对芜湖地区HCV-l型与非HCV-l型肝功能和病毒载量对比分析显示，不同基因型除了ALT水平存在显著性差异外，其他指标均不存在显著性差异。HCV基因存在高度变异，病毒基因型表现了病毒不同的生特学特征，包括病毒的复制能力和致病能力，本研究调查显示，HCV-l型与非HCV-l型HCV载量不存在显著性差异，与我国国内研究相同[8]。本研究的结果显示非1型的ALT水平显著高于HCV-1型，ALT是肝组织损伤的重要指标，一般认为ALT高者表明患者有一定的免疫应答，治疗效果较好，相对而言HCV-l型对以往的治疗方案不敏感。近年来的研究显示，直接抗病毒药物(DAA)可显著提高HCV-l型SVR率，有效缩短疗程[11]。国内的研究显示lb患者可获得98%有上的有效率，且安全性良好[12]，由于HCV-lb是芜湖地区优势基因型，DAAs治疗有利于芜湖地区丙肝患者的治愈。

HCV基因分型与慢性丙型肝炎治疗方案的选择、预后密切相关，根据HCV基因型采用个性化治疗成为趋势。通过对芜湖地区双阳性丙肝患者HCV基因分型研究显示，芜湖地区以HCV-lb为目前主要流行基因亚型，双阳丙肝患者虽然存在性别及年龄差异，但在基因分型分布特征及病毒载量方面皆不存在差异。不同基因型的标准治疗方案存在较大差异，实验室丙肝基因分型检测为本地区丙肝患者的治疗提供了有力的依据。