CXCL12在多发性骨髓瘤骨髓中表达及与预后的相关性

李 涛 王化齐 张 廷

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)为浆细胞病的1种，是1种原发于骨髓的克隆性浆细胞异常的增殖疾病。该病的发病率一直位居血液系统恶性肿瘤中第二位[1]。当前随着药物治疗技术的发展，多发性骨髓瘤的死亡率显著提高，5年生存率在50%左右[2]。不过该病预后因素复杂，其临床表现、疗效、生存期具有很大差异，其中细胞遗传学异常与骨髓微环境改变与患者的预后显著相关[3]。为此找到诊断治疗多发性骨髓瘤的新靶点，寻求更简单、有效的诊疗方式，对改善患者预后具有重要价值[4]。CXC类趋化因子受体(CXCL)12含有4个保守的半胱氨酸，人类CXCL12基因定位于10q[5]。CXCL12在正常组织与异常组织中均有表达，其在骨髓中可骨髓中各成分相互作用发挥其生理功能。CXCL12也被称为基质细胞衍生因子(SDF)-1是趋化因子的一员，通过与特异性配体CXCR4相互作用，在调控造血干/祖细胞迁移、动员、归巢等方面具有非常重要的作用[6-7]，并且后者的表达水平与肿瘤局部复发、5年存活率、淋巴结转移密切相关[8-9]。有研究表明CXCL12参与癌细胞播散转移的全部过程，阻断CXCL12信号通路可有效防止恶性肿瘤的转移[10-11]。本文具体探讨了CXCL12在多发性骨髓瘤骨髓中表达及与预后的相关性，以明确CXCL12的分子靶向与预后调控作用。现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2014年2月至2019年1月选择在榆林市第二医院诊治的多发性骨髓瘤骨髓活检标本78例(观察组)与正常骨髓活检标本78例(其他非肿瘤性疾病需性骨髓检查的正常骨髓标本，对照组)，纳入标准：所有观察组患者都符合多发性骨髓瘤的诊断标准；有相对完整的临床及病理资料；所有标本均来自我院血液内科住院患者；均未进行治疗的初诊患者；年龄20～80岁。排除标准：合并严重凝血功能障碍、弥散性血管内凝血和严重精神病不能配合骨髓活检者。两组患者的性别、年龄、体重指数等对比差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般资料对比

在观察组78例患者中，轻链类型：Κ链36例，λ链42例；ISS分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期25例，Ⅲ期18例；免疫球蛋白分型：IgG54例、IgA4例、轻链型20例；危险分型：低危56例，中高危22例。

1.2 骨髓CXCL12表达检测

采集所有患者的骨髓4～8 ml于EDTA紫管中，然后加入等量的Ficoll液，形成明显分界，3 000 rpm/min离心20 min，取中间白色雾层(骨髓单个核细胞)，采用PBS稀释，室温3 000 rpm/min离心10 min，弃上清，收集细胞沉淀并计数。采用免疫组化法检测CXCL12表达水平，小鼠抗人CXCR12单克隆抗体(abl89048)美国abcam公司。在病理科医生指导下随机选5个视野观察着色情况及着色细胞数，染色强度和阳性细胞百分率计分结果相加小于2分为阴性，≥2分为阳性。

1.3 预后随访

查看患者既往住院病历、门诊随访情况，记录性别、年龄、体重指数、轻链类型、ISS分期、免疫球蛋白分型、危险分型等资料，同时随访患者的生存情况。

1.4 统计方法

应用SPSS Statistics 20.00软件对本研究所有数据进行分析，计量资料用均数±标准差表示，计数资料则用例数来表示，对比方法为t检验与卡方分析等，用COX回归模型进行多因素分析，P<0.05视为具有统计学差异。

2 结果

2.1 骨髓CXCL12表达阳性率对比

观察组的骨髓CXCL12表达阳性率为85.9%，显著高于对照组的12.8%(P<0.05)，见表2。

表2 两组骨髓CXCL12表达阳性情况对比

2.2 骨髓CXCL12表达阳性率与临床病理参数的关系

在78例多发性骨髓瘤患者中，骨髓CXCL12表达阳性率与ISS分期、危险分层、轻链类型呈正相关关系，差异有统计学意义(P<0.05)，而与性别、年龄、免疫球蛋白分型等无相关性(P>0.05)，见表3。

