E-钙黏蛋白、β-连环蛋白及Ki-67在不同级别脑膜瘤组织中的表达

王冬梅，梁 婷，李慧娟，雷先华，李 荣，刘长乐

(赣州市肿瘤医院病理科，江西 赣州 341000)

脑膜瘤为高发中枢神经系统肿瘤，在颅内原发性肿瘤中占13%～26%[1]。由于恶性、复发肿瘤患者面临着较高的死亡风险[2]，所以早期鉴别该肿瘤对于治疗效果和预后的改善具有重要意义。E-钙黏蛋白(E-cadherin)为钙依赖性跨膜糖蛋白，是上皮细胞间重要的黏附分子，也是一种肿瘤侵袭转移抑制因子，只有黏附在β-连环蛋白(β-catenin)等细胞骨架上才能发挥作用，当β-catenin发生突变或异常时将会导致细胞分散、侵袭行为的出现。Ki-67蛋白是与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，在细胞的有丝分裂、增殖、分化中起重要作用。国内外已有研究[3-5]证实E-cadherin、β-catenin及Ki-67与部分肿瘤的发生、发展具有相关性。本研究旨在通过观察E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同级别脑膜瘤组织中的表达，分析三者与脑膜瘤恶变及复发的关系，以期为脑膜瘤的临床诊治方案选择提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2015年6月至2018年6月期间赣州市肿瘤医院收治的82例脑膜瘤患者的临床资料。男35例，女47例；年龄18～74(46.82±8.73)岁；WHO(2007)脑膜瘤病理分级标准：Ⅰ级41例，Ⅱ级26例，Ⅲ级15例[6]。入选标准：符合《神经系统肿瘤》中脑膜瘤诊断标准[7]，经颅脑核磁共振成像与术后病理诊断证实；在我院接受首次手术治疗，术后未进行放化疗；可获取可用组织蜡块；可完成随访。排除标准：术前接受放化疗；合并其他肿瘤；预计生存期<1 a；临床资料缺失。本研究已获得医院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂免疫组化试剂盒，兔抗人E-cadherin单克隆抗体，兔抗人β-catenin单克隆抗体，兔抗人Ki-67单克隆抗体，葡聚糖酶复合物广谱二抗，二氨基联苯胺显色试剂盒，苏木素染色剂，二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒，均购自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.3 检测方法所有标本经质量分数4%多聚甲醛固定目标组织标本，石蜡包埋后切成4 μm薄片，HE染色。将组织切片脱蜡、水化，加入磷酸盐缓冲溶液，微波加热20 min修复抗原；放置在体积分数3%过氧化氢中孵育10 min，加入E-cadherin、β-catenin、Ki-67单克隆抗体，4 ℃孵育过夜；磷酸盐缓冲溶液冲洗，加入二抗室温下孵育15 min，磷酸盐溶液冲洗，经二氨基联苯胺显色，2～5 min后行苏木素复染，25 s后自来水冲洗，烘干后经中性树胶封片。

1.4 结果判断使用双盲法，在400倍显微镜下对结果进行记录与审核。每张切片图像均随机选取5个视野，其中阳性细胞百分率<5.00%、5.00%～<25.00%、25.00%～<50.00%、50.00%～<75.00%，≥75.00%者分别记为0分、1分、2分、3分、4分。阳性细胞无染色、淡黄色、黄色或褐色、深褐色分别记为0分、1分、2分、3分。阳性细胞百分比评分+染色评分0分、1～2分、3～5分、>5分分别为阴性、弱阳性、阳性、强阳性，其中<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.5 观察指标1)E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同级别脑膜瘤组织中表达情况；2)E-cadherin、β-catenin及Ki-67在复发、未复发脑膜瘤组织中表达情况；3)不同脑膜瘤患者的1 a生存情况。

1.6 统计学处理采用SPSS 26.0处理数据，计数资料用百分数表示，比较用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同级别脑膜瘤组织中表达的比较E-cadherin、β-catenin在Ⅰ级脑膜瘤组织中阳性表达率高于Ⅱ级、Ⅲ级，在Ⅱ级脑膜瘤组织中阳性表达率高于Ⅲ级；Ki-67在Ⅰ级脑膜瘤组织中阳性表达率低于Ⅱ级、Ⅲ级，在Ⅱ级脑膜瘤组织中阳性表达率低于Ⅲ级；差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同级别脑膜瘤组织中表达的比较 n(%)

2.2 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在复发、未复发脑膜瘤组织中表达的比较E-cadherin、β-catenin在未复发脑膜瘤组织中阳性表达率高于复发脑膜瘤，Ki-67在未复发脑膜瘤组织中阳性表达率低于复发脑膜瘤，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表2。

表2 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在复发、未复发脑膜瘤组织中表达的比较 n(%)

3 讨论

脑膜瘤起源于脑膜、脑膜间隙衍生物，为常见颅内原发性肿瘤，大部分为良性，临床表现不明显，小部分为恶性，侵袭性明显[8-9]。脑膜瘤经手术切除后大多数可痊愈，但仍存在一定的复发风险，肿瘤级别越高，恶性程度越高，侵袭性越强，复发风险也越大[10]。有研究[11]显示，脑膜瘤Ⅲ级复发率达到50.00%。因此，探究有效的病情判断、预后评估方法对于脑膜瘤的诊治具有积极意义。

本研究中，E-cadherin、β-catenin在脑膜瘤组织中阳性表达率随着肿瘤级别的升高而增加，且在未复发脑膜瘤组织中阳性表达率高于复发脑膜瘤。在肿瘤的侵袭过程中，需先自原发灶黏附位置脱离，因此，黏附具有重要作用，黏附力降低是肿瘤细胞侵袭、转移的前提[12]。E-cadherin广泛分布于上皮细胞，可黏附钙依赖性同型细胞，在维持组织正常形态、连接细胞中发挥着重要作用[13]。β-catenin两端分别与E-cadherin、其他β-catenin相连，再连接肌动蛋白，组建成黏附细胞的复合体。E-cadherin、β-catenin阳性表达对肿瘤转移具有抑制作用，表达缺失或减少将降低细胞间黏附力，导致细胞分散，进而向外浸润、繁殖，最终诱发转移。两者在脑膜瘤组织中表达水平越低，细胞与细胞间连接能力越弱，血脑屏障越容易被破坏，脑膜瘤向脑组织侵袭的能力越强，复发风险也越高。

本研究结果还显示，Ki-67在脑膜瘤组织中阳性表达率随着肿瘤级别的升高而降低，且在未复发脑膜瘤组织中阳性表达率低于复发脑膜瘤。Ki-67通常存在于细胞核中，随着细胞周期的变化其表达也发生变化，最初出现于G1后期，S期与G2期表达逐渐增加，M期最高，其容易被降解，且很难被生长因子诱导，可准确反映细胞增殖活性，阳性表达越高，细胞增殖能力越强[14]。因此，推测Ki-67可作为脑膜瘤预后效果的预测指标。

综上所述，高级别、复发脑膜瘤组织中E-cadherin、β-catenin低表达，而Ki-67高表达，三者联合检测可为脑膜瘤鉴别、预后判断提供参考。