呼吸道病原体抗体检测在成人感染中的临床应用

司 序,杨裕颖,陈 雷

(长春市中心医院 放免中心,吉林 长春130051)

在日常生活中，呼吸道感染属于常发疾病之一，主要临床症状为发热，如没有得到及时治疗，会导致患者的神经系统等受到损害[1]。这种疾病的病原学较为复杂，同时具备季节性流感等特征。随着医疗水平不断提高，呼吸道病原体IgM抗体检测在患者的呼吸道感染中具有较大的占比，使用范围也不断的扩大，诊断过程中主要是依靠间接免疫荧光法，对较为常见的呼吸道非细菌病原体，例如：肺炎支原体(MP)、副流感病毒(PIV)、流感病毒A型(INFA)等进行检测，可以及早诊断，尽早治疗[2]。为更好的探讨呼吸道病原体IgM抗体检测在成年呼吸道感染中的应用，选取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染来我院就诊的住院患者，共计1722例，进行有效的分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染来我院就诊的住院患者，共计1722例，纳入标准：①所有患者具有较为明显的呼吸道感染；②主要症状为：扁桃体肿大、肺部湿啰音、咽部充血、发热、喘息、咳嗽等；③所有患者均知晓本次研究，签署知情同意书表示自愿参与。排除标准：①具有口服抗菌药物史；②接受过外院的治疗；③患有白血病、肿瘤疾病、自身免疫性疾病等。其中男856例，女866例，其中≥50岁的患者人群占总人数的75.8%，其余均为成年人。此次研究经过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

所有患者均在空腹状态下抽取静脉血2.0 ml，在采集血清样本后的8 h之内进行检测，如果超出时间需要保存在2-8℃的环境中，如果7 d之内不检测，需要在-20℃的环境中冷冻，检测选择间接免疫荧光法[3]。

试剂：选择欧蒙医学实验诊断股份公司提供的产品。将抗原放置到载玻片中，具体包括呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒B型(INFB)、嗜肺军团菌(LP)、肺炎衣原体(CP)、肺炎支原体(MP)、流感病毒A型(INFA)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)。等待检测样本中的IgM抗体和载玻片上的抗原之间出现特异性反应，之后再和荧光素标记的抗人球蛋白反应形成抗体、抗原、抗人IgM-FITC复合物，之后再从荧光显微镜中观察最终的结果。使用的其他试剂还包含：PBS溶液、吸附剂、抗人IgM磷酸缓冲液等[4]。

仪器：台式高速冷冻离心机，选择的是上海卢湘仪离心机仪器有限公司，型号为TGL-16；低速离心机，同样选择上海卢湘仪离心机仪器有限公司，型号为TD5；水平摇床，选择的是上海天呈实验仪器制造有限公司，型号为TS-200B；恒温水浴箱选择的是天津市恒奥科技发展有限公司，型号为HWT-6B；荧光显微镜选择的是OLYMPUS BX51荧光显微镜。

方式：使用磷酸盐缓冲液和25 μl的血清进行稀释，之后和150 μl和30 μl的吸附剂进行混合，10 min离心，速度为13 000 r/min，避免在检测过程中被其他原因所干扰，去除沉淀。将处理后的血清放置到载玻片中15 μl/孔。没有进行过稀释的15 μl阳性对照放到每一个孔中，同时将没有稀释的15 μl阴性对照放到另外一个孔中。将所有载玻片放到37℃的湿盒中进行培育，时间为1.5 h。使用磷酸盐缓冲液清洗载玻片，之后再沉淀到磷酸盐缓冲液中，使用水平摇床晃动10 min。载玻片在蒸馏水中进行清洗，晾干。每一个孔中需要加入15 μl IgMFITC结合物溶液(这个过程不需要稀释)，之后放到37℃的湿盒中进行温育，时间为0.5 h。重复前面的洗涤晾干步骤，将封闭介质放入盖上盖玻片。在荧光显微镜400倍放大中观察结果[5]。

1.3 观察指标

(1)分析病原体感染阳性占比。阳性判断为：特异性苹果绿色荧光；阴性的判断为：没有见到细胞呈现红色或者没有见到特异性荧光。IgM抗体阳性提示急性感染。

(2)分析不同季节中呼吸道病原体检出情况。3-5月为春季，6-8月为夏季，9-11月为秋季，12-2月为冬季。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数资料进行χ2检验，P<0.05提示有显著差异。

2 结果

2.1 病原体感染阳性占比分析

在所有住院的患者中，检测8项呼吸道病原体为阳性的为822例患者，占据所有受检人群的47.7%。其中发生单项感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；双重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，见表1。

表1 主要病原体感染阳性占比比较

2.2 不同季节中呼吸道病原体检出情况分析

秋、冬两季呼吸道病原体检出率较高，夏季、春季检出率较低，肺炎支原体(MP)在秋冬两季的检出率为(25.8%、12.1%)，见表2。

表2 不同季节中呼吸道病原体检出情况分析(例，%)

