CXCL5、HMGB1在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

孔丽蕊，张 艳，徐晓华，李鸿钏，刘 翔，谢叶红，蒋顺宁

(四川省成都市郫都区中医医院检验科，四川成都 611730)

肺癌是目前发病率最高的恶性肿瘤，占肿瘤死因第一位[1]。非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的80%，其具有发病隐匿、病情进展迅速的特点，70%～80%患者就诊时已处于中晚期，治疗后复发率高，且预后不良[2]。近年来，临床关于影响NSCLC发生、发展因素的研究越来越多。CXC趋化因子配体5(CXCL5)是一种小分子蛋白质，具有较强的粒细胞趋化作用[3]。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是广泛存在于真核细胞核中的重要非组蛋白，具有诱导炎性反应，促进肿瘤细胞增殖分化，调节血管内皮细胞功能等生物学作用[4]。相关研究显示，CXCL5、HMGB1在肾癌、胃癌等恶性肿瘤中异常表达，并与这些肿瘤的进展密切相关[5-6]。但目前关于CXCL5、HMGB1在NSCLC中表达的相关研究较少，本研究检测了CXCL5、HMGB1在NSCLC中的表达情况，并分析了CXCL5、HMGB1与NSCLC患者临床病理特征及预后的关系，旨在为临床NSCLC的诊疗提供理论依据，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2013年6月至2014年6月本院收治并确诊的81例原发性NSCLC患者为研究对象。收集所有患者的NSCLC组织及经病理检查证实未被浸润的癌旁正常组织用于本研究。所有患者均实施肺癌根治性手术治疗。81例NSCLC患者中，男54例，女27例；年龄23～80岁，中位年龄54岁；<54岁患者26例，≥54岁患者55例；肿瘤直径<3 cm的有39例，≥3 cm的有42例；组织学分级Ⅰ级18例，Ⅱ级34例，Ⅲ级29例。纳入标准：(1)经病理检查确诊为NSCLC；(2)本次治疗前未接受放、化疗；(3)治疗依从性较好，能定期随访；(4)心肝肾等重要脏器功能正常；(5)所有标本收集均征得患者知情同意。排除标准：(1)临床资料不完整；(2)随访期间失访；(3)合并其他恶性肿瘤。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1检测方法 将收集的81例NSCLC组织及癌旁正常组织于离体1 h内用10%甲醛溶液固定，脱水，用石蜡包埋成块，采用组织切片机(北京中西远大科技有限公司，型号：M398419)切成4 μm连续切片，二甲苯脱蜡，柠檬酸钠缓冲液抗原修复，磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗，内源性过氧化物酶灭活，加山羊血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)封闭。NSCLC组织和癌旁正常组织分别滴加稀释比例为1∶200的兔抗人CXCL5单克隆抗体(上海群己生物科技有限公司)和稀释比例为1∶200的兔抗人HMGB1单克隆抗体(上海煊翎生物科技有限公司)，4 ℃孵育12 h后37 ℃复温45 min，PBS漂洗，滴加稀释比例为1∶500的羊抗鼠IgG(深圳市豪地华拓生物科技有限公司)，25 ℃孵育45 min，PBS漂洗，使用DAB显色试剂盒(上海科敏生物科技有限公司)显色5 min，苏木精复染，梯度乙醇脱水，中性树脂封片剂固封，显微镜(武汉科赛思机电有限公司，型号：ISM-M2000-DIC)下观察CXCL5、HMGB1的表达情况。结果判定：由两名具有执业资格的病理科医师对染色结果进行判定。染色程度评分：0分为细胞不着色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。阳性细胞百分比评分：0分为阳性细胞百分比<5%，1分为阳性细胞百分比为5%～25%，2分为阳性细胞百分比为>25%～50%，3分为阳性细胞百分比>50%。染色程度评分与阳性细胞百分比评分之和为最终得分，最终得分0～4分判定为阴性表达，>4分判定为阳性表达。

1.2.2随访 采用门诊复查的方式进行随访，术后第1年每3个月随访1次，第2年每6个月随访1次，随访至患者死亡或术后60个月止。记录所有患者的总生存率、无进展生存率。

1.3统计学处理 采用SPSS22.0软件对数据进行统计分析。计量资料不满足正态分布的以M表示；计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1CXCL5、HMGB1在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达情况 免疫组织化学染色法结果显示，CXCL5、HMGB1均表达于细胞质内，表现为棕黄色颗粒，见图1、2。NSCLC组织中CXCL5阳性54例，占66.67%，癌旁正常组织中CXCL5阳性16例，占19.75%，CXCL5在NSCLC组织中的阳性率明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中HMGB1阳性65例，占80.25%，癌旁正常组织中HMGB1阳性21例，占25.93%，HMGB1在NSCLC组织中的阳性率明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 CXCL5、HMGB1在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达情况[n(%)]

2.2NSCLC组织中CXCL5、HMGB1阳性率与患者临床病理特征的关系 不同性别、年龄、病理类型、肿瘤直径患者NSCLC组织中CXCL5阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)；不同组织学分级、临床分期、淋巴结转移、血管浸润患者NSCLC组织中CXCL5阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄、病理类型、肿瘤直径、血管浸润患者NSCLC组织中HMGB1阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)；不同组织学分级、临床分期、淋巴结转移患者NSCLC组织中HMGB1阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 NSCLC组织中CXCL5、HMGB1阳性率与患者临床病理特征的关系[n(%)]

