瘀血痹片抗炎镇痛药效作用研究

李汝卓，潘韬文，李 斌，李 坤*

(1.辽宁师范大学化学化工学院，辽宁 大连 116029；2.大连医科大学中西医结合研究院，辽宁 大连 116044；3.大连医科大学药学院，辽宁 大连 116044)

瘀血痹片是传统中药复方，由乳香、没药、红花、威灵仙、川牛膝、香附、姜黄、当归、丹参、川芎和黄芪11味中药材构成，主治瘀血阻络所致的痹症[1]。复方中每种药材均具有广泛的药理活性，其中威灵仙、香附具有良好的抗炎活性[2-3]。目前，国内并无对于瘀血痹片抗炎作用的相关报道，因此本实验以瘀血痹片为主要研究对象，通过建立二甲苯耳肿胀小鼠模型及冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验，研究瘀血痹片的抗炎活性；通过扭体法和热板法研究瘀血痹片镇痛作用。

1 材料和方法

1.1 实验动物与材料

SPF级昆明种小鼠，雄性和雌性，体重(20±2)g，均由大连医科大学实验动物中心提供。实验所使用动物严格按照实验室动物保护指导原则进行，所使用动物征得大连医科大学动物实验伦理委员会同意。

瘀血痹片(本溪国药中成药工程技术研究中心有限公司)，羧甲基纤维素钠(天津市大茂化学试剂厂)，地塞米松(大连凯美化工工程有限公司)，二甲苯(天津市科密欧化学试剂有限公司)，冰醋酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)，灌胃针(大连凯美化工工程有限公司)，7 mm打孔器(大连凯美化工工程有限公司)。

1.2 给药设计

瘀血痹片成人临床推荐用量为一次5片，一日3次。根据人和动物间按体表面积等效剂量换算，动物的剂量=等剂量比值×(药量/成人标准体重)，设置成人标准体重为70 kg。根据推荐剂量，设定本实验的低剂量组为正常给药剂量，中剂量组为正常给药剂量的2倍，高剂量组为正常给药剂量的3倍。即低剂量1.25 g/kg，中剂量2.50 g/kg，高剂量3.75 g/kg。

1.3 二甲苯致小鼠耳肿胀实验

40只雄性SPF级昆明小鼠随机分为5组(8只/组)，分别为阴性对照组(模型组，给予等剂量的0.5% CMC-Na溶液),阳性对照组(地塞米松组，2 mg/kg),瘀血痹片低、中、高剂量组。各组小鼠每日上午固定时间灌胃给药1次，连续给药7 d。末次给药后30 min，将30 μL二甲苯涂于小鼠右耳廓两面，左耳不涂作为对照。1 h后小鼠颈椎脱臼处死，剪下小鼠双耳廓，用直径7 mm的打孔器在两耳对称位置取下左右耳片，称重。以左右耳片重量差作为耳廓肿胀度表示药物抗炎效应，计算抑制率[4]。

1.4 冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验

40只雄性SPF级昆明小鼠同上随机分为5组(8只/组)，各组小鼠每日上午固定时间灌胃给药1次，连续给药7 d。末次给药后1.5 h，尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液(10 μL/g)，10 min后腹腔注射0.6%冰醋酸生理盐水溶液(10 μL/g)，20 min后脱颈椎处死。每只腹腔注射5 mL生理盐水，并轻揉腹部3 min，然后从腹腔内吸出3 mL左右腹腔冲洗液(冲洗液如被血液污染，则弃去不用)，1000 r/min离心5 min，用分光光度计于590 nm波长处测定吸光度(A)值[5]。

1.5 醋酸致小鼠扭体反应实验

40只雄性SPF级昆明小鼠同上随机分为5组(8只/组)，各组小鼠每日上午固定时间灌胃给药1次，连续给药7 d。末次给药后30 min，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10 mL/kg，随即将小鼠单只放入塑料饲养盒中，观察注射醋酸后小鼠第一次出现扭体的时间(潜伏期)和15 min内的扭体次数[6]。

1.6 热板法实验

40只雄性SPF级昆明小鼠同上随机分为5组(8只/组)，各组小鼠每日上午固定时间灌胃给药1次，连续给药3 d。分别于末次给药后30、60、120 min观测药物对小鼠热板痛阈的影响[7]。

2 结 果

2.1 瘀血痹片对小鼠耳肿胀度的影响及抑制率

从表1可以看出，与模型组相比，瘀血痹片低、中、高剂量组都有抑制炎症的作用(与模型组相比，P<0.05)，以瘀血痹片中、高剂量药效为好。

表 1 各组小鼠耳肿胀度及抑制率(n=8)

与模型组比较:*:P<0.05,**:P<0.01

2.2 瘀血痹片对小鼠腹腔冲洗液吸光度值的影响

结果显示，空白组，瘀血痹片低、中、高剂量组及地塞米松组吸光度值分别为0.147±0.011、0.114±0.025、0.095±0.021、0.085±0.029和0.068±0.016。与空白组相比,瘀血痹片低、中、高剂量组均表现出抑制毛细血管通透性的作用，且具统计学差异(P<0.05)，并呈量效关系。

2.3 瘀血痹片对小鼠扭体潜伏期及次数的影响

扭体法通过腹腔注射醋酸引起腹部产生持久性的急痛，使小鼠出现扭体反应，表现出腹部向内凹、臀部不自然歪扭同时后肢伸张，呈现出极为特殊的姿势。从表2中可以看出，给药组与模型组相比潜伏期时间均有明显增加，15 min内扭体次数明显减少，均具有抑制疼痛的作用，瘀血痹片中、高剂量组两组抑制率较高，具统计学差异。

表 2 各组小鼠潜伏期、15 min内扭体次数(n=8)

与模型组比较:*:P<0.05,**:P<0.01

2.4 瘀血痹片对小鼠给药后不同时间痛阈的影响

热板法借助外界热刺激，以物理致痛的方式评价药物的镇痛效果。实验中小鼠会表现出不安、举前足、舔后足等应激反应，本实验以舔后足为评价标准。从表3中可以看出，随着时间的增加，各给药组小鼠的痛域值呈上升趋势，且具量效关系。以给药后30～60 min呈现最大耐受力，具显著性差异。

表 3 各组小鼠不同时间痛域值

与空白组比较，*:P<0.05

3 讨 论

瘀血痹片中包含多种中药材，可对风湿类疾病进行全面治疗，通过消炎、镇痛达到标本兼治的疗效，即可在治病的同时缓解病患的不适感[8]。通过实验表明，瘀血痹片可以有效抑制二甲苯造成的小鼠耳肿胀，降低毛细血管通透性，具有良好的抗炎活性；镇痛实验结果则表明，无论是化学刺激带来的内部疼痛还是物理刺激带来的外部疼痛，瘀血痹片都能有效地进行缓解。随着科技的不断进步，传统中药的价值逐渐被发掘。通过与现代分析手段相结合，瘀血痹片良好的抗炎、镇痛效果被证实，为疾病的治疗提供理论研究依据。且在现代科技的支持下，研究复方中药必将更具发展空间。