3 讨论

临床中，患者发生呼吸道感染，主要是支原体、病毒、细菌等引起的，特点为：发病急、传播快、感染力强等[6]。阳性率以及感染病原体的种类和年龄、季节、地区等有一定的关系，所以检测的方式也会不同[7]。呼吸道发生感染后患者会出现气喘、咳嗽、发热、咳痰、咽痛症状，因为没有特异性的表现，所以诊断比较困难，并不能及时给出准确治疗方案，给临床治疗带来一定困难，使很多人不得不应用广谱抗生素治疗[8]。早期对呼吸道感染患者给出明确的病原学诊断，不仅可以及时的给出准确的治疗方法，增强效果，改善预后，帮助患者快速恢复，还可以减轻痛苦以及家庭经济负担等[9]。

呼吸道感染的病原体不会有特异性症状，所以需要采用相应的检测方法对患者的疾病进行相关的诊断，目前为止，临床中使用较多的检测方法为：免疫荧光抗体法、血清学、病原体的分离培养法、核酸扩增、直接检测法、组织细胞培养法等，可以有效的诊断出患者的病情[10]。近年，随着免疫标记技术以及医疗技术的不断进步，间接或者直接免疫荧光学技术在医学领域的应用处于不断扩大阶段，这是因为，这种技术具有低成本、方便、快速等优势[11]。在本次研究过程中，就是借助间接免疫荧光法对8项呼吸道病原体的IgM抗体筛查，只需要患者的一份血清样品就可以检测，避免多次采集样本的麻烦，并且检测的设备只需要使用荧光显微镜，最终的结果容易判断，所以这项技术更加简便、直观、经济、高效，加上对相关数据较为敏感，所以不仅在实验室还是临床中，所存在的价值都较高[12]。

病原学检查主要是培养，所检测的阳性率会受到样本的接种、运动、采集是否及时因素的影响[13]。分子生物学技术虽然特异性较强，但是在检验通量中并不能满足不断增加的标本数量，便捷和快速的检测方法受到更多人的关注，有学者认为LuminexxMAP多重分析技术平台、多重PCR可以有效的建立快速筛查呼吸道感染，经过对肺炎患者的咽拭子或者支气管肺泡灌洗液标本进行检验，可以快速的对感染病原体以及其亚型进行鉴定，分析流行病原学中有一定的意义[14]。

不同地区的呼吸道感染特征被多种因素所决定，在近段时间中认为，空气污染程度和患者发生呼吸道感染有密切的联系，研究表明，汽车的尾气会产生微颗粒，人类吸入后会影响呼吸道中的Th2过敏型免疫反应不断增高，降低Th1的保护性免疫功能，导致呼吸道感染升高[15]。因为呼吸道感染可能是使用其他的抗菌药物导致的，所以有研究显示，21%的呼吸道感染患者是由于其他疾病导致的一种并发症，例如：皮疹、腹泻等，所以会被滥用抗菌药物，早期的患者使用抗菌药物会形成过敏性哮喘[16]。使用合理检测手段，可以有效避免滥用抗菌药物，在国外的研究中，会制作容易理解的呼吸道感染制作手册，方便患者和家属了解更多疾病的知识，同时促进家属和患者和医生沟通中得到更多有效、准确的信息，减少抗菌药物的使用[17]。

从病原部位分离出病原体或者从病原部位取样培养出病原体在临床中被认为是一种标准，但是在培养过程中会占用较多的时间，并且常规的培养方法不能更好的培养出非经典细菌类病原体[18]。病毒等非典型细菌类病原体对于常见的抗生素并不灵敏，所以导致治疗方案受到影响。早期使用快速的检验方法，尽早明确病原体在临床中属于最为重要的目的[19]。身体受到病原体刺激后会出现体液免疫应答，产生 IgM抗体，所以使用间接免疫荧光法可以更好的检测出病原体IgM抗体，同时还可以作为临床中早期的诊治依据[20]。8项呼吸道病原体的IgM抗体筛查的试剂是将病原体作为抗原包，更好的检测出血清中的IgM抗体，使用吸附剂对血清处理，可以有效的避免IgG抗体非特异结合对研究造成影响，提高这种方法的有效性。本次研究显示：在所有住院的患者中，检测8项呼吸道病原体为阳性的为822例患者，占所有受检人群的47.7%。其中发生单项感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；双重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，可以证明此点。

秋、冬两季呼吸道病原体检出率较高，夏季、春季检出率较低，肺炎支原体(MP)在秋冬两季的检出率为(25.8%、12.1%)，我们可以得出结论，在秋冬两季导致呼吸道感染的概率会明显增加，所以在日常生活中要高度关注秋冬季中身体反应，及时诊断和治疗。

综上所述，在实施8项呼吸道病原体抗体检测对成人感染的诊断过程中，结果较为显著，在临床中具有较大的意义，应当进一步推广应用。