系统性红斑狼疮患者血清PS-PLA1、CCL19水平与疾病活动度及免疫功能的相关性分析

张绍君,李俊巧,张永刚，刘静

系统性红斑狼疮(SLE)是由环境、遗传等因素引起的以B淋巴细胞异常活化、自身抗体产生、免疫复合物沉淀为主要病理特征的自身免疫性疾病[1]。 SLE病因、发病机制尚不十分明确 。磷脂酰丝氨酸特异性磷脂酶A1(PS-PLA1)是一种特异性作用于磷脂酰丝氨酸并产生溶血磷脂酰丝氨酸的磷脂酶，被认为是一种参与免疫系统的溶血磷脂介质[2]。趋化因子配体19(CCL19)结合趋化因子受体7(CCR7)后，参与多种炎性反应及免疫反应性疾病[3]。PS-PLA1、CCL19在SLE中的研究报道十分少见，其与SLE免疫功能障碍是否存在关联尚不清楚，现检测SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平，分析其临床意义，旨在为临床治疗提供新的靶点和思路，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2017年2月—2019年10月河北省保定市第一中心医院风湿免疫科收治SLE患者73例(SLE组)，男11例，女62例，年龄22～51(38.15±6.35)岁；临床症状：口腔溃疡21例，光过敏35 例，浆膜炎(胸膜炎和心包炎)19例，继发干燥综合征18例；有家族遗传史21例。另选择同期于医院体检的性别、年龄相匹配的健康志愿者50例为健康对照组，男9例，女41例，年龄26～57(39.05±6.49)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究获得医院伦理会批准，受试者及家属均知情同意并签署同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准：①符合“系统性红斑狼疮诊断及治疗指南”中相关诊断标准[4]；②首次确诊SLE，既往无SLE或其他自身免疫性疾病史；③入组前未接受糖皮质激素和免疫抑制剂治疗；④SLE 疾病活动度评分(SLEDAI)[5]≥5分。(2)排除标准：①合并自身免疫性肝炎、自身免疫性胃炎、风湿/类风湿等其他免疫性疾病；②急、慢性感染者；③肝、肾功能障碍者。

1.3 观察指标与方法

1.3.1 血清PS-PLA1、CCL19检测：空腹采集静脉血3 ml注入促凝试管，待血液凝固取上层液于离心管，置于TDZ4-WS低速自动平衡离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)离心取血清，保存于-70℃低温冰箱(日本三洋电器股份有限公司)，于48 h内采用瑞士Hamilton FAME全自动酶联免疫分析仪，以酶联免疫吸附试验检测血清PS-PLA1、CCL19水平，试剂盒购自美国R&D公司。

1.3.2 血常规检测：空腹采集静脉血3 ml注入抗凝试管，采用西门子ADVIA 2120全自动血细胞分析仪检测白细胞计数(WBC)、淋巴细胞百分比(L)、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)等。

1.3.3 免疫功能指标检测：空腹采集静脉血3 ml注入干燥试管，采用免疫透射比浊法检测静脉血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，补体C3、C4，试剂盒购自美国Epitope Diagnostics公司。

1.3.4 疾病活动度评价：收集临床和实验室资料，采用SLEDAI[5]评价SLE疾病活动度，该评分从胸膜炎、黏膜溃疡、新发皮疹、脱发、脓尿、蛋白尿、血尿、管型尿、肌炎、关节炎、脉管炎、脑血管意外等18项内容进行评价，0～4分为基本无活动，5～9分为轻度活动，10～14分为中度活动，≥15分为重度活动。根据 SLEDAI评估结果将患者分为轻度亚组(20例)、中度亚组(39例)、重度亚组(14例)。

2 结 果

2.1 2组血清PS-PLA1、CCL19水平比较 SLE组血清PS-PLA1、CCL19水平显著高于健康对照组(P<0.01)，见表1。

表1 2组受试者血清PS-PLA1、CCL19水平比较

2.2 不同临床特征SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平比较 有口腔溃疡、光过敏、浆膜炎、继发干燥综合征的SLE患者血清PS-PLA1水平高于无口腔溃疡、光过敏、浆膜炎、继发干燥综合征患者(P<0.05)。继发干燥综合征患者血清CCL19水平高于无继发干燥综合征患者(P<0.01)，见表2。

2.3 SLE不同亚组间血清PS-PLA1、CCL19水平比较 血清PS-PLA1、CCL19水平比较，轻度亚组<中度亚组<重度亚组，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表3。

2.4 2组血常规及免疫功能相关指标水平比较 SLE组WBC、L百分比、PLT、Hb、补体C3和C4水平低于健康对照组(P<0.01)，IgA、IgM、IgG水平高于健康对照组(P<0.01)，见表4。

2.5 SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平与SLEDAI评分、免疫功能指标的相关性分析 SLE患者血清PS-PLA1水平与SLEDAI评分、IgG呈正相关(P<0.05)，与补体C3水平呈负相关(P<0.05)，与IgA、IgM、补体C4水平无相关性(P>0.05)。血清CCL19水平与SLEDAI评分、IgA、IgM、IgG水平呈正相关(P<0.05)，与补体C3、C4水平无明显相关性(P>0.05)，见表5。

