正交试验法研究果糖二磷酸钠注射液的制备工艺

张宽才，李晨，陈程

（1.江苏九旭药业有限公司，江苏徐州 221200；2.兆科药业（广州）有限公司，广东广州 511462）

果糖二磷酸钠注射液主要成分为1,6-二磷酸果糖三钠盐，临床上主要用于改善冠心病的心绞痛、急性心肌梗死、心率失常以及心力衰竭的心肌缺血。在制剂的制备过程中发现，由于制备工艺的不同，成品含量存在一定的差异，极大地影响了临床安全用药。因此采用正交试验法对果糖二磷酸钠注射液制备工艺的影响因素进行研究，以解决其含量不稳定的问题。

1 仪器与试药

1.1 仪器

PHS型酸度计，上海精密科学仪器有限公司；UV-1800型紫外可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；YB-2澄明度检测仪，天津市光学仪器有限公司；微孔滤芯，杭州科百特过滤器有限公司。

1.2 试药

果糖二磷酸钠，自制，批号为181215；果糖二磷酸钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号100539-201703）、焦亚硫酸钠、盐酸，药用，湖南尔康制药股份有限公司；氯化钠，注射用，湖南尔康制药股份有限公司；活性炭，针用，上海活性炭有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 正交试验设计[1～3]

果糖二磷酸钠注射液以果糖二磷酸钠为原料，如表1所示，考察其制备工艺中，中间品pH值、活性炭量、抗氧剂量3个因素，每个因素取3个水平，选用L9（34）表设计正交试验方案。

表1 果糖二磷酸钠注射液制备工艺的因素-水平表

1.3.2 制备工艺过程

取注射用水适量，依次加入处方量的果糖二磷酸钠、焦亚硫酸钠、氯化钠，搅拌30 min使之完全溶解，然后加入活性炭，定容、用HCl调节pH后，加热至煮沸并保温20 min，然后冷却，依次通过0.45 μm、0.22 μm的滤器过滤，然后扎盖、灭菌。

3.3 果糖二磷酸钠含量测定

对照品溶液的制备，精密称取果糖二磷酸钠对照品适量（约相当于无水二磷酸钠20 mg）,置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备，精密量取本品适量，加水稀释制成每1 ml中含C6H11Na3O12P2约0.2 mg的溶液，摇匀，即得。

测定法，精密量取对照品溶液与供试品溶液各1 ml,分别置于10ml量瓶中，各加8 mol/L盐酸溶液5 ml与2.5%二苯胺乙醇溶液2 ml摇匀，置于96±1 ℃水浴中加热30 min，并时时振摇，取出，冷却至室温，以70%乙醇稀释至刻度，照紫外可见分光光度法于638 nm波长处测定吸收度，按外标法计算果糖二磷酸钠含量。

3.4 游离磷酸盐含量测定

游离磷酸盐线性溶液的制备，分别取标准磷酸盐溶液 5ml、10 ml、15 ml、20 ml、25 ml、30 ml置50 ml量瓶中，各精密加入钼酸铵硫酸试液5.0 ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液2 ml,加水至刻度，摇匀，在20 ℃左右放置30～50 min，照紫外可见分光光度法于740 nm处测定吸光度，并以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，既得标准曲线，如图1所示

图1 游离磷酸盐的标准曲线

经线性回归，得游离磷酸盐的回归方程为A=0.565X-0.011，A为吸光度，X为游离磷酸盐浓度，相关系数r2=0.998,方法的线性范围为0.25 mg/L～1.50 mg/L。,供试品溶液的制备，精密量取本品0.2 ml（约相当于果糖二磷酸钠20 mg）,置50 ml量瓶中，加水15 ml,混合均匀，测定吸光度，另依据线性回归方程计算游离磷酸盐浓度。

3.5 结果与分析[3～5]

如表2正交试验结果可以判断出，3个因素主次顺序为A＞C＞B，最优组合为A2B1C3。

表2 正交试验筛选方案及结果

根据本试验研究目的，确定以果糖二磷酸钠含量作为考察指标值。如表3所示，对试验结果进行方差分析，结果显示因素B为主要影响因素。

表3 方差分析表

研究发现在制备果糖二磷酸钠注射液过程中，活性炭对果糖二磷酸钠有一定的吸附作用，其加入量影响成品的含量，因此在制备产品时，可以适当增加果糖二磷酸钠的投料量；果糖二磷酸钠在酸性条件下较为稳定，在配制药液时，注意使中间品pH值控制在酸性条件下；抗氧剂焦亚硫酸钠添加对果糖二磷酸钠的含量起到一定的稳定作用，但是由于其对皮肤、粘膜有明显的刺激作用，可引起结膜、支气管炎症状，有过敏体质或哮喘的人对此非常敏感，因此其加入量需要严格控制，鉴于3个水平无显著性差异，因此选择抗氧剂量为0.2%。

3 结论

控制果糖二磷酸钠注射液制备工艺关键点，可以有效地解决制剂的含量稳定性问题。当中间品pH值保持在4.0，抗氧剂加入量为0.2%，活性炭加入量为0.4%时，能有效地维持制剂含量稳定性。