苹果枝干轮纹病的有效防治技术研究

郭对田，刘保友,2，栾炳辉，王洪涛，王英姿，薛雯

(1.山东省烟台市农业科学研究院，山东烟台 265500；2.山东农业大学植保学院；3.山东省农药检定所)

苹果轮纹病是由葡萄座腔菌(Botryospaeriadothidea)引起的苹果主要病害之一，在中国各苹果产区均有发生，环渤海优势苹果种植区发生严重[1,2]。富士品种易感轮纹病，且呈逐渐加重趋势[3]。苹果轮纹病菌侵染果实可在生长期和贮存期造成烂果；侵染枝干形成干腐状和枝干病瘤[1,4]。严重降低了树势甚至死枝，影响了苹果产业的可持续良性发展[2]。

轮纹病菌孢子是轮纹病原的主要接种体[5-7]，温度适宜时，降雨特别是持续降雨是影响孢子释放效果的主要影响因素。剪除干腐病枝和刮除病瘤是休眠季清园的重要工作内容。因农村劳动力流失和老龄化，清园工作越来越不给力，枝干轮纹病发生愈发严重(图1)。目前，化学防治仍是防控苹果病害的主要措施之一[8]。笔者进行了刮除轮纹病病瘤降低病原菌、刮除病瘤加喷杀菌剂和增效助剂的防治效果试验，并筛选环境友好的有效药剂。

1 试验材料

轮纹病菌孢子监测和田间评价试验园分别设在烟台市农业科学院和栖霞市臧格庄镇，栽植株行距分别为3m×3m和2.5m×3m，树龄分别为10年和14年，均发生枝干轮纹病严重。

供试药剂共7种：①98%戊唑醇原药，②98%多菌灵原药，③30%戊唑·多菌灵悬浮剂(SC)，以上3种药剂均为江苏龙灯化学有限公司产品，④98%吡唑醚菌酯原药，安道麦安邦(江苏)有限公司产品，⑤250 g/L吡唑醚菌酯乳油(EC)，巴斯夫欧洲公司产品，⑥25%戊唑醇水乳剂(EW)，美国世科姆公司产品，⑦杰效利，助剂，美国迈图高新材料集团产品。①～⑥的基本药剂有3种，即戊唑醇、多菌灵、吡唑醚菌酯。

2 试验方法

2.1 轮纹病枝干刮除病瘤、喷药处理对病原孢子释放量的影响

2016、2017年2年的5月13日至7月29日，采用玻片粘着法动态监测苹果轮纹病病菌孢子[5]。设3个处理：处理1不刮除病瘤，处理2刮除病瘤，处理3刮除病瘤后喷25%戊唑醇EW 2000倍液(笔者多年应用研究发现，刮除病瘤后喷施戊唑醇可大幅减少枝干病瘤的增长率)，10～14 天喷施1次，共喷7次。每个处理放置3个载玻片，载玻片均匀涂抹凡士林的一面贴近枝干轮纹病瘤处(图2)，间隔7～10天更新载玻片，换下的载玻片带回实验室于100倍显微镜视野下镜检。

2.2 实验室测定3种杀菌剂对病原菌的毒力

采用平皿法(NY/T 1156.2-2006)测定3种杀菌剂吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌灵对轮纹病原菌的毒力。分别用少量二甲基酰胺、丙酮、冰醋酸溶解后，加入0.1%吐温80 水溶液，配成浓度为1000mg/L 的母液。采用二次稀释方法准确称量所需药量，与熔化的59ml PDA培养基混合，倒在9cm玻璃皿上。配制吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌灵浓度梯度分别为0.16、0.63、2.50、5.00、10.00mg/kg，0.04、0.08、0.16、0.31、0.63mg/kg和0.08、0.16、0.31、0.63、1.25mg/kg。将直径6mm菌盘接种到培养基上，于25℃恒温培养6天，用十字交叉法测量菌丝盘直径，计算杀菌剂的抑制生长率。每个浓度处理重复4次，以不加药平板做对照。

菌落增长直径D=D1-D2，式中D为菌落增长直径，D1为菌落直径，D2为菌饼直径；菌丝生长抑制率I=(D0-Dt)/D0×100，式中I为菌丝生长抑制率，D0为空白对照菌丝增长直径，Dt为药剂处理菌落增长直径。

根据杀菌剂各浓度的对数值及对应的菌丝生长抑制几率值做回归分析，计算各杀菌剂毒力回归方程(y=bx+a，其中y值表示抑制几率值，x表示药剂浓度绝对值，a值为截距，b值为回归直线的坡度)、相关系数(r)、半数抑制浓度(EC50)、90%抑制浓度(EC90)。

