乳酸菌发酵液体饲料对仔猪生长性能、粪样菌群及血液生化指标的影响

■胡 虹 权淑静 谷立峰 向凌云 刘 丽 王秋菊 冯 菲 张秀江*

（1.河南省科学院生物研究所有限责任公司，河南郑州450008；2.河南省工业酶工程技术研究中心，河南郑州450008）

随着人们生活水平的日益提高以及人们对食品 安全、健康、环保等问题的关注度的提高,抗生素的滥用、残留和耐药性等关乎安全的关键问题重视度也明显提高。自从禁止在动物饲料中添加抗生素以来，研究人员开始探寻其他可以替代抗生素的技术和产品，使畜牧业的生产不受到影响。在整个养猪过程中难度最大且复杂的环节是仔猪生长阶段，此阶段抗生素的使用呈普遍现象，虽然在国家各种政策的大力影响下有所改观,但形势仍然严峻[1-4]。近年来,一些试验研究发现，将饲料进行适当的处理及加工，可以在一定程度上降低仔猪对饲料及环境过敏的应激反应[5],进而减缓仔猪应激综合症，所以研发应用于仔猪的发酵饲料意义非凡。

发酵液体饲料（Fermented Liquid Feed, FLF）是一种环保、绿色的生物饲料，已经广泛应用于欧洲等地，它有着与抗生素相同的作用，已经有试验充分证明了FLF在仔猪上的优势。经国内外研究者发现，饲料原料经过发酵后会有益生菌、酶、乳酸、代谢产物、维生素、蛋白质分解产物的产生，具有酸香气味，适口性好，动物喜食，经乳酸菌发酵的饲料，大部分抗营养因子被消除，营养更加丰富，饲喂畜禽后可抑制肠道有害菌的生长，有效防止畜禽多种疾病的发生，维持动物肠道的菌群平衡进而改善动物生长性能的作用。在发酵过程中不添加抗生素，所以在动物体内不会造成抗生素药物的残留，研发FLF对我国畜牧业的发展意义重大。

目前，国内关于乳酸菌FLF在仔猪应用效果的研究报道还少之甚少，本研究主要是利用乳酸菌发酵液体饲料为研究对象，探究将FLF应用在仔猪阶段饲喂后，仔猪的日采食量、日增重、料重比等生长性能改善情况，对肠道健康和对血液生化指标是否有改善作用，为乳酸菌FLF在生猪无抗养殖应用生产中替代抗生素提供试验理论依据，为进一步研发安全、高效、环保的发酵饲料奠定了理论基础。

1 材料和方法

1.1 试验设计及基础日粮

2019年5月5日～6月8日在信阳罗山县鑫隆家庭农场养猪场进行了应用试验，预试期5 d，试验期30 d。选用体况良好的150头约重20 kg的“杜×长×大”健康仔猪，按要求随机分为3组，每组5个重复。Ι组饲喂基础日粮作为对照试验，试验Ⅱ组饲喂基础饲料日粮添加5%金霉素的预混剂，试验Ⅲ组饲喂乳酸菌FLF。平均每舍饲喂试验猪10头，每天定时对猪舍通风换气，温度为15～20 ℃，日常定时打扫猪舍2次，其他日常管理按常规进行。基础日粮组成及营养水平见表1。

1.2 发酵饲料

1.2.1 试验菌种

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）UR-3 是由河南省科学院生物研究所有限责任公司通过紫外诱变得来，现保存于中国微生物菌种保藏中心。

1.2.2 乳酸菌发酵液体饲料生产工艺

试验过程中，河南省科学院生物研究所有限责任公司提供本研究所用的FLF，主要使用30 kg 桶装式进行液体发酵，主要提供于养殖场和应用试验的研究。发酵过程中所用的桶自带排气阀，密封性好,可保质一个月。乳酸菌FLF 是将基础日粮中的玉米∶豆粕和麸皮∶水都按1∶2的比例放入发酵桶中进行发酵，每桶总质量30 kg，接入UR-3种子液1 800 ml，常温发酵48～72 h，饲喂前每桶按基础日粮配方干物质的量添加4%的仔猪预混料，最后制成Ⅲ组的饲喂日粮。发酵前后，乳酸菌发酵液体饲料营养成分变化显著，粗蛋白、生物量和乳酸含量都显著高于尚未发酵的发酵液体饲料，具体营养成分价值分析参照参考文献[6]，此乳酸菌FLF 的pH 值≤4.0，且有浓郁的酸香味时即可饲喂[7]。