注：A为CXCL5在NSCLC组织中的阳性表达；B为CXCL5在癌旁正常组织中的阴性表达。

图1 CXCL5在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达情况

注：A为HMGB1在NSCLC组织中的阳性表达；B为HMGB1在癌旁正常组织中的阴性表达。

图2 HMGB1在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达情况

2.3CXCL5阳性和阴性患者的生存分析 CXCL5阳性患者总生存率、无进展生存率均明显低于CXCL5阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3；Kaplan-Meier生存曲线见图3、4。

表3 CXCL5阳性和阴性患者总生存率、无进展生存率比较(%)

图3 CXCL5阳性和阴性患者总生存率的Kaplan-Meier生存曲线

图4 CXCL5阳性和阴性患者无进展生存率的Kaplan-Meier生存曲线

2.4HMGB1阳性和阴性患者的生存分析 HMGB1阳性患者总生存率、无进展生存率均明显低于HMGB1阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4；Kaplan-Meier生存曲线见图5、6。

表4 HMGB1阳性和阴性患者总生存率、无进展生存率比较(%)

图5 HMGB1阳性和阴性患者总生存率的Kaplan-Meier生存曲线

图6 HMGB1阳性和阴性患者无进展生存率的Kaplan-Meier生存曲线

3 讨 论

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，可向脑、肝脏、胰腺等脏器转移，脑转移时可因压迫产生脑疝而危及生命，因此，肺癌已成为对患者健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一[7]。肺癌病理类型包括小细胞肺癌和NSCLC，其中NSCLC是肺癌最常见的病理类型[8]。NSCLC早期症状不典型，常在局部生长、浸润、压迫组织引起特异性症状时被发现，而此时NSCLC多已处于中晚期，失去最佳治疗时机[9]。随着分子生物学技术快速发展，肿瘤分子标志物在恶性肿瘤诊断中的应用价值受到广泛关注。寻找与NSCLC发生、发展相关的分子标志物应用于NSCLC诊断及治疗，对提升患者预后有重要指导意义。

趋化因子是一类能够吸引白细胞移行到感染部位的低分子量蛋白质，能够与淋巴组织中的抗原提呈细胞相互作用而监视病原体入侵；还可在正常组织修复、血管生成、炎性反应、恶性肿瘤进展过程中发挥重要作用[10]。CXCL5属于趋化因子蛋白家族的一员，具有较强的粒细胞趋化作用，可促进免疫细胞杀伤肿瘤细胞，又可与其受体结合促进肿瘤细胞增殖、侵袭及转移[11]。据报道，NSCLC组织中存在趋化因子表达水平升高现象[12]，这在本研究中也得到了证实。本研究结果显示，CXCL5在NSCLC组织中的阳性率明显高于癌旁正常组织，提示CXCL5可能参与了NSCLC的发生。进一步分析显示，组织学分级高、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有血管浸润的患者NSCLC组织中CXCL5阳性率高于组织学分级低、临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、无血管浸润的患者；CXCL5阳性患者总生存率、无进展生存率均低于CXCL5阴性患者，提示CXCL5与NSCLC患者的临床病理特征及预后相关，CXCL5可能参与了NSCLC的病情进展。其原因可能是CXCL5阳性患者的肿瘤新生血管较多，血管浸润及淋巴结转移更快；同时，组织分化程度越低，肿瘤恶性程度越高，患者预后生存期就越短。

HMGB1为高迁移率族蛋白家族成员之一，是一种广泛分布于哺乳动物细胞的高度保守核蛋白，细胞核中HMGB1可与DNA结合而参与DNA转录、修饰[13]；且由淋巴细胞、粒细胞、单核-巨噬细胞等免疫细胞分泌的HMGB1可参与机体炎性反应。HMGB1还可与特异性细胞膜受体结合而参与肿瘤细胞增殖、浸润及转移[14]。据报道，前列腺癌、结肠癌、甲状腺癌组织中存在HMGB1过表达的现象[15]。本研究结果显示，HMGB1在NSCLC组织中阳性率明显高于癌旁正常组织，且组织学分级越高、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的NSCLC患者HMGB1阳性率越高；且HMGB1阳性患者总生存率、无进展生存率均低于HMGB1阴性患者，提示HMGB1与NSCLC的发生、临床病理特征及预后有密切关系。其原因可能如下：NSCLC细胞在生长及转移过程中伴随血管快速生长，血管生长过程中会与正常细胞竞争营养，正常细胞由于缺乏生长所需营养而死亡，死亡细胞被动分泌HMGB1，导致NSCLC组织中HMGB1表达水平明显升高。

4 结 论

综上所述，CXCL5、HMGB1在NSCLC组织中呈高表达，其表达情况与NSCLC患者临床病理特征及预后有关。CXCL5、HMGB1可能对NSCLC的临床诊断及预后评估有一定指导意义。但本研究纳入病例数较少，结果有待扩大样本量进一步研究证实。