HPLC 法测定梦萦口服液中马钱苷的含量

贺程蓓，曲 萍，赵思俊，施怀生

（1.山西中医药大学，山西 晋中030619； 2.山西省食品药品检验所，山西 太原030001）

梦萦口服液是针对青年女性睡眠失调、精力不足而研发的一款中药保健食品，由酸枣仁、山茱萸等五味中药组成，具有填精益髓、养血补肝、宁心安神之功效。课题组前期已对酸枣仁中的酸枣仁皂苷A 进行了质量标准研究。为了更加全面地控制该产品的质量，拟对配方中山茱萸的质量标准进行研究。

山茱萸（Cornus officinalis）是我国传统的名贵滋补中药材，以其干燥成熟果肉入药，是山茱萸科山茱萸属植物，主产于山西、陕西等省。山茱萸首载于《神农本草经》，具有补益肝肾、收涩固脱的功效，用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、内热消渴等［1］。马钱苷常被作为山茱萸的指标性成分，具有明显的降血糖［2-3］、镇静催眠［4］、抗氧化、抗炎、调节免疫、抗抑郁［5］等功能。

本文采用高效液相色谱法对配方中山茱萸的主要成分马钱苷建立了含量测定方法，并对其进行了方法学验证，为进一步完善质控标准提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

LC-20AT 高效液相色谱仪，SPD-M20A 紫外检测器（日本岛津公司），ME204/02 电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），TGCXW-10B 超声波提取机（北京市弘祥隆生物技术有限公司）。

1.2 药品与试剂

梦萦口服液的制法：按比例称取药材，煎煮2次，压榨药渣，合并煎液，浓缩药液至1.4 g/mL（相当于每毫升含生药量1 g）。马钱苷标准品（中国药品生物制品检定所，用于含量测定，批号：111640-200503），乙腈为色谱纯（DIKMA，批号：R141261），甲醇为分析纯（国药化学试剂有限公司，批号：R141471），磷酸为分析纯（国药化学试剂有限公司，批号：20160706），实验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

2.2 检测波长的选择

根据上述液相色谱条件，对样品溶液进行200～400 nm 波长范围的光谱扫描。截取不同波长下色谱图，在237 nm 下马钱苷分离度好，并且峰形好。结果如图1。

图1 不同波长下供试品溶液的色谱图

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液制备 精密称取马钱苷对照品适量置容量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.328 mg 马钱苷的对照品溶液，摇匀，即得。

2.3.2 供试品溶液制备 取梦萦口服液1 mL 置于10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，称重，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的质量，即得。

分别取对照品溶液和供试品溶液，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，进样10 μL，按上述试验条件和仪器进行测定。色谱图见图2。

图2 对照品溶液、供试品溶液的色谱图（237 nm）

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取马钱苷对照品溶液（浓度为0.328 mg/mL）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2 mL、3 mL 至10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，经微孔滤膜（0.45 μm）滤过后注入高效液相色谱仪。以马钱苷溶液浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=16 624X-2870.9，（r=0.999 8），表明马钱苷在16.4～98.1 μg/mL 之间呈良好的线性关系，结果见图3。

图3 马钱苷标准曲线

2.4.2 精密度试验 取2.3.2 项下的供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6 次，测定马钱苷峰面积，结果RSD为0.51%，表明仪器的精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取2.3.2 项下的供试品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 进样测定马钱苷的峰面积，RSD为0.78 %，提示供试品溶液在24 h 内稳定。

2.4.4 重复性试验 分别精密吸取2.3.2 项下的供试品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL 至10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，称重，超声提取30 min，放冷，称重，用甲醇补足减少的质量，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，滤过后分别进样，计算马钱苷的含量，RSD为1.08 %，结果表明该方法的重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验 采用加样回收方法，精密量取已知含量的样品溶液适量（浓度为0.459 mg/mL），分别加入一定量的马钱苷对照品，按前述方法制备供试品溶液，计算回收率，平均回收率为99.6 %，RSD为1.29 %。结果见表1。

3 讨 论

采用高效液相色谱法测定马钱苷含量的色谱系统多有报道，例如乙腈-水［6-8］、乙腈-磷酸水［9-10］等多个系统。本试验对甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%乙酸溶液等流动相系统进行考察，选用乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）系统可以达到很好的分离效果，并且马钱苷峰型较好，与相邻峰分离度好。

表1 回收率试验结果

文献报道以236 nm［11-12］、240 nm［8-9］、230 nm［7］作为马钱苷检测波长，在本试验中对供试品溶液进行200～400 nm 波长范围扫描，结果发现马钱苷在237 nm 处有最大吸收，这可能与不同制剂中药物配伍、提取方法、流动相不同等有关。

本文建立梦萦口服液中马钱苷含量测定的液相色谱方法，经过方法学考察，此法具有良好的精密度、准确度和重复性，简便易行，可以更好地控制梦萦口服液的质量，可为梦萦口服液质量控制和综合评价提供参考依据。