GC 法同时测定仁术脐膏中4 种成分

曹 谦 侯雪楠 刘 宇 陈泽伟 张双伟 张 军*

［1.广州中医药大学中药学院， 广东广州510006； 2.广州中医药大学第四临床医学院， 广东广州510006； 3.重庆大学附属肿瘤医院， 教育部生物流变科学与技术重点实验室（重庆大学）， 重庆400044；4.广州医科大学附属第二医院中医科， 广东广州510006］

仁术脐膏是挖掘并优化临床经验组方的在研新药［1］，以砂仁⁃苍术、肉桂⁃丁香药对配伍入药，课题组前期研究［2］发现方中丁香、肉桂可增强砂仁、苍术止泻效果，并确定挥发油为其有效部位。该方外敷脐部用于防治小儿腹泻，具有应用方便、临床顺应性佳等优势［3⁃7］。

目前，已上市的同类型外用给药制剂大多采用粉碎工艺入药，透皮吸收缓慢，产品仍具“黑、大、粗” 缺陷；仁术脐膏以临床应用经验为基础，采用超临界CO2萃取浸膏入药，以皮肤相容性较佳的混合脂肪酸甘油酯制备膏剂，具有药效成分含有量高、吸收快、疗效好、制备工艺稳定的优势。本实验采用GC 法同时测定仁术脐膏中桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素的含有量［8］，以期为控制该制剂质量提供参考。

1 材料

1.1 仪器 GC⁃2010 Plus 气相色谱仪（日本岛津公司）；CP225D （十万分之一）、AB204⁃N （万分之一） 电子分析天平（瑞士Mettler⁃Toledo 公司）；KQ⁃400KDE 数控超声波清洗器（400 W、40 kHz）。

1.2 试剂与药物 乙酸龙脑酯（批号110759⁃⁃201105，纯度99.6%）、苍术素（批号111924⁃201404，纯度99.7%）、桂皮醛（批号110710⁃201619，纯度98.9%）、丁香酚（批号110725⁃201615，纯度99.8%） 对照品均购于中国食品药品检定研究院。仁术脐膏（批号170801、170802、170803，由南方医科大学珠江医院制剂室提供，每贴质量1 g，相当于生药4 g）。肉桂（批号160301）、砂仁（批号160501）、苍术（批号160301） 均购于广州致信药业有限公司，丁香（批号16215413） 购于广东省药材公司中药饮片厂，经广州中医药大学中药学院张军研究员鉴定为正品。无水乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 GC 条件 Phenomenex ZB⁃1 ms 毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气高纯度氮气；恒压100.0 kPa；进样口温度240 ℃；检测器温度250 ℃；分流比50 ∶1；程序升温（初始温度130 ℃，保持10 min，10 ℃／min 升至150 ℃，保持5 min，10 ℃／min 升至180 ℃，保持5 min，20 ℃／min 升至230 ℃，保持12.5 min）；进样量1 μL。

2.2 对照品溶液制备 精密称取桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚对照品适量，加无水乙醇稀释至25 mL 棕色量瓶中，得到相应贮备液（三者质量浓度分别为7.472 8、4.282 0、9.925 6 mg／mL）。精密称取苍术素对照品15 mg，置于25 mL 棕色量瓶中，精密加入上述贮备液各5 mL，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（四者质量浓度分别为1.494 6、0.856 4、1.985 1、0.613 6 mg／mL）。各精密吸取适量，依次稀释2.5、5、12.5、25 倍，配制梯度质量浓度溶液。

2.3 供试品溶液制备 取膏剂（批号170801） 1 贴，揭去包材，精密称取0.5 g，精密加入25 mL 无水乙醇，称定质量，超声 （280 W、40 kHz） 提取30 min，4 ℃下静置30 min后冷却至室温，无水乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液制备 分别取缺肉桂、缺砂仁、缺丁香、缺苍术的阴性样品，按“2.3” 项下方法制备，即得。

2.5 专属性试验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液（稀释5 倍）、阴性样品溶液各1 μL，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，供试品在对照品相同保留时间位置上有色谱峰，阴性无干扰。

2.6 线性关系考察 精密吸取“2.2” 项下对照品溶液，在“2.1” 项色谱条件下各进样1 μL 测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y） 进行回归，得桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素方程分别为Y＝155 797X-558.926 （r＝0.999 98）、Y＝150 216X-111.846（r＝1.000 00）、Y＝138 269X-889.358 （r＝0.999 97）、Y＝156 581X-143.402 （r＝0.999 99），分别在0.059 78～1.494 6、0.032 46～0.856 4、0.079 40～1.985 1、0.024 54～0.613 1 μg／μL 范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验 精密吸取“2.2” 项下同一份稀释5 倍的对照品溶液1 μL，在“2.1” 项色谱条件下进样测定6次，测得桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素峰面积RSD 分别为0.68%、1.35%、1.00%、1.34%，表明仪器精密度良好。

图1 各成分GC 色谱图

2.8 重复性试验 精密称取同一批膏剂（批号170801），按“2.3” 项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素含有量RSD 分别为0.79%、1.00%、1.13%、0.73%，表明该方法重复性良好。

2.9 稳定性试验 精密称取同一批膏剂（批号170801），按“2.3” 项下方法制备供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h 在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素含有量RSD 分别为0.50%、0.99%、0.61%、0.73%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.10 加样回收率试验 精密称取含有量已知的同一批膏剂（批号170801） 0.25 g，各6 份，精密加入“2.2” 项下对照品溶液2.8 mL、无水乙醇22.2 mL，按“2.3” 项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表1。

2.11 样品含有量测定 取3 批膏剂，按“2.3” 项下方法制备供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表2。

3 讨论与结论

本实验考察了多种等温或程序升温的GC 分离条件，并进行预试验［9⁃14］，发现在等温条件下主成分色谱峰出现出峰时间间隔过长、分离度不达标等情况，难以达到满意的分离效果；在程序升温条件下，初始柱温过低会导致出峰时间晚、峰型过宽等问题，而过高又导致出峰时间过早、分离度差的情况，同时升温速率过快也会导致主成分峰过于集中。最终，确定为“2.1” 项下条件，此时出峰时间适宜，峰型对称，分离度良好，结果稳定。

表1 各成分加样回收率试验结果（n＝6）

表2 各成分含有量测定结果（n＝3）

在制备供试品溶液时，本实验考察了提取方法（直接超声提取、水浴融化后超声提取）、提取溶剂种类（无水乙醇、甲醇） 及用量（25、50 mL）、提取时间（15、30、45 min）、超声功率 （160、280、400 W）、静置温度（-20、0、4 ℃） 及时间（15、30、60、120 min），发现在以无水乙醇超声提取或水浴后超声提取、超声功率280 W或400 W、提取时间30 min 或45 min 时体系澄清透明，各成分含有量均无明显差异。为了简化操作，最终确定为“2.3” 项下方法。

综上所述，本实验建立GC 法同时测定仁术脐膏中桂皮醛、乙酸龙脑酯、丁香酚、苍术素的含有量，发现各成分可控程度高，而且方法简便准确，重复性好，可更好地控制该制剂质量。