复方麻黄甘油剂的质量标准研究

赵桂法，刘冬梅，王光照，郑才友，谭永梅，孙光娟，尹继旺

(山东省临朐县中医院，潍坊 262600)

复方麻黄甘油剂是我院研制的制剂，主要组成成分有麻黄、苦参、牡丹皮、葛根、甘油。配制方法采取先以甘油为溶媒，适当加温增加其流动性，续用60 ℃纯化水为溶媒，连续两步渗漉法提取(控温渗漉装置已申请专利)，制成杏黄色至黄棕色的液体制剂。复方麻黄甘油剂气辛香，味苦、微甜；具有清热燥湿、抗炎消肿、止痛止痒功能；主要用于治疗接触性皮炎、荨麻疹、湿疹、带状疱疹及关节、肌肉肿痛等；外用局部湿敷，外涂穴位贴敷，隔药灸，刮痧等；是我院常用的外用液体制剂。本研究参考了有关文献[1-7]，通过对复方麻黄甘油剂的性状、麻黄碱和苦参碱的TLC法鉴别实验、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定实验等研究，最后确定本制剂质量标准，为其制剂生产和临床应用提供质量保证。

1 材料

1.1 仪器

LC-20A高效液相色谱仪[岛津企业管理(中国)有限公司]；AUW120电子天平[岛津企业管理(中国)有限公司]；色谱柱：QinertSustain C18 5 μm，250 mm×4.6 mm(上海屹利科学仪器有限公司)；KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TL-2型二孔恒温水浴锅(上海昀跃仪器设备有限公司)；TU-Ⅱ暗箱式紫外观察仪(上海科哲生化科技有限公司)。

1.2 试药

复方麻黄甘油剂(本院研制，批号：20190618、20190812、20191013，规格：250 ml/瓶)；对照品均为中国食品药品检定研究院提供：盐酸麻黄碱对照品(批号：171241-201809，含量：100.0%)，盐酸伪麻黄碱对照品(批号：171237-201510，含量：99.8%)，苦参碱(批号：110805-201709，含量：98.7%)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为化学纯。

2 方法与结果

2.1 鉴别

2.1.1麻黄

取本品25 ml加浓氨试液数滴、三氯甲烷15 ml，振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使之溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(见图1A)。

2.1.2苦参

取本品30 ml加三氯甲烷30 ml、浓氨试液1 ml，振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各 2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-浓氨试液(2∶4∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(见图1B)。

注：温度16 ℃，相对湿度40%；供试品1：20190618，供试品2：20190812，供试品3：20191013图1 麻黄(A)和苦参(B)TLC色谱图

2.2 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定

2.2.1色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶95)为流动相，检测波长为210 nm，流速1.0 ml/min，温度30 ℃，进样量20 μl。

2.2.2对照品溶液的制备

精密称取盐酸麻黄碱对照品6.00 mg、盐酸伪麻黄碱对照品2.91 mg置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为0.0600 mg/ml和0.0290 mg/ml的对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备

取本品，混匀，精密量取50 ml置分液漏斗中，加入三氯甲烷50 ml、浓氨试液1 ml，振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至100 ml量瓶中，加盐酸1滴，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4阴性对照样品溶液的制备

按照复方麻黄甘油剂的处方和制法制备缺麻黄的阴性对照样品，取约50 ml，按“2.2.3”项下的方法制成阴性对照样品溶液。

2.2.5取样量的考察

分别精密吸取对照品溶液及上述供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪进行测定，以外标法计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量之和。取样量分别为25、50、75 ml，测得含量分别为0.149、0.149、0.150 mg/ml。结果表明，三种取样量所测得的含量结果无显著性差异，为了保证取样量的均匀性，确定取样量为50 ml。

2.2.6线性关系的考察

分别精密吸取浓度为0.0600、0.0290 mg/ml的盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品溶液各5、10、15、20、25 μl，注入液相色谱仪，分别测定峰面积。以对照品的进样量为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，进行线性回归，得回归方程。结果见表1和表2。

表1 盐酸麻黄碱线性关系考察结果

表2 盐酸伪麻黄碱线性关系考察结果

回归方程y=2 331 508.3333x-52 019.7000，相关系数r=0.9986。结果表明，盐酸麻黄碱进样量在0.3000～1.5000 μg之间与峰面积呈良好的线性关系。见图2。