表1 基础日粮组成及营养水平

1.3 生长性能的测定

分别在试验阶段的第0 d和第30 d的清晨，将试验仔猪逐头空腹称重，以每重复组为单位，记录体重，计算饲喂期间仔猪的平均日增重（ADG）。

每天记录每个猪圈的投料量和饲喂结束的剩余量得到总的采食量，计算试验期间仔猪的平均日采食量（ADFI）和料重比(F/G)。

1.4 粪样菌群

1.4.1 样品采集

在试验进行的第20 d 和第30 d 清晨，每个重复随机选2 头健康仔猪，采集其新鲜无污染微生物粪便，放冰箱-20 ℃待测。

1.4.2 粪样的稀释

在无菌条件下，称取1 g 粪样放入加有9 ml 磷酸盐缓冲液的试管内，放玻璃珠进行震荡使粪便均质化，振荡器中振荡5 min后制成10-1稀释液，随后将此稀释液加入放有9 ml 无菌磷酸盐缓冲液的试管中制成10-2稀释液，再次在振荡器中振荡5 min，依此分别进行10-3～10-6倍的稀释液的制备。

1.4.3 培养及菌落计数

大肠杆菌：在EMB 固体培养基上接入粪样稀释液，37 ℃、24 h培养后分别进行生理生化鉴定和平板计数。

沙门氏菌：在SS固体培养基上接入粪样稀释液，37 ℃、24 h有氧培养后进行平板计数。

乳酸菌：在MRS固体培养基上接入粪样稀释液，37 ℃、48 h厌氧培养后进行平板计数。

1.5 发病率

对仔猪的每日采食量、粪便质量、发病数量、死亡量、腹泻情况、精神状况和仔猪肛门污染状况等进行密切观察和记录，包括仔猪出现感冒、发热、关节肿痛、咳嗽、皮肤出现异常等常见病也要记录在案。

1.6 血液生化指标

1.6.1 血清的制备

试验完成的倒数第二天，将试验仔猪禁饲12 h，这期间自由饮水。随机选1头健康接近平均体重的仔猪，颈静脉采血，常温静置15 min后进行血清的分离，用离心机4 000 r/min离心5 min，保存于-20 ℃冰箱。

1.6.2 血液生化指标测定

先解冻血清，再采用血液生化分析仪测定血清中的总胆固醇、三酰甘油、总蛋白、葡萄糖的等指标含量；用免疫透射比浊法测定血清中免疫球蛋白A 、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的指标含量[6]。

1.7 数据处理

用DPS软件进行数据方差分析。

2 结果

2.1 乳酸菌FLF对仔猪生长性能的影响（见表2）

表2 乳酸菌FLF对仔猪生长性能的影响

由表2 可知，各组仔猪初始体重差异不显著；但在试验结束时，与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组的末重明显增加，分别提高了7.95%(P＜0.05)和8.17%(P＜0.05)，Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）；与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组的平均日增重分别提高了14.88%(P＜0.05)和16.12%(P＜0.05),Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）；与对照组相比,Ⅱ组和Ⅲ组的平均日采食量分别提高了4.82%(P＜0.05)和8.91%(P＜0.05)；Ⅱ组和Ⅲ组的料肉比与对照组相比都有不同程度的降低，分别降低了8.76%(P＜0.05)和6.20%(P＜0.05)，Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）。

2.2 乳酸菌FLF对仔猪粪样菌群的影响（见表3）

表3 乳酸菌FLF对仔猪粪样菌群的影响（log10 CFU/g）

从表3 可知，与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组粪样中大肠杆菌的数量分别降低了45.10%(P＜0.05)和46.46%(P＜0.05)；沙门氏菌的数量分别降低了78.57%(P＜0.05)和84.87%(P＜0.05)；Ⅲ组的乳酸菌的数量显著提高(P＜0.05)。

