EMR-Lipid-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定猪肉中多种氨基甲酸酯类农药残留量

钟水桥 梁美艳

摘 要：建立EMR-Lipid-液相色谱-串联质谱法快速测定猪肉中12种氨基甲酸酯类农药残留量。样品经乙腈均质提取，无水乙酸钠去除水分，采用增强型基质去除净化管EMR-Lipid净化后，以超高效液相色谱-串联质谱法多反应监测扫描模式进行定性定量分析。方法线性相关系数均大于0.998，检出限为0.5 μg·kg-1，定量限为1.0 μg·kg-1，在1、2、5 μg·kg-13个浓度添加水平下，平均回收率为76.1%～115.1%，相对标准偏差为2.3%～4.6%。该方法灵敏度高、重现性好、回收率稳定且检测速度快、定量准确，适用于猪肉中多种氨基甲酸酯类农药残留量测定。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱法;EMR-Lipid;氨基甲酸酯类;猪肉

Abstract：A new method of determination for 12 carbamate pesticide residues in Pork by UHPLC-MS/MS was developed.The samples were homogeneous extracted with acetonitrile，then anhydrous sodium acetate remove the water， After purification with enhanced matrix removal purification tube EMR-Lipid， the qualitative and quantitative analysis was performed by using UHPLC-MS/MS multiple reaction monitoring scanning mode.The linear correlation coefficients of the methods were all greater than 0.998， the detection limit was 0.5 μg·kg-1， and the limit of quantification was 1.0 μg·kg-1. Average recoveries for 12 targets at spiked levels of 1， 2 and 5 μg·kg-1 ranged from 76.1% to 115.1% with relative standard deviations of 2.3% to 4.6%. This method has high sensitivity， good reproducibility， stable recovery， rapid detection， and accurate quantification， it is suitable for the determination of various carbamate pesticide residues in pork.

Key words：UHPLC-MS/MS; EMR-Lipid; Carbamate pesticides; Pork

氨基甲酸酯類农药具有低毒、高效、分解快、残留期短和选择性强的特点，作为有机氯农药的替代品，被广泛使用。玉米、小麦等饲料作物中残留的氨基甲酸酯类农药可经过养殖动物摄入并通过食物链进入人体。目前国内对氨基甲酸酯类农药残留分析的文献报道有水产品、水果、蔬菜、中药等[1-4]，但在动物源性食品中氨基甲酸酯类农药残留的研究较少[5-6]，因此迫切需要建立一种简便、快速、准确的方法检验动物食品中的氨基甲酸酯类残留。

EMR-Lipid是一种新型吸附材料，能够选择性除去样品萃取物中的主要脂类且不会造成分析物的损失。本研究通过对样品前处理条件的优化，即乙腈提取，EMR-Lipid净化后上LC-MSMS进行分析，此方法极大的提高猪肉中脂类基质和氨基甲酸酯类农药的有效分离和检测，从而建立了一种简便、快速、准确测定动物源性食品中氨基甲酸酯类的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器。液相色谱-质谱联用仪（LC-1290/QQQ-6490）：安捷伦科技有限公司;分散均质机T18 DS25：德国IKA;离心机Allegra X-15R：BECKMAN;EMR-Lipid（3 mL/300 mg）：安捷伦科技有限公司;无水乙酸钠：国药集团化学试剂有限公司;乙腈（HPLC级）：德国Merck公司;

试剂。12种氨基甲酸酯类农药标准品：涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、速灭威、残杀威、克百威、甲萘威、异丙威、仲丁威、灭虫威（纯度>95.0%），购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 标准储备液的配制

分别称取12种农药标准品10.00 mg（精确至0.000 1 g）于12个10 mL容量瓶中，加少量乙腈振荡溶解后，以乙腈定容，配制成1.0 mg·mL-1的12种农药单标储备液，储存于4 ℃冰箱。

1.3 试验方法

1.3.1 提取及净化

称取5 g试样，精确至0.01 g，于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈均质5 min，加入2 g无水乙酸钠，振荡2 min，8 000 r·min-1离心5 min，取上清液3 mL过EMR-Lipid净化柱，弃去初滤液，续滤液过0.22 μm有机滤膜，供LC-MS/MS测定。

1.3.2 色谱条件

色谱柱：ACE Ultracore Super C18柱（2.5 μm，x2.1 mm× 100 cm）。流动相：0.1%甲酸水（A相）和乙腈（B相）。梯度洗脱程序：0～0.5 min，20%B～35%B;0.5～2.0 min，35%B～90%B;2.0～3.5 min，90%B;流速：0.35 mL·min-1。柱温：35 ℃。进样量：2.0 μL。

1.3.3 质谱条件

离子源为电喷雾离子源（ESI），正离子模式，多反应监测（MRM）在分析过程中，以离子对信息比较和保留时间进行定性分析;以母离子和响应高的子离子通道进行定量分析，12种氨基甲酸酯类农药定性定量离子对、碰撞能量（CE）如表1所示。

2 结果与分析

2.1 线性关系与检出限

取1.2中标准储备液分别采用空白猪肉提取液作为标准溶液的稀释液进行稀释，配制成约1.0～10.0 μg·L-1的混合标准工作溶液。以峰面积（Y）对其质量浓度（z）作标准曲线。结果表明，在相应质量浓度范围内，12种氨基甲酸酯类农药的响应值与其质量浓度的线性关系良好（r2>0.998）。各农药的LOD及LOQ分别为0.5 μg·kg-1和1.0 μg·kg-1。结果见表2。

2.2 回收率与精密度

在新鲜猪肉空白试样中加入混合标准溶液（设1、2、5 μg·kg-13个浓度梯度），每个浓度设置6个重复，按上述前处理和分析方法，测农药在猪肉试样中的添加回收率，结果见表2，12种氨基甲酸酯类农药在猪肉中的平均回收率为76.1%～115.1%，相对标准偏差为2.3%～4.6%，该方法具有较好的精密度，符合痕量分析的要求。

3 结论

本研究将EMR-Lipid用于猪肉中农药残留的前处理净化，并结合HPLC-MS/MS分析，建立了一种快速、准确测定猪肉中12种氨基甲酸酯类农药残留的分析方法。实验结果表明EMR-Lipid净化效果良好，有效降低了猪肉中油脂。该方法操作简便、选择性好、准确度高，可作为猪肉中多种氨基甲酸酯类农药残留的测定方法。

参考文献：

[1]潘 琳，王雪梅，宋跃进，等.蛋白质基体对提取测定水产品中氨基甲酸酯类农药残留的影响及其消除[J].化学研究与应用，2016，28（10）：1445-1449.

[2]王连珠，周 昱，黄小燕，等.基于QuEChERS提取方法优化的液相色谱一串联质谱法测定蔬菜中51种氨基甲酸酯类农药残留[J].色谱，2013，31（12）：1167-1175.

[3]刘 雪.超高效液相色譜——串联质谱法测定银杏叶中氨基甲酸酯类农药残留[D].泰安：山东农业大学，2012.

[4]何华丽，徐小民，吕美玲，等.液相色谱-串联质谱法测定生姜中的氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留[J].分析测试学报，2014，33（2）：197-202.

[5]邢 宇.基于新型分散固相萃取技术测定动物源食品中的农药多残留[D].泰安：山东农业大学，2016.

[6]吴 刚，王华雄，俞春燕，等.加速溶剂萃取-GPC液相色谱柱后衍生化测定动物源性食品中多种氨基甲酸酯类农药残留量[J].中国食品卫生杂志，2008（5）：409-413.