太子参提取物对提高动物免疫力的系统评价与Meta分析

张炎达,潘慧青,马玉芳,李珠金

(1.福建贝迪药业有限公司,福建宁德355300 ； 2.福建宁德贝迪生物科技有限公司,福建宁德355300 ；3.郑州贝迪生物科技有限公司,河南郑州450000 ； 4. 福建农林大学动物科学学院,福建福州350002)

畜禽健康养殖已成为“减抗、无抗”新畜牧时代下的焦点，且养殖动物的防疫保健观念与认识也被不断接受并深化，对免疫保健类新兽药或新型饲料添加剂的需求市场不断扩大[1]。动物养殖中，中药制剂对动物机体免疫机能的调节是其防疫保健功能的一个重要作用机理，中药对免疫器官的发育、免疫细胞活性等方面均有积极作用，进而提高机体的非特异性免疫力[2-3]。经文献检索发现，目前在动物养殖中起免疫保健应用的中草药主要集中在黄芪、灵芝等中药[4]，鲜有补益类中药太子参的研究报道。

太子参为石竹科植物孩儿参PseudostellariaHeterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，始载于清代《本草从新》，主产于福建柘荣等地[5]，其药性平和，有生津润肺、益气健脾、保健增免之效，太子参药用成分系统分析结果发现，其富含氨基酸、多糖、皂苷、环肽、微量元素和挥发物等组分[6-8]，现代药理结果表明，太子参还具有降血糖、抗氧化、抗皮炎、增强免疫力及改善肺功能等作用[9-11]，因此太子参在未来畜禽保健类制剂的开发中具有很大的潜力，而本课题组已组建团队开展了太子参的新兽药和新型饲料添加剂的研究工作。

Meta分析是以同一目的多项既往研究为对象，运用统计学方法对多个研究结果进行系统、定量和客观的综合分析，对效应指标进行准确和科学的评估，并能解释不同研究结果间的异质性，同时可增加统计检验效能，对多个同类独立研究的结果进行汇总与合并分析，以达到增大样本含量、提高检验效能的效果，其在循证医学上应用广泛，为临床决策提供强有力的依据[12]。然而经文献检索还未发现太子参在药理方面的相关Meta分析论文，但近年来该方法在畜牧领域中已有应用[13]。本文中，作者以国内申报新兽药或饲料添加剂需要小鼠药理试验的需求为出发点，拟利用Meta分析方法，对既往发表的关于太子参提取物对提高动物(小鼠)免疫力的临床试验进行系统科学循证评价，以期为太子参提取物增强动物机体免疫力提供有价值的综合参考，也为我国畜牧领域防疫保健类新型制剂的研究提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 检索策略 计算机检索采用CNKI、万方和维普数据库和Web of science、PubMed、Science direct，同时配合检索百度学术、谷歌学术，所有检索均截至2018年9月26日。按照“PICOS”策略检索[14]，中文检索词为“太子参”、“孩儿参”、“提取物”、“粗提物”、“多糖”、“(总)皂苷”、“免疫”，英文检索词为“PseudostellariaHeterophylla”、“PseudostellariaHeterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.”、“Taizishen”，所有检索采取主题检索和自由检索相结合的方式，并手工检索纳入研究的参考文献。另外，与本搜索到文献的通讯作者咨询未发表或疑惑性的数据。

1.2 文献筛选与资料提取 利用EndNote X6软件管理初步筛选到的文献进行归类、整理和去重。由2名研究者筛选文献并提取资料，通过阅读标题和摘要进行初筛，再通过阅读全文进行复筛，根据设计的“文献资料提取表”纳入文献中的基本信息，包括第一作者、发表年份、试验干预方式、总例数、实验和对照组例数、品种和指标等，对产生分歧时则由第3名研究者介入讨论协调解决。

1.3 文献纳入与排除标准

1.3.1 文献纳入标准 (1)原始材料为已公开发表的论文文献；(2)研究设计为随机对照研究；(3)研究对象为正常的试验小鼠；(4)太子参提取物还包括“粗提物”、“多糖”、“(总)皂苷”等；(5)原始文献内容中试验组干预措施为太子参提取物的一种或几种，并设立空白对照组；(6)原始文献内容中必须含有至少一个的表达免疫力的指标，且指标数值表达方式为“平均值±标准差”；(7)各文献研究方法相似。

1.3.2 文献排除标准 (1)研究对象非试验小鼠或是非正常健康状态小鼠；(2)文章资料交代不全，数据信息不全或会议记录、商业评价性文献以及综述类文献；(3)重复发表的文献；(4)文献数据仅用平均数或直接读数标示的；(5)文献中干预物质使用了太子参植株其他部位的提取物；(6)原始文献内容中未设置对照组；(7)原始文献中未有体现免疫力指标的；(8)原始文献内容中试验组干预措施为太子参提取物联同其他药剂的。

