顶空–气相色谱法测定葡萄糖氯化钠注射液中12 种溶剂残留量

黄祝刚，李亚囡，孙滨滨，贾佳，唐彬，郑琪欣

（山东齐都药业有限公司，山东淄博 255400）

近年来，注射液产品中残留溶剂的安全性受到更加广泛的关注。包装印有的精美商标中往往使用大量印刷油墨、有机溶剂和胶黏剂等，这些包装辅材中残留溶剂的单一成分浓度低，但种类多，当若干种残留溶剂共同作用时，其联合毒性是不可忽视的，残留溶剂含量严重时会导致神经机能失调、痴呆及过敏性肺炎。常见的有乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯、甲苯、乙苯、二甲苯（含对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯）等十几种溶剂［1］。在其干燥过程中，大部分挥发掉的溶剂会污染大气，而少量残留在印刷品中的溶剂则可通过化学迁移对包装内容物造成污染，存在较大的质量安全隐患。因此建立一种能快速测定注射液中有机溶剂残留的分析方法具有重要的意义。

目前挥发性物质的检测主要采用气相色谱法（GC）［2–4］、气相色谱–质谱法（GC-MS）［5–7］。现有文献虽有对溶剂残留进行分析的报道，但多针对食品包装材料及原料药较多［8–15］，尚未见对葡萄糖氯化钠注射液中溶剂残留相关测定的报道。笔者建立了一种能快速测定葡萄糖氯化钠注射液中12 种溶剂残留的分析方法，为注射液产品中十几种残留溶剂同时测定提供了一种新的分析手段，可用于注射液产品的质量控制。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：Agilent 7890A 型，配FID 检测器，美国安捷伦科技有限公司；

顶空进样器：Agilent 7697A 型，美国安捷伦科技有限公司；

顶空瓶：20 mL，美国安捷伦科技有限公司；

电子天平：SQP 型，北京赛多利斯科学仪器有限公司；

立式压力蒸汽灭菌器：LMQ.C–80E 型，新华医疗SHINVA；

葡萄糖氯化钠注射液：100 mL，含5 g 葡萄糖与0.9 g 氯化钠，三层共挤输液用袋包装（彩色印刷），批 号 为8C18102801，8C18102802，8C18102803，山东齐都药业有限公司；

氮气：99.999%，淄博桓台瑞丰化工有限公司；

乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）：分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

丁酮、甲苯：分析纯，永华化学科技（江苏）有限公司；

乙酸丁酯、乙酸正丙酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯：分析纯，阿拉丁科技（中国）有限公司

邻二甲苯：分析纯，美国Sigma–Aldrich 公司。

1.2 仪器工作条件

色 谱 柱：HP–INNOWAX 毛 细 管 色 谱 柱（60 m×320 μm，0.5 μm，美国安捷伦科技有限公司）；升温程序：起始温度50℃，以5℃／min 的速率升温至100℃，维持4 min，然后以30℃／min 的速率升温至200℃，维持5 min；载气：氮气，流量为2.0 mL／min；进样口温度：200℃；分流比：10∶1；检测器温度：250℃；顶空瓶平衡温度：90℃；平衡时间：30 min。

1.3 溶液配制

混合对照品贮备液：分别精密量取乙醇30.6 μL、异丙醇31.8 μL、丙酮31.9 μL、丁酮31 μL、乙酸乙酯27.7 μL、乙酸丁酯28.3 μL、乙酸正丙酯28.2 μL、甲苯5.14 μL、乙苯12.5 μL、邻二甲苯12.6 μL、间二甲苯12.3 μL、对二甲苯12.5 μL，置于同一10 mL 量瓶中，用DMF 稀释定容至标线，摇匀，配制成乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯、甲苯、乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯的质量浓度分别为2 497，2 498，2 503，2 497，2 499，2 498，2 504，4 450，1 088，1 086，1 085，1 082 μg／mL 的混合对照品贮备液。

混合对照品溶液：精密量取混合对照品贮备液20 μL，置于已精密加入2 mL 纯化水的顶空瓶中，密封，配制成乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯、甲苯、乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯的浓度分别为24.97，24.98，25.03，24.97，24.99，24.98，25.04，4.45，10.88，10.86，10.85，10.82 μg／mL 的混合对照品溶液。

