红心猕猴桃总皂苷的含量测定

罗安福 叶冬梅（通讯作者） 席加喜 蒙明瑜 王丹阳

(1 广西壮族自治区人民医院 广西 南宁 530021）

（2 广西医科大学药学院 广西 南宁 530022）

猕猴桃(Actinidin Chinesis PIanch)，又名藤梨、羊桃等，为猕猴桃科植物猕猴桃的果实,猕猴桃的药食应用历史悠久[1]。《本草拾遗》记载“主骨接风，瘫痪不遂，长年白发、痔疮、调中下气。”《食疗本草》记载“取瓤和蜜，去烦热，主黄疸，止消渴”。现代研究表明，猕猴桃果具降血脂、保肝护肝等作用[2，3]，是基于其内含多种有效成份，包括多糖、多酚、黄酮等。同时还证实猕猴桃尚含有皂苷成份[4]，中药活性成分皂苷具有降血糖、血脂，抗炎，抗衰老，抗氧化以及调节免疫等作用等生物活性作用[5]。近年来，红心猕猴桃由于果肉细腻、甜度高，深受广大消费者欢迎，对其开展进一步研究有助于该产品的深入开发。本文建立测定红心猕猴桃的总皂苷含量方法，为制定红心猕猴桃深加工产品质量标准提供依据。

1.仪器与试药

1.1 仪器

UV-1800 型紫外-可见分光光度计（上海菁华科技仪器）；AL204 型分析天平（瑞士梅特勒）；HH-S 数显恒温水浴锅（金坛市医疗器械厂）；DF-101S 集热式搅拌器（金坛市科析仪器有限公司）；RE5298A 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；R300 真空泵（SCIERNCETOOL）。

1.2 试药

红心猕猴桃干燥果粉（广西旭昇农业有限公司）；三七皂苷对照品（供含量测定，中国食品药品检定研究院，110745-201820）；水为蒸馏水；甲醇、乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸等试剂均为分析纯。

2.方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 5%香草醛-冰醋酸溶液 精密称取香草醛5.00g，放置100mL 容量瓶中，用冰醋酸溶解，并定容至刻度，摇匀即得。

2.1.2 高氯酸-5%香草醛-冰醋酸溶液 吸取高氯酸溶液4mL,加入1mL 5%香草醛-冰醋酸溶液中，混匀（此溶液现配即用）。

2.1.3 对照品溶液的配制 精密称取减压干燥至恒定质量的三七皂苷对照品20.5mg，加甲醇适量溶解并定容至10mL 量瓶中，得2.05mg·mL-1 的三七皂苷对照品溶液。

2.2 供试品制备

2.2.1 称取红心猕猴桃干燥果粉5.0g，加水300ml 90℃ 水浴回流 2h,过滤，滤液合并，减压浓缩至50ml 得提取物溶液。精密取提取物溶液 5ml 稀释至10ml,定容、摇匀，得样品液。

2.2.2 供试品制备 用5ml 注射器垂直固定，以3︰1 的比例装填D101 大孔树脂与中性氧化铝。先用25ml 70%乙醇溶液洗脱柱子，弃去洗脱液，再用25ml 蒸馏水洗脱柱子，弃去洗脱液。精确加入样品液 0.5ml,用25ml 蒸馏水洗脱柱子，弃去洗脱液，再用70%乙醇溶液洗脱柱子，收集洗脱液，于蒸发皿蒸干，得供试品。

2.3 标准曲线绘制

精密吸取三七皂苷对照品溶液 20,40,60,80,100,120μL，置于具塞试管中，烘干，加入配置好的高氯酸-5%香草醛-冰醋酸溶液1ml,摇匀，密塞，60℃水浴加热15min，取出后立即置于冰水中冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，以蒸馏水作空白，于560mn 处测定吸收值，绘制标准曲线，以三七皂苷质量（μg）为横坐标x，吸光度为纵坐标y，绘制标准曲线，得回归方程为y=0.0048x-0.0651，相关系数r=0.9994。

2.4 加样回收率实验

样品液稀释一倍后精密移取0.5 mL 平行移取9 份，分成3组（3 份/组），每份分别加入三七皂苷对照品溶液，每组加入量分别约为试样中总皂苷含量（以三七皂苷计）的50%，100%，150%。按“2.4 红心猕猴桃中皂苷的含量测定”步骤操作，平行测试6 次，计算加样回收率及RSD。结果见表1。低、中、高3 个浓度水平的加样回收试验，回收率分别96.98%，100.52%，94.84%，RSD 分别为3.8%，3.7%，4.3%，均满足定量分析的要求。

表1 回收率实验结果

2.5 稳定性实验

制备供试品一份，按“2.4 红心猕猴桃中皂苷的含量测定”步骤操作，在560nm 波长处，分别测定0,10,20,40,60min 吸光度,结果分别0.471,0.462,0.478,0.465,0.459,平均值0.467，RSD 为1.62%，表明 60min 内显色稳定。

2.6 红心猕猴桃中皂苷的含量测定

取供试品加高氯酸-5%香草醛-冰醋酸溶液 1ml,摇匀，密塞，60℃水浴加热15min，取出后立即置于冰水中冷却，加冰醋酸 5ml，摇匀，以蒸馏水作空白，于560mn 处测定吸收值，从回归方程中求出供试

品中皂苷的含量。结果见表2。

表2 皂苷含量测定

3.讨论

本文证实采用香草醛-高氯酸-冰醋酸显色法测定红心猕猴桃总皂苷含量[6]，准确性、稳定性好。并将该方法成功用红心猕猴桃水提取物中总皂苷的含量测定。本文研究结果可为深度开发红心猕猴桃产品的质控标准提供参考。