桃金娘提取物体外抑菌试验

刘海隆,包佳鹭,李雪娇,郭 月,赵兴华

(1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所,海南海口571100 ； 2.河北农业大学中兽医学院,河北保定071000)

桃金娘(Rhodomyrtustomentosa)为桃金娘科桃金娘属常绿小灌木，别名山稔、岗稔、稔子，广泛生长于热带地区，是我国南方常见的观赏植物[1]，具有生长迅速，资源丰富，可用价值高的特点。在我国古代就有对桃金娘药用价值的记载，民间常用桃金娘治疗痢疾、腹泻等疾病。现代药理研究表明，桃金娘具有抑菌、抗氧化、抗炎、抗病毒、增强免疫力等多种功效[2]。

在我国的畜牧养殖业中，细菌性疾病的发病率高，且由于抗生素被长期大量使用，细菌的耐药性较强，不易治疗，对养殖业的发展产生了严重危害。沙门菌和金黄色葡萄球菌是临床上常见的致病菌,是引起细菌性食物中毒的主要细菌，我国发生的细菌性食物中毒事件40%是由沙门菌引起的[3]，20%～25%是由金黄色葡萄球菌引起的[4]，而大多数食物中毒事件都是由畜禽产品引发的。沙门菌病是规模化养殖场的主要致病菌之一，对幼畜危害较大，主要引起鸡白痢、仔猪副伤寒等疾病，表现为败血症、肠炎，也能导致孕畜流产[5]。金黄色葡萄球菌是化脓性感染中最常见的病原菌，主要引起奶牛乳房炎，可导致败血症及脓毒症等严重感染[6]，它具有较强的耐药性，对我国畜牧养殖业造成了极大的经济损失。

近年来，由于抗生素被大量使用，细菌的耐药性逐渐增强，多重耐药菌的出现使临床防治变得十分困难。中药属于天然药物，具有低残留、不易产生耐药性、绿色环保等优点，研究中药的抑菌作用有利于找到抗生素替代品。本试验对桃金娘叶、果的体外抑菌作用进行了研究，为桃金娘的进一步开发和应用提供基础和依据。

1 材料与方法

1.1 植物材料 桃金娘于2018年7月采集于海南省。

1.2 试剂与菌株 大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌为临床分离菌株各1株，由河北农业大学动物医学院传染病教研室提供。麦康凯培养基、S.S.琼脂培养基、营养琼脂培养基、MH肉汤培养基，均购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 桃金娘水煎液的制备 将桃金娘叶或果实粉碎，过200目筛，称取 10 g加 100 mL纯化水，煎煮 30 min，过滤，药渣再加纯化水 100 mL，煎煮30 min后合并 2 次滤液，旋转蒸发浓缩至 10 mL， 使每毫升含中药 1 g(浓度为1 g/mL)，于 4 ℃ 冰箱中保存备用。

1.3.2 桃金娘醇提液的制备 将桃金娘叶或果实粉碎，过 200 目筛，称取 10 g 加 100 mL 75%乙醇，在 75 ℃下水浴回流 3 h，重复 3 次，合并滤液，再用回旋蒸发仪浓缩至 10 mL，使每毫升含中药 1 g (浓度为1 g/mL)，保存在 4 ℃冰箱中备用。

1.3.3 菌液制备 将菌液涂布于营养琼脂培养基上，37 ℃恒温培养 12 h。挑取单个菌落接种于 3 mL营养肉汤中，摇床 37 ℃、220 r/min培养过夜，配制成 105CFU/mL浓度的菌液。

1.3.4 琼脂扩散药敏法测量抑菌圈 按无菌操作规程，吸取菌液 100 μL均匀涂布于MH琼脂平板，用打孔器等距离打孔，滴少量的琼脂于孔内封底，防止药液从孔底流走。每孔加入无菌药液，空白对照孔加入生理盐水，于 37 ℃培养 24 h后观察并测量其抑菌圈直径。每种提取液每个菌种做 3 个平行试验，抑菌圈取其平均值。