2.3 田间杀菌剂防控枝干轮纹病效果评价

早春，选取病瘤较多且分布均匀的树干，在试验枝干上刮除病瘤、不刮除病瘤两种情况下，均喷施3种杀菌剂：250g/L吡唑醚菌酯EC设1500倍、2000倍、3000倍液3个浓度处理；250g/L吡唑醚菌酯EC设3000倍+杰效利3000倍液处理；30%戊唑·多菌灵SC设600倍、30%戊唑·多菌灵SC600倍+杰效利3000倍液处理。以不刮瘤不喷药为空白对照。药剂均匀喷布枝干至滴液为度。药后14 天切取病瘤树皮，每处理取100个病瘤树皮，剪成0.5mm×0.5mm大小，厚度不超过0.2mm。于超净工作台内将病瘤树皮用灭菌手术刀切成2～3mm大小的病组织块，浸入5%漂白粉溶液中消毒5分钟，灭菌水冲洗后移入PDA培养基上，25℃恒温培养6天，检查病原菌生长情况，计算轮纹病菌分离率和防效。(对枝干病瘤处的分离主要目的是看刮除病瘤和喷施药剂后对病原菌的铲除效果，利用分离率计算防效)。

分离率=组织块菌分离数/总组织块数×100。

防效(%)=[(对照菌落分离率-处理菌落分离率)/对照菌落分离率]×100。

3 结果与分析

3.1 刮除病瘤、喷药对苹果枝干轮纹病孢子释放量的影响

苹果枝干刮除轮纹病病瘤可显著减少菌孢子的释放量。如表1，2016年5月13日至7月29日，不刮除病瘤处理共检测到5384个孢子，刮除病瘤处理的1318个，减少75.5%，刮除病瘤后施药处理的488个，较刮除病瘤处理的减少63.0%，较不刮除病瘤的减少90.9%。2017年各处理的孢子释放量均高于2016年，这是因为菌孢子释放量与降雨量呈正相关[7]，2017年降雨量650mm，较2016年增加121.6mm。但各处理的菌孢子释放量的变化趋势与2016年趋同。2017年刮除病瘤处理的菌孢子量比不刮除的减少44.3%，刮除病瘤且施药处理的孢子量较刮除病瘤处理的减少43.39%。说明刮除病瘤及喷施药剂的防治轮纹病效果明显(图3)。

表1 刮除病瘤及施药对苹果轮纹病菌孢子释放的影响

3.2 3种杀菌剂对枝干轮纹病的杀菌效果

3.2.1 杀菌剂的室内杀菌效果 如表2，室内平皿法测定吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌灵3种杀菌剂对苹果轮纹病菌的抑菌效果均表现良好。EC50分别为0.1967、0.2501、0.3622mg/L，EC90均小于3.9794mg/L。

表2 3种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内抑菌效果

3.2.2 杀菌剂在田间的杀菌效果 如表3，果园防控苹果枝干轮纹病的效果为：刮除病瘤喷药能明显提高药剂的防效，250g/L吡唑醚菌酯EC1500倍液防效70.27%，比不刮除病瘤喷药处理的防效36.59%高33.68个百分点，2000倍和3000倍液的防效低于1500倍液的，但均优于不刮除病瘤喷药处理的防效；同样喷施30%戊唑·多菌灵SC400、500、600倍液时，刮除病瘤喷药的防效明显高于不刮除病瘤喷药的防效。刮除病瘤后喷施250g/L吡唑醚菌酯EC 3000倍液混加助剂杰效利 3000倍液的防效为56.76%，明显高于单喷250g/L吡唑醚菌酯EC 3000倍的防效29.73%。喷施30%戊唑·多菌灵SC 600倍混加助剂杰效利的防效为83.78%，高于单喷30%戊唑·多菌灵SC 600倍防效72.97%。不刮除病瘤时，杀菌剂中添加助剂的比不添加助剂的同样提高了防效。

表3 田间不同杀菌剂对枝干病瘤轮纹病菌杀伤力测定

4 小结与讨论

轮纹病菌具有潜伏侵染的特性，病菌孢子侵染寄主后，果实一般在近成熟期开始发病；枝干突起病瘤中的菌丝均被寄主木栓化细胞围绕，后期木栓化细胞将病瘤与健康组织隔离。未形成外凸病瘤时，病菌可在皮孔下形成病组织[9]。经2016～2017年连续2年试验表明，刮除苹果枝干轮纹病病瘤可大幅减少病菌孢子的释放量。刮除病瘤并喷施药剂进一步降低了病菌孢子的释放量，对控制苹果枝干轮纹病效果良好。不刮除病瘤处理的病原菌分离率高。室内和田间试验结果均表明，250g/L吡唑醚菌酯EC 1500～2000倍、30%戊唑·多菌灵SC 400～600倍液可用于较好地防控苹果枝干轮纹病。吡唑醚菌酯(甲氧基丙烯酸酯类药)具有高效、杀菌谱广、毒性低等优点，对作物还具有增产效果。戊唑醇因长期施用而致轮纹病菌已对其产生低水平抗性[10]，与多菌灵的混配制剂防效良好。杰效利是Silwet系列有机硅助剂产品之一，具有增加防效、提高农药利用率、耐雨冲刷、安全等优点，在生产中逐渐得到应用，有助于满足农业健康发展需求[11-14]。刮除病瘤后，喷施的杀菌剂混加杰效利比不加杰效利会大幅度提高对枝干轮纹病的防效。