表3 多发性骨髓瘤患者的骨髓CXCL12表达阳性与临床病理参数的关系(例，%)

2.3 预后情况

观察组患者随访到2019年8月，死亡病例21例，存活病例57例，死亡率为26.9%。

2.4 影响因素分析

在观察组中，以预后死亡作为自变量，以ISS分期、危险分层、轻链类型、CXCL12作为自变量纳入COX回归模型。多因素分析结果显示，ISS分期、危险分层、轻链类型、CXCL12等都是影响多发性骨髓瘤预后死亡的因素(P<0.05)，见表4。

表4 影响多发性骨髓瘤预后死亡的因素

3 讨论

多发性骨髓瘤是最常见血液肿瘤之一，占全部肿瘤的1.5%左右，约占所有血液恶性肿瘤的13%[12]。该病是1种以血尿中大量单克隆免疫球蛋白存在为特点的浆细胞肿瘤，在临床上主要表现为感染、高钙血症、贫血、骨痛、肾功损害等[13]。当前随着硼替佐米、来那度胺、自体干细胞移植技术的发展，该病患者中位生存年龄显著提高，但是目前仍不可治愈，因此迫切需要其他新的治疗方法改善其预后[14]。

现代研究显示多发性骨髓瘤的瘤细胞分化、增殖、迁移等生理病理学特性与所处的骨髓微环境密切相关，细胞生长扩张几乎全在骨髓微龛中，骨髓微环境由细胞和非细胞共同组成[15]。骨髓瘤细胞也可以表达和分泌多种粘附分子、细胞因子，骨髓微环境也可支持骨髓瘤细胞的生长、浸润。同时骨髓是主要的造血器官，多发性骨髓瘤会影响正常的体内平衡，并重塑骨髓微环境[16]。趋化因子是一大群由机体内间质细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等多细胞分泌的低分子量细胞因子，与相应的趋化因子受体结合后可参与多种生理和病理过程，比如调节肿瘤的生长和转移等[17]。CXCR12是属于G蛋白偶联受体超家族中的1种CXCR类趋化因子受体，其与CXCR4结合后可使CXCR4结构改变而激活细胞内多种分子信号通路，从而影响肿瘤细胞的增殖、侵袭等生物学行为[18]。目前研究表明，CXCR12基因在多种恶性肿瘤组织中呈高表达状态，其表达与临床分期、淋巴结转移密切相关，且与患者预后相关[19-20]。本研究显示观察组的骨髓CXCL12表达阳性率为85.9%，显著高于对照组的12.8%；在78例多发性骨髓瘤患者中，的骨髓CXCL12表达阳性率与ISS分期、危险分层、轻链类型呈正相关关系，而与性别、年龄、免疫球蛋白分型等无相关性，表明多发性骨髓瘤患者中的骨髓CXCL12呈现高表达状况，且与患者的病理特征显著相关。

当前随着我国城市化进程的加快，多发性骨髓瘤的发病率显著升高[21]。不过该病的增殖与侵袭是一个多步骤、多因素相互作用的复杂过程，具体的机制尚不清楚，明确多发性骨髓瘤的转移与侵袭机制是当前研究领域的热点[22]。尽管自体干细胞移植等治疗方法的使用改善了多发性骨髓瘤患者预后，但是该病的预后生存率依然还处于比较低的水平[23]。CXCL12过度表达可显著地刺激bFGF、VEGF、SCF等基因和蛋白表达，显著促进血管生成，进而形成了较长的毛细管状结构，从而可加速癌细胞的侵袭与转移，导致预后变化[24-25]。本研究观察组患者随访到2019年8月，死亡病例21例，存活病例57例，死亡率为26.9%；多因素分析结果显示，ISS分期、危险分层、轻链类型、CXCL12等都是影响多发性骨髓瘤预后死亡的因素，表明CXCL12的表达可能影响患者的预后。不过本研究随访时间短，实验数据收集存在差异，可能也会影响结果的准确性，将在后续研究中深入分析。

总之，多发性骨髓瘤患者中的骨髓CXCL12呈现高表达状况，且与患者的病理特征显著相关，也是影响患者预后的重要因素。