1.3.5 微量倍比稀释法测定最小抑菌浓度(MIC) 无菌条件下，在 96 孔板中用肉汤培养基将提取液倍比稀释成含生药量0.5、0.25、0.125、0.063、0.032 g/mL和0.016 g/mL，将配制好的菌液加入各孔，设置阴性对照孔(生理盐水)，阳性对照孔(菌液)，37 ℃培养 24 h，阴性对照孔清澈，阳性对照孔浑浊，观察其他各孔浑浊度。

2 结果

2.1 琼脂扩散法测量抑菌圈 桃金娘醇提液抑菌效果优于桃金娘水提液，其中桃金娘叶的醇提液抑菌效果优于桃金娘果醇提液。桃金娘叶醇提液对金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌作用较强，抑菌圈直径为16.77 mm、13.66 mm，而对大肠杆菌没有抑菌效果，结果见表1。

表1 桃金娘叶、果的水提和醇提液对不同菌种的抑菌作用Table 1 Bacteriostatic effect of water extract and Alcohol extract of myrtle leaves and fruits on different bacteria (mean±SD,n=3)

2.2 微量倍比稀释法测定MIC 桃金娘醇提液的抑菌效果较水提液强，桃金娘叶的醇提液对金黄色葡萄球菌和沙门菌的MIC值分别为 0.125 g/mL和0.25 g/mL，桃金娘果的醇提液对金黄色葡萄球菌和沙门菌的MIC值分别为0.25 g/mL和0.5 g/mL，结果见表2。

2.3 不同浓度桃金娘醇提液的抑菌效果 桃金娘叶的醇提液对沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用随浓度的增加而变大。浓度为1、2 g/mL和 3 g/mL的桃金娘叶醇提液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为 16.53、17.43 mm和 18.74 mm，对沙门菌的抑菌圈直径分别为 13.47、14.57 mm和 15.35 mm，结果见表3。

表2 桃金娘叶、果的水提和醇提液对不同菌种的 MICTable 2 Effect of Water extract and Alcohol extract of myrtle leaves and fruit on MIC of different bacteria (g/mL,n=3)

表3 不同浓度桃金娘叶醇提液的抑菌效果Table 3 Bacteriostatic effect of alcohol extract of myrtle leaves with different concentrations (mean±SD,n=3)

3 讨论

随着绿色健康养殖的观念逐渐深入人心，中药在养殖业中有着越来越广阔的发展前景，桃金娘具有产量高，资源丰富，价格低廉的特点，且味道甘甜，适口性好，易于被家畜接受，具有良好的应用价值。桃金娘药性平，味甘涩，根、叶、果实均可入药，且功效各不相同，桃金娘根具有通经活络，收敛止血的功效[7]；叶具有收敛解毒，健脾益血的功效[8]；果实具有养血止血，涩肠固精的功效[9]。谷荣辉等[10]采用高效液相色谱-飞行时间质谱分析出桃金娘叶特有的 4 种标识性化合物，证实其化学成分与果实存在差异。桃金娘含单宁类、多糖类、黄酮类、酚类、三萜类、挥发油类等活性成分[11]，其中大部分化学成分均可溶解于水和乙醇，因此，我们选取了桃金娘叶子和果实，并分别对其进行水提和醇提，研究桃金娘不同部位的不同抑菌效果。

近年来许多学者对桃金娘的抗菌作用进行了研究，发现桃金娘提取物具有一定的抑菌活性。Limsuwan等[12]发现桃金娘叶乙醇提取物对化脓性链球菌具有良好的抑菌活性。Saising等[13-14]研究表明，桃金娘乙酸乙酯提取物对葡萄球菌及痤疮丙酸杆菌具有显著抑制作用。周学明等[15]发现，桃金娘叶乙醇提取物对金黄色葡萄球菌具有一定的抗菌活性。本试验发现，桃金娘叶、果水提液和醇提液对临床分离的沙门菌及金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果，醇提液的抑菌作用高于水提液，且抑菌作用随浓度增加而增强，桃金娘叶的抑菌效果较果实强，桃金娘叶、果对大肠杆菌均无抑菌作用，为桃金娘的临床应用提供了依据。