1.4 统计分析

1.4.1 统计学方法 采用Cochrane协作网提供的RevMan 5.3软件进行已录入数据的Meta分析，数据数值表达方式为“平均值±标准差”，效应量选择连续性变量资料，计算各效应量的95%可信区间(Confidence interval，CI)，以P<0. 05表示差异具有统计学意义。若纳入研究之间无异质性，即P≥0. 05，I2<50%时，采用固定效应(Fixed effect model，FEM)模型分析，反之存在异质性(P<0. 05，I2>50%)，分析其异质性来源，采用随机效应(Random effect model，REM)模型进行分析。并分析其异质性来源及纳入研究的资料分布形态，当结果以纵坐标呈倒置的漏斗状对称分布时，提示没有发表偏倚，而呈非对称性分布，说明存在发表偏倚。

1.4.2 敏感性分析 文章在采用RevMan 5.3软件进行Meta分析后，通过变换分析模型再次进行分析比较，考察所得结果是否与原模型分析结果的一致性，进而来判断试验中的Meta分析结果的稳定性[15]。

1.4.3 安全性分析 文章中选择已纳入Meta分析的文献进行内容详细阅读，记录太子参提取物干预试验组中是否有其不良反应的内容，数据汇总分析。

2 结果与分析

2.1 文献检索与筛选 按照检索策略共得到文献32篇，中文23篇，英文9篇，去除重复发表与相同的文献11篇，阅读文献题目及摘要而排除非临床研究、非对照试验、会议记录、综述的文献8篇，进一步阅读全文排除不符合纳入标准的文献6篇，最终纳入7篇文献，发表时间为1998-2015年，文献类型包括期刊和学位论文，所纳入文献的基本信息情况见表1。

表1 纳入文献的基本特征信息表Table 1 Basic characteristics information table included in the literature

2.2 对小鼠免疫器官胸腺重量的Meta分析 有5篇文献报道了太子参提取物对小鼠免疫器官胸腺重量的影响结果，各研究间异质性I2=90%>50%，存在明显异质性，采用随机效应(REM)模型进行合并分析。Meta分析结果显示，与空白对照组相比，置信区间落在无效线的右侧，表明太子参提取物干预试验组的效应量大于对照组，且试验组可显著增加小鼠胸腺重量 [MD=0.69，95% CI(0.25，1.13)，P<0.01]，差异具有统计学意义，如图1所示。

图1 太子参提取物对小鼠免疫器官胸腺重量的Meta分析结果
Fig.1 Meta-analysis results of the extract ofPseudostellariaHeterophyllaon the thymus weight of immune organs of mice

2.3 对小鼠免疫器官脾脏重量的Meta分析 有5篇文献报道了太子参提取物对小鼠免疫器官脾脏重量的影响结果，各研究间异质性I2=3%<50%，具有较好的同质性，采用固定效应(FEM)模型进行合并分析。Meta分析结果显示，与空白对照组相比，置信区间落在无效线的右侧，干预试验组的效应量大于对照组，表明试验组可显著增加小鼠脾脏重量 [MD=0.59，95% CI(0.33，0.84)，P<0.01]，差异具有统计学意义，如图2所示。

图2 太子参提取物对小鼠免疫器官脾脏重量的Meta分析结果
Fig.2 Meta-analysis results of the extract ofPseudostellariaHeterophyllaon the spleen weight of immune organs of mice

2.4 对小鼠免疫细胞吞噬活性指数的Meta分析 有7篇文献报道了太子参提取物对小鼠免疫细胞吞噬活性指数的影响结果，各研究间异质性I2=63%>50%，存在异质性，采用随机效应(REM)模型进行合并分析。Meta分析结果显示，与空白对照组相比，置信区间落在无效线的右侧，表明太子参提取物干预试验组的效应量大于对照组，能够显著提高小鼠免疫细胞的吞噬活性指数 [SMD=1.20，95% CI(0.76，1.65)，P<0.01]，差异具有统计学意义，如图3所示。

图3 太子参提取物对小鼠免疫细胞吞噬活性指数的Meta分析结果
Fig.3 Meta-analysis results of the extract ofPseudostellariaHeterophyllaon thephagocytic activity index of the mice immune cells

2.5 对小鼠免疫后血清中溶血素水平的Meta分析 有4篇文献报道了太子参提取物对小鼠免疫后血清中溶血素水平的影响结果，各研究间异质性I2=0%<50%，具有很好的同质性，采用固定效应(FEM)模型进行合并分析。Meta分析结果显示，与空白对照组相比，置信区间落在无效线的右侧，干预试验组的效应量大于对照组，表明试验组能显著提高小鼠免疫后血清中溶血素水平[SMD=0.51，95% CI(0.14，0.87)，P<0.01]，差异具有统计学意义，如图4所示。

图4 太子参提取物对小鼠免疫后血清中溶血素水平的Meta分析结果
Fig.4 Meta-analysis results of the extract ofPseudostellariaHeterophyllaon theserum hemolysin level after immunization in mice

2.6 敏感性分析 Meta分析结果处理后，通过变换分析模型再次进行分析比较，所得统计结果(表2)与原模型分析结果一致，表明本论文中上述Meta分析结果比较稳定，在一定程度上可反映文章中合并结果的可靠性，本结论比较可靠。