2.3 乳酸菌FLF对仔猪发病率的影响（见表4）

表4 乳酸菌FLF对仔猪发病率的影响(%)

如表4所示，试验过程中无试验猪死亡。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组的发病率分别显著降低了68.36%(P＜0.05)和71.35(P＜0.05)，Ⅱ组与Ⅲ组之间的差异显著(P＜0.05)。

2.4 乳酸菌FLF对仔猪血液生化指标的影响(见表5)

表5 乳酸菌FLF对仔猪血液生化指标的影响

由表5的血液生化指标可以得出，三组试验血样中总胆固醇、三酰甘油和免疫球蛋白M含量差异不显著(P＞0.05)。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组血样中总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G 指标明显提高，差异显著(P＜0.05)，且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著(P＜0.05)。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组血样中尿素氮含量明显降低，差异显著(P＜0.05)，而且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著(P＜0.05)；Ⅱ组和Ⅲ组血样中葡萄糖含量明显提高，差异显著(P＜0.05)，且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著(P＜0.05)。

3 讨论

从试验测定的仔猪生长性能一系列指标如：平均日增重、平均日采食量、料重比以及发病率等来看，试验Ⅲ组乳酸菌FLF的试验效果最好，不但提高了仔猪平均日增重和平均日采食量，而且明显降低了料肉比和发病率。把固体饲料制成液体饲料，可以分解、软化固体饲料，减少了仔猪胃肠道刺激，这样可以使仔猪对饲料原料中营养物质的消化和吸收速度加快，进一步提高了仔猪的采食量[8-9]。

由于仔猪的食物由母乳转为固态所造成的一系列应激反应，当饲喂仔猪液体饲粮后，可以有效降低并防止仔猪机能的紊乱，并保护了仔猪的胃肠道，降低腹泻率[10-11]，还能降低固体饲料粉末刺激仔猪呼吸道的几率，从而降低动物的呼吸道发病率，进而提高成活率[12-13]。但液体饲料也存在一些弊端，如液体饲料增加了环境湿度，猪场的卫生环境难度加大；另外料槽内余下的液态饲料易霉变，极易发生仔猪中毒或感染腹泻，所以勤清扫饲槽是十分有必要的[14]。

FLF作为新型的绿色饲料，比固体饲料或一般的液体饲料更具明显的优势，虽然益生菌FLF还存在着质量不稳定，使用范围小，使用效果不均一等方面的问题，而且当前FLF 尚处在初期探索研究阶段，也仅仅局限于断奶仔猪应用阶段，但我们有理由相信，随着FLF 加工设备的不断发展，生产技术的不断完善，只要解决了加工控制、菌种选择和饲喂系统等问题，FLF 必将是理想的抗生素促生长因子替代品[15]。FLF的普及应用会进一步快速提高畜牧业的生产水平，为绿色畜产品的生产提供有力的支持。

综上，本试验结果可能与FLF产生作用效果的机理有关：经乳酸菌发酵的饲料，营养更丰富，含有丰富的乳酸菌及其代谢产物、乳酸菌素、小肽和维生素等，呈酸性，具有酸香气味，适口性好，动物喜食，提高了动物的日采食量和日增重，从而提高仔猪的生长性能；饲喂畜禽后可抑制肠道有害菌的生长，乳酸菌数量大量增加，可以在动物肠道内大量定植，有效调整肠道菌群平衡，可分泌乳酸，并产生多种消化酶，帮助食物消化和代谢，促进营养物质的吸收和利用，进一步增强了动物机体的免疫力，而且改善了仔猪的肠道健康并预防动物的腹泻。

4 结论

本试验表明，与对照相比饲喂乳酸菌FLF的仔猪的末重提高了8.17%，平均日增重提高了16.12%，平均日采食量提高了8.91%，料肉比降低了6.20%，同时也可以降低仔猪发病率,提高仔猪血液中总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、葡萄糖的含量，降低血液中尿素氮的含量。可见，FLF不仅可以使仔猪的应激反应减少、采食量增加，而且可以提高仔猪的生长速度和成活率，进而降低养殖成本。因此，FLF作为一种高效、绿色、生态和安全的饲料具有在各类养猪场推广应用的潜力。