Linc00152在人肝细胞癌组织中的表达及与患者预后的关系

2020-08-21 06:36唐世磊李宏武
中西医结合肝病杂志 2020年3期
关键词:引物标本肝癌

唐世磊 李宏武

中国医科大学附属第四医院第三普通外科 (辽宁 沈阳,201508)

肝细胞肝癌(LIHC)占原发性肝癌的85%以上,是我国第4位常见的恶性肿瘤,其发病率高,预后差。LIHC恶性程度较高,多数患者发现时已为进展期[1],手术根治成功率及生存率普遍较低。因此,探索影响LIHC患者预后的潜在治疗靶点或分子机制对改善患者预后有重要价值。长链非编码RNA(Lnc RNA)是长度超过200个核苷酸的内源性小RNA,其不具备蛋白质编码功能,但越来越多的研究显示,IncRNAs与多种肿瘤的发生、发展、转移密切相关[2]。近来研究发现Linc00152作为IncTNAs中的成员之一,具有参与调控细胞骨架改变的潜在功能,且在多种癌组织中表达显著上调[3]。本研究分别检测Linc00152在LIHC癌与癌旁组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征及与患者预后的关系,以探索Linc00152在LIHC中的功能,并探讨其作为肝癌潜在治疗靶点的可行性。

1 资料与方法

1.1 人体组织标本 80例人LIHC组织及其配对的癌旁组织由2012年1月至2014年1月于中国医科大学肿瘤医院确诊为LIHC经手术治疗并经患者签署知情同意书后取得。以80例患者肝癌组织中Linc00152相对表达量的中位数(19.87)为分界线,其表达量≥19.87的患者40例,为高表达组;表达量<19.87的患者40例为低表达组。两组患者术前均未接受化疗及放疗。80例患者中,男50例,女30例;年龄37~76岁,中位年龄62岁,其中≤60岁44例,>60岁36例;肿瘤直径≤3 cm 50例,>3cm 30例;术中或术后病理提示有淋巴结转移者14例,无淋巴结转移者66例。按国际抗癌联盟(UICC)分期标准[4]进行分期:Ⅰ期+Ⅱ期50例,Ⅲ期+Ⅳ期30例。同时取癌旁组织标本(距离肿瘤>2 cm)作为对照。肝癌组织及癌旁组织标本切除后,立即应用液氮快速冷冻储存以供实时荧光定量PCR检测。组织病理学评估均由两位高年资病理医生独立观察,确诊为LIHC并复查无误。所有标本检测均经患者及其家属同意,并签署知情同意书。

1.2 RNA的提取和实时荧光定量PCR检测 用Trizol试剂提取组织总RNA,根据试剂盒说明书步骤进行实时荧光定量PCR检测。反转录反应为20μl反应体系,反应条件为90°10 min,95°15 s,60°1min,40个循环。采用相对定量法,测定目的基因、GAPDH的PCR产物的Ct值,以2-ΔΔCt计算目的基因相对表达量,每例设3个复孔,实验重复3次。Lnc00152基因的上游引物序列为:5’-AAAATCACGACTCAGCCCCCC-3’;Inc00152基因的下游引物序列为:5’-AATGGGAAACCGACCAGACC-3’;GAPDH基因的上游游引物序列为;5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3;GAPDH基因的下游引物序列为:5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。

1.3 TCGA数据库 通过GEPIA[5](http://gepia.cancer-pku.cn)获取TCGA 数据库中LIHC的RNA 表达数据并分析Linc00152的表达与无生病生存时间(DFS)、总有生存期(OS)的关系。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS 17.0统计软件和GEPIA生存分析功能。Linc00152表达水平与各临床病理参数关系分析采用χ2检验;Linc00152表达与肝癌患者OS、DFS之间的关系采用Kaplan-Meier法分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Linc00152在LIHC癌和癌旁组织中的表达情况 见图1。

2.2 肝癌组织中Linc00152高、低表达两组患者临床各参数比较情况 见表1。

表1 两组患者临床参数比较 (例)

2.3 Linc00152在正常肝组织(距癌肿5cm以上)和肝癌组织中的表达情况 见图2。

2.4 Linc00152在肝癌不同分期的表达情况 见图3。

2.5 两组患者OS与DFS比较 见表2。

表2 两组患者OS与DFS比较 (例)

3 讨论

近来随着基因测序计数和生物信息学的迅速发展,越来越多的LncRNA被发现与恶性肿瘤的发生发展相关[6]。尽管有很大一部分LncRNA被测序和命名,仅有一少部分LncRNA有功能,且有功能的LncRNA分子机制大多需要进一步验证,因此,就现有研究来看,探究LncRNA对预后评估的应用价值具有可靠性。

Linc00152也称细胞骨架调节因子(CRTOR),最初在研究肝癌的发生过程中被发现,具有调控基因表达的功能,在多种癌症中起关键的促癌作用[7,8]。Linc00152因在多种肿瘤中存在异常表达,因此倍受重视[9,10]。

在本研究中,我们首先通过大体标本分析了LIHC癌与癌旁组织中Linc00152的表达情况,发现Linc00152在LIHC癌组织中的表达比较在癌旁组织中的表达明显上调,这与Linc00152在胃癌、结肠癌、肾细胞癌等癌组织中表达明显高于癌旁组织的研究结果一致[12]。此外,我们通过TCGA数据库分析一方面验证了Linc00152在LIHC中高表达的情况,还进一步发现Linc00152不仅在不同分析LIHC中相对表达量存在显著差异,而且Linc00152的高表达与LIHC患者预后呈显著相关性。有细胞机制方面的研究从细胞分子水平验证了Linc00152对肺癌、肾细胞癌、肝癌等肿瘤恶性生物学行为的促进影响[13-15]。IncRNA的促肿瘤作用可能通过IncRNA-miRNA相关的ceRNA机制或IncRNA-蛋白质相互作用机制实现[16],这仍是目前国内外研究的热点。

综上所述,Linc00152的高表达预示LIHC患者预后较差,Linc00152可能是LIHC预后检测的分子标志物及治疗的潜在分子靶点,但其具体作用机制还需要进一步深入研究。

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