三七美白化妆品的研究及开发

周家明 ，欧景春 ，赵 爱 ，马 妮 ，冯光泉

（1.文山学院三七研究院，文山663099；2.文山学院三七学院，文山663099）

三七是驰名中外的名贵药材，其主要成分有三七皂苷、三七素、多糖、黄酮、蛋白质等，以主根、根茎（三七剪口）入药，生用可止血化瘀、消肿止痛，活血散瘀、抗衰老、降脂功效[1]。将三七作为此次化妆品配方中的主要药材主要利用三七活血化瘀、抗衰老的功效。苦参为豆科植物槐属苦参的干燥根，在本草纲目、神农本草经、本草汇言等著作中都有描述。苦参的有效成分主要是苦参碱，苦参具有清热燥湿、杀虫、利尿、消炎等功效，可用于热痢、便血、黄疸、尿闭、赤白带下，同时根据其杀虫止痒的功效可用于阴肿瘙痒，各种皮肤病，根据其消炎的作用，将其放入化妆品中研究。白术为菊科苍术属的多年生草本植物，在神农本草中有描述，苦、温、无毒，具有补气健脾，燥湿利水、止汗、安胎、抗氧化、除热、消食等功效；根据其功效，白术可用于健脾益气、燥湿利水，脾虚食少、泄泻便溏、胎动不安等，用于化妆品的研究主要是其具有抗氧化的作用。白及为兰科植物白及干燥的块茎为一种多年生草本植物，白及的有效部位主要是假鳞茎，有效成分主要是挥发油、多糖、具有丰富黏液质的白芨胶等，白芨具有收敛止血，消肿生肌等功效。白蔹为葡萄科植物白蔹的干燥块茎，主要是春秋二季采收，白蔹中的有效成分有酚酸类、黄酮类、蒽醌类[2]，同时还含有粘质和淀粉、酒石酸、延胡索酸等有效成分，白蔹具有清热解毒，散结止痛、敛疮生肌的功效。

1 实验材料与方法

1.1 材料及试剂

三七（文山三七市场）、白术（文山百姓超市）、白芨（文山百姓超市）、白蔹（云南穗民生物科技开发有限公司）、苦参（昆明道地中药饮片厂）；磷酸二氢钾（天津市风船化学试剂科技有限公司）、氢氧化钠（天津市风船化学试剂科技有限公司）、L-酪氨酸（上海新兴化工试剂研究所）。

1.2 仪器与设备

759s型紫外/可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）DLSB低温冷却液循环泵（巩义市子华仪器有限责任公司）FA2004电子天平 （上海舜宇恒平科学仪器有限公司）R-200旋转蒸发仪、SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵（巩义市子华有限责任公司）HH-600数显恒温水箱（金坛市大地自动化仪器厂）DZF-6020真空干燥箱（上海博讯实业有限公司）XL5A型湘立离心机 （湖南湘立科学仪器有限公司）。

1.3 中药样品浸膏的制备

1.3.1 药材前处理与溶液的配制

分别取150g三七、白术、白及、白蔹、苦参打粉，过20目筛，备用。pH6.8的磷酸缓冲液：精密称取磷酸二氢钾25g，加入125ml的蒸馏水即得0.2ml/l的磷酸二氢钾溶液，再称取11.6g的NaOH加入58ml的蒸馏水即得0.2mol/l的NaOH溶液，将两种混合用500ml的蒸馏水稀释，摇匀，即得。

1.3.2 三七的提取物的制备

将从三七市场购买来的60头干燥三七粉碎，过10目筛，取150g药粉，精密称定，置于2000ml蒸馏烧瓶中，以70%的乙醇为有机溶剂提取液[3]，回流提取3次，每次 2h，温度为 85℃，第一次按照料液比 1∶10，第二次、第三次用料液比1∶8，合并乙醇提取液，合并的乙醇提取液按20倍的比例浓缩，将药液放于旋转蒸发仪中70℃的条件下浓缩（2800ml的浓缩成140ml的），回收溶剂。将浓缩液分别置于三个铁瓷盘中，于66℃的真空干燥箱中干燥，每小时对真空干燥箱进行排气一次，同时不断地观察干燥的程度，随后即得浸膏。

1.3.3 白芨的提取物的制备

干燥白芨于粉碎机中粉碎并过10目筛，取150g药粉，精确称定，置于2000ml蒸馏烧瓶中，浸泡30min后，用蒸馏水回流提取90min[4]，共提取3次，第一次按照料液比为1∶10加入1500ml的蒸馏水，第二次、第三次按照料液比1∶8分别加入蒸馏水，然后把蒸馏烧瓶置于水浴锅中回流加热提取，加热温度为100℃，提取液合并抽滤，滤液在温度为85℃的条件下按照20倍的比例浓缩。把浓缩液分别放入铁瓷盘中置于真空干燥箱中干燥，温度为65℃。每小时对真空干燥箱进行排气一次，同时不断地观察干燥的程度，即得白芨浸膏。

1.3.4 白蔹的提取物的制备

干燥白蔹于粉碎机中粉碎并过10目筛，取150g药粉，精确称定，置于2000ml蒸馏烧瓶中，浸泡30min后，用蒸馏水回流提取90min，共提取3次，第一次按照料液比为1∶10加入1500ml的蒸馏水，第二次、第三次按照料液比1∶8分别加入蒸馏水，然后把蒸馏烧瓶置于水浴锅中回流加热提取，加热温度为100℃，提取液合并抽滤，滤液在温度为85℃的条件下按照20倍的比例浓缩。把浓缩液分别放入铁瓷盘中置于真空干燥箱中干燥，温度为65℃。每小时对真空干燥箱进行排气一次，同时不断地观察干燥的程度，即得白蔹浸膏。