供试品溶液：精密量取葡萄糖氯化钠注射液2 mL 置20 mL 顶空瓶，精密加入DMF 20 μL，密封。

空白溶剂：取DMF 20 μL，置于预先加入2 mL纯化水的顶空瓶中，密封。

1.4 方法学验证

残留溶剂测定法参考中国药典2015 年版四部通则0861 残留溶剂测定法［16］。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

在现有的试验条件下，选择不同极性的毛细管柱DB–624，DB–WAX，HP–INNOWAX 进行比较，试验结果表明HP–INNOWAX 柱的分离效果最好，灵敏度高，且无干扰，故选择HP–INNOWAX 毛细管柱为工作色谱柱。

2.2 顶空平衡时间、平衡温度、柱流速的确定

考察了85，90，95℃平衡30 min 对各待测成分测定的影响，发现温度升高促进灵敏度提高，综合考虑各溶剂灵敏度增加程度，仪器性能的参数，最终选择90℃作为平衡温度。

分别于90℃平衡25，30，35 min 后进样分析，结果表明，30 min 时各主成分的色谱峰面积最大，故选择平衡时间为30 min。

考察了柱流量分别为1.0，1.8，2.0，2.2 mL／min对各待测成分测定结果的影响。结果表明，柱流量为2.0 mL／min 时，分离效果最好，故选择柱流量为2.0 mL／min。

2.3 专属性试验

在1.2 色谱条件下，分别取空白溶剂、混合对照品溶液依次顶空进样分析，色谱图见图1、图2。丙酮、乙酸乙酯、丁酮、异丙醇、乙醇、乙酸正丙酯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯各峰之间的分离度分别为10.7，3.6，3.3，2.1，9.9，22.9，6.7，20.1，2.6，2.3，15.2，符合检测要求。空白溶剂在相应的保留时间处均无色谱峰出现，对检测无干扰。由此可见，该方法专属性符合要求。

图1 空白溶剂

图2 混合对照品溶液色谱图

2.4 检出限与定量限

通过逐级降低浓度进样测定，检出限按信噪比S／N=3 计算，定量限按信噪比S／N=10 计算。丙酮、乙酸乙酯、丁酮、异丙醇、乙醇、乙酸正丙酯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯检出限分别为0.055，0.019，0.023，0.070，0.155，0.013，0.003，0.009，0.004，0.004，0.004，0.005 μg／mL；定量限分别为0.170，0.058，0.069，0.210，0.464，0.038，0.009，0.029，0.013，0.013，0.013，0.016 μg／mL。

2.5 线性回归方程与线性范围

选择定量限浓度作为线性下限浓度，选择1.5倍混合对照品溶液浓度作为上限浓度，另外再选取两个浓度间的3 个不同浓度的溶液进行试验，色谱峰面积与12 种溶剂的质量浓度成良好的线性关系，结果见表1。

表1 12 种残留溶剂的线性范围、线性方程与相关系数

2.6 精密度试验

依法制备对照品溶液，并同法制备供试品溶液。取对照品溶液连续进样2 次、供试品溶液连续进样6 次，记录色谱图，按外标法计算供试品中各物质的含量。丙酮、乙酸乙酯、丁酮、异丙醇、乙醇、乙酸正丙酯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯含量测定结果的相对标准偏差分别为2.4%，2.9%，2.9%，2.4%，2.2%，3.1%，3.6%，2.9%，5.1%，5.6%，5.1%，4.5%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.7 溶液稳定性试验

按实验方法制备对照品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h进样测定，记录色谱峰面积。结果表明，丙酮、乙酸乙酯、丁酮、异丙醇、乙醇、乙酸正丙酯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯色谱峰面积的相对标准偏差分别为6.02%，7.18%，6.67%，5.44%，4.90%，7.46%，6.09%，7.58%，6.01%，5.86%，5.62%，5.74%，表明溶液在12 h 内基本稳定。

2.8 加标回收试验

按1.4 平行制备9 份供试品溶液，将供试品溶液分成3 组，分别加入限量浓度的80%，100%，120%的标准物质，进行加标回收试验，结果列于表2。由表2 可知，12 种残留溶剂的加标回收率为90.6%～109.0%，表明该方法具有较高的准确度。

表2 加标回收试验结果

3 结语

建立了彩色印刷包装的葡萄糖氯化钠注射液中12 种残留溶剂（乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯、甲苯、乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯）的测定方法。该方法集样品前处理，进样于一体，操作简便、稳定、重复性好，测定结果准确可靠。该方法适用于注射液中残留溶剂检测，为注射液中十几种残留溶剂同时测定提供了一种新的分析手段。