Linc00152在人肝细胞癌组织中的表达及与患者预后的关系

唐世磊 李宏武

中国医科大学附属第四医院第三普通外科 （辽宁 沈阳，201508）

肝细胞肝癌（LIHC）占原发性肝癌的85%以上，是我国第4位常见的恶性肿瘤，其发病率高，预后差。LIHC恶性程度较高，多数患者发现时已为进展期［1］，手术根治成功率及生存率普遍较低。因此，探索影响LIHC患者预后的潜在治疗靶点或分子机制对改善患者预后有重要价值。长链非编码RNA（Lnc RNA）是长度超过200个核苷酸的内源性小RNA，其不具备蛋白质编码功能，但越来越多的研究显示，IncRNAs与多种肿瘤的发生、发展、转移密切相关［2］。近来研究发现Linc00152作为IncTNAs中的成员之一，具有参与调控细胞骨架改变的潜在功能，且在多种癌组织中表达显著上调［3］。本研究分别检测Linc00152在LIHC癌与癌旁组织中的表达情况，并分析其与临床病理特征及与患者预后的关系，以探索Linc00152在LIHC中的功能，并探讨其作为肝癌潜在治疗靶点的可行性。

1 资料与方法

1.1 人体组织标本 80例人LIHC组织及其配对的癌旁组织由2012年1月至2014年1月于中国医科大学肿瘤医院确诊为LIHC经手术治疗并经患者签署知情同意书后取得。以80例患者肝癌组织中Linc00152相对表达量的中位数（19.87）为分界线，其表达量≥19.87的患者40例，为高表达组；表达量＜19.87的患者40例为低表达组。两组患者术前均未接受化疗及放疗。80例患者中，男50例，女30例；年龄37～76岁，中位年龄62岁，其中≤60岁44例，＞60岁36例；肿瘤直径≤3 cm 50例，＞3cm 30例；术中或术后病理提示有淋巴结转移者14例，无淋巴结转移者66例。按国际抗癌联盟（UICC）分期标准［4］进行分期：Ⅰ期＋Ⅱ期50例，Ⅲ期＋Ⅳ期30例。同时取癌旁组织标本（距离肿瘤＞2 cm）作为对照。肝癌组织及癌旁组织标本切除后，立即应用液氮快速冷冻储存以供实时荧光定量PCR检测。组织病理学评估均由两位高年资病理医生独立观察，确诊为LIHC并复查无误。所有标本检测均经患者及其家属同意，并签署知情同意书。

1.2 RNA的提取和实时荧光定量PCR检测 用Trizol试剂提取组织总RNA，根据试剂盒说明书步骤进行实时荧光定量PCR检测。反转录反应为20μl反应体系，反应条件为90°10 min，95°15 s，60°1min，40个循环。采用相对定量法，测定目的基因、GAPDH的PCR产物的Ct值，以2-ΔΔCt计算目的基因相对表达量，每例设3个复孔，实验重复3次。Lnc00152基因的上游引物序列为：5’-AAAATCACGACTCAGCCCCCC-3’；Inc00152基因的下游引物序列为：5’-AATGGGAAACCGACCAGACC-3’；GAPDH基因的上游游引物序列为；5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3；GAPDH基因的下游引物序列为：5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。

1.3 TCGA数据库 通过GEPIA［5］（http：／／gepia.cancer-pku.cn）获取TCGA 数据库中LIHC的RNA 表达数据并分析Linc00152的表达与无生病生存时间（DFS）、总有生存期（OS）的关系。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS 17.0统计软件和GEPIA生存分析功能。Linc00152表达水平与各临床病理参数关系分析采用χ2检验；Linc00152表达与肝癌患者OS、DFS之间的关系采用Kaplan-Meier法分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Linc00152在LIHC癌和癌旁组织中的表达情况 见图1。

2.2 肝癌组织中Linc00152高、低表达两组患者临床各参数比较情况 见表1。

表1 两组患者临床参数比较 （例）

2.3 Linc00152在正常肝组织（距癌肿5cm以上）和肝癌组织中的表达情况 见图2。

2.4 Linc00152在肝癌不同分期的表达情况 见图3。

2.5 两组患者OS与DFS比较 见表2。

表2 两组患者OS与DFS比较 （例）

3 讨论

近来随着基因测序计数和生物信息学的迅速发展，越来越多的LncRNA被发现与恶性肿瘤的发生发展相关［6］。尽管有很大一部分LncRNA被测序和命名，仅有一少部分LncRNA有功能，且有功能的LncRNA分子机制大多需要进一步验证，因此，就现有研究来看，探究LncRNA对预后评估的应用价值具有可靠性。

Linc00152也称细胞骨架调节因子（CRTOR），最初在研究肝癌的发生过程中被发现，具有调控基因表达的功能，在多种癌症中起关键的促癌作用［7，8］。Linc00152因在多种肿瘤中存在异常表达，因此倍受重视［9，10］。

在本研究中，我们首先通过大体标本分析了LIHC癌与癌旁组织中Linc00152的表达情况，发现Linc00152在LIHC癌组织中的表达比较在癌旁组织中的表达明显上调，这与Linc00152在胃癌、结肠癌、肾细胞癌等癌组织中表达明显高于癌旁组织的研究结果一致［12］。此外，我们通过TCGA数据库分析一方面验证了Linc00152在LIHC中高表达的情况，还进一步发现Linc00152不仅在不同分析LIHC中相对表达量存在显著差异，而且Linc00152的高表达与LIHC患者预后呈显著相关性。有细胞机制方面的研究从细胞分子水平验证了Linc00152对肺癌、肾细胞癌、肝癌等肿瘤恶性生物学行为的促进影响［13-15］。IncRNA的促肿瘤作用可能通过IncRNA-miRNA相关的ceRNA机制或IncRNA-蛋白质相互作用机制实现［16］，这仍是目前国内外研究的热点。

综上所述，Linc00152的高表达预示LIHC患者预后较差，Linc00152可能是LIHC预后检测的分子标志物及治疗的潜在分子靶点，但其具体作用机制还需要进一步深入研究。