结直肠癌的发展和个体化治疗及预后判定与肥大细胞和白细胞介数-8的相关性研究

池澈，蔺春芳，冯小莉，韩秀芳，杨智文，邢晋梁

(1.山西医科大学附属大同市第三人民医院，山西 大同 037000；2.山西医科大学第二医院，山西 太原 030001)

结直肠癌是常见的恶性肿瘤，近几年发病率明显升高，居恶性肿瘤的第3位，病死率居第5位，多数患者术后2 年局部复发和远处转移，5 年病死率仍较高[1]。结直肠癌是一种异质性肿瘤，肿瘤的炎症、免疫、微环境与结直肠癌的预后可能有一定的关系，2011年《Cell》已经明确将肿瘤细胞与炎症、免疫、微环境间互动关系定为肿瘤的第六大特性[2]。肥大细胞(MC)作为肿瘤间质的重要组成部分，在肿瘤发生、发展过程中以及参与人体内的免疫系统和炎症介质中起一定作用[3-6]。MC在预后评判中有一定的价值，但还需要大量的临床研究。白介素-8(IL-8)为趋化因子(CXC)亚家族的一员，由单核巨噬细胞、血管内皮细胞等产生。IL-8具有趋化、促进肿瘤细胞内血管内皮细胞增殖和诱导血管形成等作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集山西医科大学附属大同市第三人民医院2016年6月—2019年6月结直肠癌患者80 例，其中男58 例，女22 例，年龄(61.9±10.9)岁；结肠癌32 例，直肠癌48 例；腺癌70 例，黏液腺癌10 例；高分化41 例，中分化25 例，低分化14 例。PTNM分期：Ⅰ期6 例，Ⅱ期17 例，Ⅲ期36 例，Ⅳ期21 例。手术前患者均通过血清癌胚抗原(CEA)、全腹部增强CT、纤维结肠镜和病理检查明确诊断。排除标准：伴有糖尿病患者；免疫系统疾病患者；血液系统疾病的患者。剔除标准：术前接受新辅助治疗患者，有远处脏器转移的患者，伴有其他脏器肿瘤的患者。

1.2 方法

收集结直肠癌患者手术后的标本80 份，标本均常规术后病理分期(PTNM)，按肿瘤浸润深度、上下切缘、环周切缘和淋巴结转移情况(淋巴结数>12个)进行分期。同时标本常规石蜡切片通过ABC免疫组化法，在癌巢内MC免疫组化反应产物定位于胞浆和胞核，常规MC甲苯胺蓝染色确定胞浆内的颗粒密度。采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒检测IL-8的表达情况。确定癌巢内、癌巢边界内MC的密度、MC胞浆和胞核变化情况及IL-8的表达情况。肥大细胞计数(MCC)的方法参照Molin等[7]的方法，高倍镜下随机观察10 个癌组织区域，计数各视野内MC数，求其均数为该病例MC数。IL-8表达评分标准[8]：将癌细胞着色强度评分(0 分；1 分，弱；2 分，中；3 分，强)和阳性细胞率评分(0 分，<5%；1 分，5%～10%；2 分，11%～20%；3 分，21%～50%；4 分，<50%)之和作为该病例评分值，且将评分值0～2 分定为阴性表达病例，用(-)表示，>2 分定位阳性表达病例，用(+)表示。以博士德公司提供的阳性病例切片作为阳性对照。以0.01 M PBS液替代一抗作为阴性对照。

1.3 观察指标

癌巢内MC密度与术后病理分期对照，确定肿瘤的恶性程度和转移情况；癌巢内的MC数与癌巢边界MC数比较，阐述肿瘤的发展过程；癌巢内IL-8表达的量和癌旁黏膜内IL-8表达的量与术后病理分期对照，揭示肿瘤的发展、生长和转移情况。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 80 例结直肠癌患者的癌巢内MCC与术后病理TNM分期比较

随着肿瘤细胞浸润程度的加深，癌巢内的MCC无明显增加，差异无统计学意义(χ2=2.342，P>0.05)；对有无淋巴结转移患者MCC进行比较，差异有统计学意义(χ2=6.857，P<0.05)，但与转移淋巴结的数量比较，差异无统计学意义(χ2=1.365，P>0.05)；在有无远处脏器转移患者之间比较，MCC差异无统计学意义(χ2=1.974，P>0.05)；癌巢内MCC在高分化腺癌和低分化的腺癌之间比较，差异有统计学意义(χ2=6.352，P<0.05)；黏液腺癌和腺癌患者MCC比较，差异有统计学意义(χ2=6.965，P<0.05)(见表1和图1)。

白色箭头为癌细胞，黑色箭头为肥大细胞

2.2 交界区MCC与癌巢内MCC比较

交界区MCC与癌巢内MCC比较，差异有统计学意义(χ2=6.874，P<0.05)，但是交界区的MCC与病理分期之间比较，差异无统计学意义(χ2=2.643，P>0.05)；黏液腺癌与腺癌、低分化腺癌与高中分化腺癌之间MCC比较，差异有统计学意义(χ2=6.432，χ2=5.453，P<0.05)(见表1和图2)。

