CITIC血液成分细菌检测室间质评结果回顾性分析

李东，管改弟，刘文

(太原市红十字血液中心，山西 太原 030000)

《血站技术操作规程(2015版)》质量控制章节中明确规定，各采供血机构应每月对1%或至少4袋的全血及血液成分进行无菌实验[1]。当前各采供血机构采集制备环节已形成较为严谨、科学且安全的操作模式，献血人群大多数为健康人群，并且每月进行无菌检测的血液成分相对较少，通常无菌实验检测结果均多年持续阴性，血液产品的细菌检出率很低[2]。故对细菌检测设备的灵敏度有待检验。为此，我中心参加了中国国际输血感染预防与控制项目组(CITIC)开展的血液成分细菌检测能力验证项目。本文就2017年我中心质控实验室参加的3次血液成分细菌检测项目的检测结果进行回顾性分析，旨在验证中心质控实验室细菌检测设备灵敏度，为工作人员无菌操作规范性的考察提供数据支持和理论依据，进而提高中心质控实验室对血液标本中细菌的检出能力，提升相关工作人员的业务技能与水平。报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源与接收

2017年3月、6月、10月分别接收由CITIC项目组统一发放的血液成分细菌检测室间质评样品(BTBS4310)各10份，共计30份。所有样品均为商品化的标准菌株，冻干样品，并配有用于复溶所需无菌检测用水及无菌生理盐水。接收标本时，查看确认标本包装完整，无破损；核对标本种类、数量、标签无误，颜色状态正常；查看无菌检测用水及生理盐水状态、数量正确无误。标本的保存严格按照说明书要求执行。

1.2 仪器与试剂

BacT/ALERT 3D全自动细菌培养检测系统(生物梅里埃公司)，BacT/ALERT 3D配套需氧培养瓶(BPA)，HR40-ⅡA2生物安全柜(山东青岛海尔公司)，10 mL无菌注射器。

1.3 实验室检测

在生物安全柜内，用无菌注射器吸取2 mL无菌检测用水充分溶解冻干样品，随后加入2 mL无菌生理盐水稀释并混匀样品。用无菌注射器尽可能完全吸取配制好的菌液，并将其接种于需氧培养瓶中。待全部接种完毕后，将培养瓶装载入BacT/ALERT 3D全自动细菌培养检测系统中，37 ℃条件下培养168 h，观察记录出现反应性信号的时间并通过Oneworld Accuracy System在线信息系统上报结果。

1.4 回报结果统计分析

根据菌种种类、浓度的不同，使用Excel2007对三次室间质评数据进行整理汇总，并与CITIC项目组提供的相同检测设备同一分析组的均数、标准差等进行比较分析。

2 结 果

根据菌种种类、菌液浓度的不同，2017年我室参与CITIC项目组血液成分细菌检测室间质评(BTBS4310)标本共有18种样品。我室上报阴性结果中，除常规无菌样品外，另有2例参考结果为阳性的样品我室检测结果为阴性，分别为10 cfu/mL的黑曲霉、30 cfu/mL的大肠埃希菌，两份样品均为CITIC项目组特别设置的教育型样品(样品浓度低不易检出)。详见表1。

表1 2017年血液成分细菌检测室间质评结果

由表1可知，与参考检测时间均值相比，我室上报有反应性信号的15种样品中的1种(100 cfu/mL的金黄色葡萄球菌)与参考检测时间均值相差在1%以内，7种样品出现反应性信号较早，其余7种出现反应性时间晚于参考检测时间均值。与在参考检测时间范围相比，15种有反应性信号的样品中，我室检测的14种样品均在参考范围之内，30 cfu/mL白色念珠菌检出时间为35.52 h，超出参考检测时间(30.46±2.35) h的范围。15种样品反应性检出时间分布情况见图1。

3 讨 论

近年来不断有研究报道单采血小板制品有细菌检出[3-5]，提示血液成分的细菌污染仍然是采供血机构在质量管理与控制方面不容忽视的重要问题。CITIC开展的血液成分细菌检测能力验证项目与国家卫生计生委临床检验中心组织的临床微生物学室间质评项目有所差别。该项目考虑采供血机构血液制品无菌试验的特点，侧重于测评细菌检出的符合率[6]。旨在满足对全国各采供血机构质控实验室血液制品无菌试验抽检的外部评价需求，确保血液成分细菌检测系统的稳定性和可靠性[7]。2017年CITIC项目组选取用于血液成分细菌检测样品的菌种分别为白色念珠菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌6种菌种。有研究表明单采血小板中可以检测出大肠埃希菌[8-9]，而白色念珠菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌5种菌种则被认为是验证无菌检测所用培养基灵敏度的标准菌种[10]，因此选取这些菌种用于全自动微生物检测系统有效性的监测具有代表性。

通过对2017年CITIC血液成分细菌检测室间质评结果的分析发现，我室对血液成分细菌检测的能力尚可，但没有完全具备检出菌液浓度较低的教育型样品的能力(三种教育型样品中仅检测出30 cfu/mL的铜绿假单胞菌)，该情况与全国绝大多数采供血机构相似，提示我们应进一步分析原因持续改进，并积极向先进采供血机构学习。通过参与该项室间质评，也提示我室在日常无菌检测实验中，必须在从接收 标本到结果录入的全过程中严格规范操作，以避免因标本质量、操作不规范等问题造成样品的假阳性和假阴性结果。具体而言，接收标本时要评估标本的包装、数量、颜色状态等是否正常。收到样本后应尽量在当天接种，如不能当天接种应将标本存放于符合相应温度要求的存放空间；在接种过程中，要严格执行无菌操作，避免因污染造成假阳性。在使用注射器吸取标本时应尽可能完全吸取菌液(操作过程中发现因样品瓶中压力问题，较难全部吸出)，以免影响检测结果。接种完成后装载培养瓶应尽可能在0.5 h内完成，如果不能立刻放入，应将培养瓶暂放于室温环境，因为温度过高会使低产细菌的生长错过对数期，而无法达到报告阳性的阈值，从而导致假阴性结果。而温度过低则会不利于对低温敏感细菌的检出[11]。此外结果录入也应引起注意，我室曾出现因工作人员疏忽导致结果录入错误的情况，随后我室采取双人核对的方法，加强结果核对工作，以避免此类错误的再次发生。

图1 反应性信号检出时间分布

综上所述，通过参加CITIC血液成分细菌检测能力验证项目对我室细菌检测能力进行验证，不仅可对工作人员业务水平的提高起到积极推动作用，也可促进我们对日常细菌培养工作进行不断的反思与完善。