1.3.5 白术的提取物的制备

干燥白术于粉碎机中粉碎过10目筛，取150g药粉，精确称定，药材粉末放到2000ml蒸馏烧瓶中，回流提取3次，每次2h，温度为55℃，第一次按照料液比为1∶10加入 1500ml的 80%的乙醇，用 0.2mol/l的 NaOH将溶液的PH调为7[5]，同样的条件下，第二次、第三次的料液比调为1∶8，然后把蒸馏烧瓶置于水浴锅中回流加热，把提取液合并抽滤，滤液以20倍的比例，在50℃的条件下浓缩，最后将浓缩液分别置于三个铁瓷盘中，放于真空干燥箱中45℃的条件下干燥，即得浸膏。

1.3.6 苦参的提取物的制备

干燥苦参于粉碎机中粉碎过10目筛，取150g药粉，精确称定。把过筛的药材粉末放到2000ml蒸馏烧瓶中，以60%乙醇回流提取3次，每次2h，第一次料液比为 1：10，第二次料液比为 1：8，温度为 85℃[6]。 将提取液用真空抽滤瓶抽滤，抽滤液以75℃的温度浓缩，然后在将浓缩液抽滤（因为苦参属于草本，滤渣较多），最后将浓缩液平分于铁瓷盘中，在真空干燥箱中70℃的条件下干燥，苦参浸膏的制备即完成。

1.4 酪氨酸酶活性的测定

0.15 %ml/l的L-酪氨酸溶液的配置：取0.0015gL-酪氨酸，精密称定，缓慢、多次、少量的加入100ml的蒸馏水，摇匀即可。

1.4.1 酪氨酸酶的制备

将马铃薯洗净，去皮，切成边长约1cm的块状，于-20℃冷冻过夜，称重按 1∶1（w：v）的比例加入 4℃预冷的磷酸缓冲液（20g的土豆加入20ml的缓冲液），快速匀浆，用3成纱布过滤，滤液于3500r/min离心15min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，用移液管移取10ml上清液装在25ml棕色容量瓶中，用（Ph6.8）的磷酸缓冲液定容，冰水浴备用，2h内用完。

1.4.2 吸光度的测定方法

测定含有酪氨酸试液样的吸光度。在酪氨酸酶反应生成黑色素的过程中，酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化为多巴以及多巴转化为多巴醌这两个反应中，多巴醌是一有色物质，可以用分光光度计（475nm）测定[7]。先将膏状中药提取物用蒸馏水稀释至浓度为1mg/ml的溶液，在试管中把稀释的药品按照一定的比例配方（三七∶白术∶白芨∶白蔹∶苦参=3∶2∶2∶2∶1）混合，摇匀，备用。

按表1准确吸取中药样品，pH6.8磷酸盐缓冲液和0.15%L-酪氨酸溶液，充分混匀，在室温条件下静置10min后，加入0.6ml土豆上清液，摇匀，再在室温下静置10min，PBS为参比，迅速转移至比色皿中，在475nm处测吸光度，做3个平行样。

表1 -1待测液的组成

利用各组吸光度，通过计算得出酪氨酸酶抑制率，其计算公式如下（1-1）：

（1-1）

A组：未加中药样品的加酶混合液；B组：未加中药样品亦未加酶的混合液；C组：加中药样品和酶的混合液；D组：加中药样品未加酶的混合液。

1.5 数据分析方法

采用紫外分光光度法测定中药样品对酪氨酸酶的抑制率，包括最大值、最小值、平均值等，通过采用求平均值对实验所得数据的进行比较、分析。

2 结果与分析

2.1 数据处理

表2 -1药品所测的吸光度数值

表2 -2样品所测的吸光度

表2 -3样品所测的吸光度

表2 -4中药提取物对酪氨酸酶活性抑制率测定（%）

2.2 实验结果分析

采用紫外分光光度计测定中药样品对酪氨酸酶活性的抑制率，每个样品测定三次，每次做三个平行试样，根据表5所得实验数据，表明三七、白术、白芨、白蔹、苦参（3∶2∶2∶2∶1）比例配方的中药样品的混合物对酪氨酸酶具有一定的抑制率，平均抑制率的数据为34.6%。该数据为化妆品的研究及开发提供了科学的数据支持，对酪氨酸酶具有一定的抑制率，说明此次实验的研究配方的初步结果表明了文山道地药材三七，七白膏中选取的三白，加上具有消炎作用的苦参具备一定的美白祛斑功效。

3 结论

3.1 对于现在人们存在的皮肤问题越来越严重，同时人们的生活水平的层次也在不断的提高，化妆品行业暴露的问题也越来越严重，特别是美白祛斑的化学物质的副作用的程度也在扩大的过程中，加上我国在运用中药治疗和护理各种皮肤病上已有几千年的历史[8]，这些为科学研究者寻找天然的美白活性物质提供了一定的基础。

3.2 本文在药材的提取方面有些损失，特别是白芨、白蔹的提取液属于黏液质，在过滤的时候，白芨、白蔹损失特别严重，同时苦参的过滤由于粉末较多，也导致损失严重。

3.3 另一方面使用的酪氨酸酶不是酪氨酸酶制剂，而是用马铃薯提取制备的酪氨酸酶，这方面对于检测的结果略有些影响，但是实验结果的测定条件都是一定的，所以得到的实验数据也是相对的，在没有酪氨酸酶制剂的情况下，本次试验也可以作为化妆品在研究开发方面初步选择药材的方法。