2.3 结直肠癌IL-8表达情况比较

80 例结直肠癌IL-8表达阳性病例44 例(55%)，其评分值为(1.89±1.76)分。区域淋巴结转移病例IL-8阳性表达率及其评分明显高于未转移病例，差异有统计学意义(χ2=6.437，P<0.05)。黏液腺癌IL-8表达阳性率和评分均高于腺癌，差异有统计学意义(χ2=6.763，P<0.05)；结直肠癌的浸润深度、有无远处脏器转移、分化程度IL-8表达阳性率和评分比较，差异均无统计学意义(χ2=1.054，χ2=1.965，χ2=0.984，P>0.05)(见表1和图3)。

图3 癌巢内白介素-8的表达情况(黑色箭头)

表1 癌巢内MCC和交界区MCC及IL-8表达与术后病理的关系

3 讨 论

结直肠癌是一种异质性肿瘤，肿瘤的炎症、免疫、微环境和结直肠癌的发展和预后有很大的关系[2]。同时肿瘤细胞生长过程中可刺激宿主发生一系列复杂的间质反应，伴有MC的浸润。MC是间质反应中重要的细胞，来源于骨髓CD34+前体细胞，在血管外围成熟，在需要的部位脱颗粒。MC作为一种重要的免疫细胞，它在人和动物体内分布广泛，其胞浆颗粒内含有多种生物活性物质，如生物胺、肿瘤坏死因子、白三烯、前列腺素、血小板活化因子等，肥大细胞通过释放这些生物活性物质发挥其功能。MC不仅在炎症反应和免疫反应中起重要作用，同时与肿瘤生长有关[9]。癌巢内MC浸润的数量越多，癌症的恶性程度越大，预后越差[10]。在本研究中癌巢内的MCC随着肿瘤细胞恶性程度的加深而数量有明显增加，如表中所示黏液腺癌和腺癌比较及高分化腺癌和低分化腺癌比较，差异均有统计学意义。而癌巢内的MCC与肿瘤的分期比较，差异无统计学意义。结果显示，癌组织中MCC越多，肿瘤的恶性程度越高，肿瘤生长越快，患者生存时间越短，预后越差。本研究还显示，有淋巴结转移的患者癌巢内MCC要明显多于无淋巴结转移的患者，和Gulubova等[11]的研究是一致的，就是癌巢MC浸润的数量越多，肿瘤的恶性程度越高，患者生存时间越短，预后越差。具体MC在癌巢内的作用，有待进一步研究。本研究显示对结直肠癌旁交界区的MCC明显多于癌巢内MCC，癌旁交界区MCC与肿瘤的恶性程度有明显的关系，但与肿瘤分期无关。黏液腺癌和腺癌比较及高分化腺癌和低分化腺癌比较，差异有统计学意义。其研究结果支持MC能够通过直接或间接途径抑制肿瘤的生长和转移的依据，包括：大量的MC分布于癌与正常组织交界区域，形成一个明显的浸润带(图2所示)，正是肿瘤组织与宿主之间相互作用的部位。此处的MC形态多样，以成熟型为主，同时伴有不同时期的MC出现，表明MC出现了增殖；癌组织的恶性越高，肿瘤生长越快，刺激宿主产生越强的反应，导致MC大量聚集于癌旁交界区，抑制肿瘤生长及扩散(见表1和图2)。本文作者认为：癌巢内的MC主要是由癌旁交界区迁徙而来；癌巢内MC数量并非比癌旁交界区MC数量少，可能是随癌组织的侵袭、破坏，MC不断释放颗粒，在攻击癌细胞的同时，自身也在不断崩解或消失。因此，癌巢内MC数量较癌旁交界区MC数量减少。

黑色箭头为交界区肥大细胞，白色箭头为癌与正常组织交界区

IL-8是一个具有趋化作用的细胞因子，是一种二聚体糖蛋白，在体内炎症刺激、免疫应答及创伤愈合等方面具有重要作用。随着研究的不断深入，在多种恶性肿瘤组织中检测到IL-8高表达，并发现与肿瘤的血管生成、生长、转移和复发等有密切的关系[12]。本组资料发现55%的结直肠癌IL-8阳性表达，黏液腺癌、低分化、浸润浆膜层及区域淋巴结转移病例IL-8表达阳性及其评分明显高于腺癌、高中分化、浸润肌层及区域淋巴结转移患者，差异有统计学意义(P<0.05)。与国外文献报道较一致，说明IL-8可能促进直肠癌发展、转移，IL-8表达越高，癌巢内MCC越多，患者预后越差，因此IL-8是癌巢内MC的重要化学趋化因子。MC能分泌IL-8，而IL-8对MC具有趋化作用，能趋化MC向癌组织浸润。因此有学者认为IL-8和癌组织MC数量有关[13]。

总之，结直肠癌患者恶性程度越高，癌巢内MC数量越多，预后越差，同时MC在癌周围聚集，去抑制的肿瘤生长和扩散。IL-8是一种趋化因子，肿瘤的恶性程度越高，IL-8表达率越高，MC聚集越多，IL-8可能具有促进癌巢内血管生成以及肿瘤生长、扩散和转移等作用。