表2 敏感性分析Table 2 Sensitivity analysis

2.7 太子参提取物安全性分析 文章中Meta分析总共纳入7篇文献，发表时间为1998-2015年，所有文献研究均未有太子参提取物或多种太子参源纯化物对小鼠灌服造成的不良反应，提示太子参提取物(高、中、低剂量)对提高小鼠机体免疫力的影响作用过程中具有相对较好的安全性。

2.8 发表偏倚分析 采用倒置漏斗图对纳入Meta分析的文献是否存在发表偏倚进行判断，若纳入文献分布呈现倒漏斗形式，且漏斗图结构对称，则表明文献的发表偏倚性较小或无偏倚性，反之纳入文献的发表则存在偏倚性。本试验中，指标脾脏重量(图5B)、免疫细胞吞噬活性指数(图5C)和溶血素水平(图5D)文献大体在漏斗图内，但胸腺重量(图5A)有4篇文献在漏斗图外。其中，图5-A、B、C对称性相对较差，表明此试验有一定的发表偏倚性；图5D图形相对对称，表明此试验的发表偏倚性相对较小。

图5 干预试验组与对照组指标比较的倒漏斗图分析
Fig.5 Funnel plot of comparison of the intervention test group and the control groupA:小鼠胸腺重量; B:小鼠脾脏重量; C:小鼠免疫细胞吞噬活性指数; D:小鼠免疫后血清中溶血素水平 A: Thymus weight of mice; B: Spleen weight of mice； C: The phagocytic activity index of the mice immune cells; D:The serum hemolysin level after imunization in mice

3 讨论

文章中，作者以国内申报新兽药或饲料添加剂需要小鼠药理试验的需求为出发点，利用Meta分析方法对既往发表的太子参提取物对提高动物(小鼠)免疫力的临床试验进行系统科学循证评价，以期为太子参提取物对增强动物机体免疫力提供有价值的综合参考，也为我国畜牧领域防疫保健类新型制剂的研究提供新的思路。然而，Meta分析是建立在已有文献数据的基础之上，结论可靠性和文献偏倚性受纳入文献质量的影响较大[22]，本文皆以系统评价太子参提取物对增强动物机体免疫力的作用影响情况，虽然进行关键词与自由词对国内外数据库进行文献检索，但纳入Meta分析的7篇文献皆来源国内一般专业期刊和学术论文，文献量不够大，且部分文献存在RCT样本量较小的情况，进而造成Meta分析的局限性和文献发表偏倚。另外，本评价纳入的文献中涉及太子参提取物的组分类别、浓度、计量不是完全一致，动物对象小鼠的饲喂环境、日龄、体重和干预时间也不是完全一样，同时在文献中的指标计算方法和数值单位也存在部分不一致的情况，这些因素均会导致本文中Meta分析异质性和偏倚性的产生。最后造成文章中文献发表偏倚的还包括纳入分析的文献结果均为阳性结果，缺少包括阴性结果的全部相关数据，这与目前国内学者不愿发表阴性结果的论文有关联。本试验中偏倚分析结果显示，所纳入文献存在一定的发表偏倚性，但敏感分析结果显示Meta分析结果较为稳定，具有一定的可靠性和参考价值，未来仍有待大规模RCT试验进行验证。同时建议今后国内专家学者规范统一畜牧领域内RCT实施标准，严格按照RCT试验方案执行，详细报告指标数据，为Meta分析的准确性和有效性提供保障。

补益中药太子参药性平和，有生津润肺、益气健脾、保健增免之效，且富含氨基酸、多糖、皂苷、环肽、微量元素和挥发物等组分，目前其独特的药理功效以及保健作用不断得到认可，逐渐备受医药界所重视。本文系统评价了太子参提取物对提高动物(小鼠)免疫力的临床试验结果，表明太子参提取物可显著提升正常小鼠的机体免疫力，促进动物免疫器官胸腺、脾脏的发育和免疫细胞免疫活性的增强。胸腺是T淋巴细胞分化成熟的器官，为重要的中枢免疫器官；脾脏可分化大量T、B淋巴细胞参与免疫，是重要的外周免疫器官，因此动物机体的免疫器官发育的状况直接影响其免疫力的高低[21]。同时，王家葵等研究发现，太子参总皂苷可明显提高正常小鼠胸腺、脾脏DNA和RNA的含量，同剂量的太子参粗多糖能提高其脾脏DNA和胸腺RNA含量，显著促进小鼠免疫器官的内部生物功能表达[16]。另外，纳入文献指标中太子参提取物对小鼠免疫细胞吞噬活性指数及免疫后血清中溶血素水平的有积极作用，提示太子参可用于动物免疫功能的增强与保护作用。因此，补益中药太子参在未来开发新型动物保健类药品或饲料添加剂具有较大潜力。

4 结论

本系统评价通过对21项临床对照试验的Meta分析，循证分析结果相对稳定可靠，结果表明，太子参提取物可显著提升正常小鼠的机体免疫力，促进动物免疫器官发育和免疫活性的增强，较安全有效，提示中药太子参在开发新型动物保健类药品或饲料添加剂具有较大潜力。