表3 SLE不同亚组患者血清PS-PLA1、CCL19水平比较

表5 血清PS-PLA1、CCL19水平与SLEDAI评分、免疫功能指标相关性分析

3 讨 论

SLE是一种慢性、异质性自身免疫性疾病，临床表现和病程多种多样，其病因、发病机制及最佳治疗方法仍不清楚[6]。随着临床、病理学研究的不断深入，SLE诊断、分类、治疗药物、疾病活动度评估均不断完善，患者生存率有了显著提高，但是与健康人群相比，SLE病死率仍然较高，严重威胁患者健康和生命安全[7]。免疫功能障碍是SLE发病的主要病理基础，探讨与SLE免疫功能障碍相关的机制有助于评估该病的病情。本研究中SLE组IgA、IgM、IgG水平高于健康对照组，C3、C4水平低于健康对照组，推测原因为SLE患者普遍存在体液免疫失衡，破坏正常免疫耐受机制，导致IgA、IgM、IgG水平升高，而由于自身抗体增多，抗原—抗体复合物形成，导致补体过度消耗，补体C3、C4水平下降[8-9]。PS-PLA1是产生溶血磷脂酰丝氨酸的磷脂酶，溶血磷脂酰丝氨酸是一种类似于溶血磷脂的甘油介质，PS-PLA1可特异性水解溶血解磷脂酰丝氨酸，产生溶血磷脂酰丝氨酸，其代谢底物和代谢产物都有广谱的生物学功能[10]。PS-PLA1属于第二代生物活性脂质介质，由细胞膜中释放的花生四烯酸衍生而来，通过细胞间信号转导参与人体各种生理反应，与细胞活化有关[11]。近期研究发现，PS-PLA1是一种参与免疫系统的溶血磷脂介质，其基因多态性与Graves病发病有关[12]，但PS-PLA1在SLE中的发病机制尚不清楚，目前缺乏相关临床报道，本研究发现SLE组患者血清PS-PLA1水平明显升高，且PS-PLA1水平与SLEDAI评分、IgG呈正相关，与补体C3水平呈负相关，提示PS-PLA1可能通过体液免疫、补体系统参与SLE发病和疾病活动进展。

表2 SLE组不同临床特征患者血清PS-PLA1、CCL19水平比较

表4 2组受试者血常规及免疫功能相关指标水平比较

趋化因子配体参与调节免疫细胞选择性地迁移定植不同靶器官的过程，并调节靶器官病理免疫反应，参与SLE发病及多系统受损的疾病进展[13]。CCL19 属于CC 类趋化因子，是诱导T细胞活化、免疫耐受、免疫监视及炎性反应的关键调控因子。CCL19主要通过与B细胞表面受体CCR7结合发挥趋化作用[14]。B 细胞是表达CCR7 的重要细胞之一，而自身反应性B细胞免疫耐受被打破是SLE主要发病机制之一，表现为自身反应性B 细胞比例升高，免疫调节B 细胞数量下降，因此CCL19/ CCR7信号通路可能参与SLE的发生。相关报道指出，原发性干燥综合征患者唾液腺中CCL19/CCR7表达显著升高，与抗干燥综合征相关抗原A (SSA)抗体、IgG水平有关，CCL19被报道同样参与风湿性关节炎发病[15-16]。本研究SLE组血清CCL19水平高于健康对照组，分析原因为SLE患者B细胞免疫失衡导致CCR7 表达减少，CCL19 水平升高，同时CCL19通过募集免疫细胞和炎性细胞激活免疫系统，导致B 淋巴细胞异常活化，提示CCL19可能通过干扰B细胞亚群的稳态参与SLE的发病过程。相关性分析发现，SLE患者血清CCL19 水平与IgG、IgM、IgA水平呈正相关，说明SLE患者血清CCL19水平升高可能与自身抗体的产生有关，CCL19可能通过调节免疫球蛋白水平参与SLE的发病、疾病活动过程。本研究在既往研究基础上还对CCL19与SLE患者疾病活动度的相关性进行了初步探讨，发现CCL19与SLEDAI评分呈正相关，说明CCL19与SLE活动有关，CCL19 水平可反映SLE活动状态，这与既往相关报道指出CCL19随着SLE发病时间和疾病活动性不同而改变的结论相符[17]。 本研究发现CCL19与SLE患者继发干燥综合征有关，既往研究发现干燥综合征是一种皮肤自身免疫性疾病，存在淋巴趋化因子配体CCL19、CXCL13、CCL21等异位表达[18]，提示CCL19与SLE继发免疫系统损伤有关，可能是导致疾病进展的主要因素之一，但是机制尚不清楚，可能与CCL19高度表达引起免疫球蛋白升高，增加抗体产生有关[19]。

综上，SLE 患者血清PS-PLA1、CCL19水平明显升高，PS-PLA1、CCL19可能通过体液免疫和/或补体调节参与SLE发病和疾病活动过程，可作为辅助评估SLE疾病活动度的潜在生物标志物。本研究不足之处为研究时间尚短，研究样本量较小，尚未对二者参与SLE疾病活动和免疫功能异常的具体机制及远期预后进行探讨，在以后研究中会进一步探讨PS-PLA1、CCL19与SLE疾病活动和免疫功能异常的分子机制，并完善SLE患者的随访，获取更加全面的结论。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

张绍君：提出研究思路，设计研究方案、研究流程、撰写论文；李俊巧：设计论文框架、修订论文、论文终审；张永刚：实施研究过程，数据收集，分析整理；刘静：进行文献调研与整理