图2 盐酸麻黄碱标准曲线

回归方程y=2 259 646.2069x+17 720.3000，相关系数r=0.9957。结果表明，盐酸伪麻黄碱进样量在0.1450～0.7250 μg之间与峰面积呈良好的线性关系。见图3。

图3 盐酸伪麻黄碱标准曲线

2.2.7仪器精密度试验

分别精密吸取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，测其峰面积。盐酸麻黄碱峰面积分别为2 754 610、2 753 660、2 752 551、2 750 000、2 750 321、2 754 534 mAU，RSD为0.07%；盐酸伪麻黄碱峰面积分别为1 377 305、1 376 009、1 378 765、1 379 009、1 375 006、1 377 349 mAU，RSD为0.11%。结果显示，仪器精密度良好。

2.2.8稳定性试验

取本品照“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液，每隔4 h进样一次，测定盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的峰面积，共考察20 h(n=6)，计算RSD，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果分别见表3和表4。

表3 盐酸麻黄碱稳定性试验结果

表4 盐酸伪麻黄碱稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液在20 h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.2.9重复性试验

取本品50 ml，按照“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液6份。按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定，以外标法计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量之和。结果表明，含量测定方法的重复性良好。见表5。

2.2.10加样回收率试验

精密量取已测知含量的本品(盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量之和为0.1490 mg/ml)50 ml共6份，置分液漏斗中，精密加入盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品80 ml(浓度分别为0.0600、0.0290 mg/ml)及三氯甲烷100 ml、浓氨试液1 ml，按“2.2.3”项下方法制成6份供试品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪进行测定，以外标法计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量之和。结果表明，测定方法回收率良好。见表6和表7。

表5 重复性试验结果

表6 盐酸麻黄碱加样回收率试验结果

表7 盐酸伪麻黄碱加样回收率试验结果

2.2.11专属性实验

分别精密吸取“2.2.2”“2.2.3”“2.2.4”项下配制的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照样品溶液各20 μl，注入液相色谱仪进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应色谱峰，而阴性对照样品色谱中无相应的色谱峰。说明处方中其他药味对测定结果无干扰。见图4。

A：对照品;B：供试品;C：阴性对照样品;1:盐酸麻黄碱;2:盐酸伪麻黄碱图4 复方麻黄甘油剂中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的HPLC色谱图

2.2.12样品测定

按“2.2.1”项下的色谱条件，对所收集到的样品进行含量测定，结果见表8。

表8 样品含量测定结果 mg/ml

根据样品含量测定结果，并结合《中国药典》2015年版一部麻黄饮片中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量限度，暂定本品每毫升含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCl)、盐酸伪麻黄碱(C10H15NO·HCl)计，不得少于0.064 mg。

3 讨论

对麻黄、苦参进行TCL法鉴别时，麻黄中盐酸麻黄碱成分在未加入浓氨试液时萃取效果不佳，主斑点显色不明显，加入浓氨试液数滴之后，能有效地将盐酸麻黄碱分离至三氯甲烷层，萃取效果明显改善。本研究分别考察比较了在不同展开温湿度下的分离效果，结果供试品图谱在对照斑点相应位置上均能有效分离并显相同颜色的清晰斑点。

在选定含量测定指标成分时，考虑到盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱为君药麻黄的主要活性成分之一，故选定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为指标成分，建立了含量测定方法。本研究结果显示，盐酸麻黄碱进样量在0.3000～1.5000 μg之间、盐酸伪麻黄碱进样量在0.1450～0.7250 μg之间，峰面积呈良好线性关系，因此确定在此进样量之间进行含量测定；对仪器精密度进行试验，证明仪器精密度良好；对供试品稳定性进行考察，表明供试品溶液在20 h内稳定性良好，能够满足测定需要；对方法重复性进行考察，按实验方法制备6份供试品溶液，测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积之和，RSD为0.38%，方法重复性良好；加样回收率测定试验，分别加入盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱各制成6份供试品溶液，盐酸麻黄碱平均回收率为98.23%、RSD为0.29%，盐酸伪麻黄碱平均回收率为98.28%、RSD为0.40%，加样回收率良好，表明盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在样品分析过程中损失程度非常小，可忽略不计；专属性试验，供试品色谱在与对照品色谱保留时间相同的位置上有相应色谱峰，而阴性对照样品色谱中无相应的色谱峰，说明处方中其他药味对测定结果无干扰。

综上，采用TLC法对君药麻黄及臣药苦参进行定性鉴别，采用HPLC法测定制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，能有效提高复方麻黄甘油剂的质量可控性，为保障制剂质量提供科学依据。