益肾降浊胶囊对腺嘌呤致大鼠慢性肾功能衰竭的影响研究

高贤娴 ，张 宸 ，杨 楠 ，王丹妮 ，洪 铁 ，

（1.吉林大学药学院药理教研室，长春130021；2.吉林省中医药科学院，长春130012）

慢性肾功能衰竭（Chronic renal failure，CRF）是指由各种肾脏疾病引起的缓慢进行性肾功能损害，已在全球范围内成为继心血管、肿瘤、糖尿病之后的常见疾病，严重的威胁着人类的健康[1]。益肾降浊胶囊是吉林省中医科学院临床专家以传统中医药理论为指导，在长期临床实践中总结出的方剂。全方由熟地、杜仲、补骨脂、白术、女贞子、淫羊藿、黄芪等十二味中药组成。通过长期的临床观察，发现益肾降浊胶囊能够明显改善患者的慢性肾衰患者的肾功能肌酐、尿素氮等指标，能够改善患者的水肿、蛋白尿、胃肠道的一些不适症状等。本研究探讨了益肾降浊胶囊对腺嘌呤诱导的大鼠慢性肾衰的影响，为益肾降浊胶囊治疗慢性肾衰提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

成年SD大鼠，雄性，体质量180～200g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，生产许可证号：SCXK（辽）2015-0001。大鼠饲养于SPF级清洁环境中，标准饲料喂养，自由进食，适应5天。

1.2 实验药物和试剂

益肾降浊胶囊由吉林省中医药科学院提供；肾衰宁胶囊由云南理想药业有限公司生产；腺嘌呤由上海源叶生物科技公司生产；BCA蛋白浓度测定试剂盒由碧云天生物技术研究所提供；Scr测定试剂盒、BUN测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 仪器

代谢笼，上海泽雅科教仪器有限公司；BS-124S电子天平，北京塞多利斯系统有限公司；微量移液器，赛默飞世尔仪器有限公司；代谢笼，上海泽雅科教仪器有限公司；超纯水系统（AFZ-1002-U），艾科普仪器有限公司；TGL-16B离心机，上海安亭科学仪器厂；全波长酶标仪，Biotek公司；倒置显微镜，德国LEICA公司。

2 实验方法

2.1 分组及给药

SD鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物肾衰宁组、益肾降浊胶囊大、中、小剂量组。 各组每天上午（9∶30～10∶30）灌胃一次，给药组灌胃给予相应剂量的受试物及阳性药，空白对照组和CRF模型组给予相应体积蒸馏水，连续给药4周。

2.2 动物模型的建立

根据参照文献[2、3]的操作方法构建CRF大鼠模型：25%腺嘌呤溶液[250mg/(kg·d)]连续灌胃21天，制备CRF大鼠模型，正常对照组正常饮食与饮水。

2.3 检测指标

实验结束的前一天，将大鼠置于代谢笼中，禁食不禁水，收集24h尿液并记录尿量，采集的尿液用BCA试剂盒测定尿蛋白浓度，计算24h尿蛋白量。实验结束时称量大鼠体质量并记录，腹主动脉取血后，摘取大鼠右侧肾脏，迅速称重并记录，计算大鼠肾脏指数（肾脏指数=右侧肾脏质量/体质量）。对血液样品进行处理，检测血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）等生化指标，同时测量体重、肾重，并计算肾指数。取称重后的肾脏置于4%的多聚甲醛中固定后，进行石蜡包埋、切片、展片和脱蜡处理，然后对肾脏对肾组织进行H&E染色，并于光学显微镜下观察肾组织形态结构变化。

2.4 统计方法

收集数据，采用SPSS17.0软件进行分析，根据检验数据资料的正态性和方差齐性，定量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05时差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对大鼠体重、肾重和肾指数的影响

与空白对照组比较，CRF模型组小鼠体重明显减轻，肾重和肾指数显著增加（P＜0.05）。与模型组比较，益肾降浊胶囊高、中、低剂量组的体重显著增加，肾重显著减少，肾指数显著降低（P＜0.05），结果见表1。

表1 各组大鼠的体质量、肾重和肾指数的比较

3.2 对大鼠24h尿量、24h尿蛋白含量的影响

与空白对照组比较，模型组大鼠的24h尿量及24h尿蛋白含量显著增加（P＜0.05）；与模型组比较，益肾降浊胶囊高、中、低剂量组24h尿量均较模型组均显著降低（P＜0.05），益肾降浊胶囊高、中剂量组的24h尿蛋白含量显著降低（P＜0.05）结果见图1。

图1 益肾降浊胶囊对CRF大鼠结肠组织24h尿量、24h尿蛋白含量的影响。（与空白对照组比较：P##＜0.01；与 CRF 模型组相比：P*＜0.05，P**＜0.01）

3.3 对大鼠血清中Scr和BUN的影响

与空白对照组相比，CRF模型组大鼠Scr与血清中BUN含量显著增加（P＜0.05）；与模型组相比，益肾降浊胶囊给药组组均能降低CRF模型大鼠的Scr和BUN 的含量，具有显著性差异（P＜0.05），结果见表 2。

表2 益肾降浊胶囊对CRF大鼠血清中Scr和BUN的影响

3.4 对大鼠肾组织病理学的影响

通过观察各组大鼠肾脏染色病理切片，观察到空白对照组大鼠的肾小球、肾小管及间质区组织结构和细胞形态均未见异常。与空白对照组相比，CRF模型组大鼠肾组织结构紊乱肾小球固缩，大量炎性细胞浸润，经益肾降浊胶囊治疗4周后，能够明显改善CRF大鼠的肾脏组织病变，以益肾降浊高剂量组最为显著，结果见图2。

图2 益肾降浊胶囊组对CRF大鼠病理变化的影响（HE染色，400）

4 讨论

慢性肾衰竭（CRF）是多种肾脏疾病发展的最终结果，该疾病的病程较长，是严重威胁患者生命的一种临床综合征。患者主要表现出明显的酸碱平衡失调、电解质紊乱、肾功能衰退等症状[4]。目前对于该病的治疗，临床上主要采取透析、降脂、抗聚、抗凝等手段[5]，但治疗成本高，患者耐受性差。因此在临床上迫切需要一种治疗该病的药物。近年来，中药治疗慢性疾病成为更多患者的选择，传统中医认为慢性肾衰存在明显脾肾阳虚，多夹有湿浊、淤血等实邪，治疗应以肾为中心，脾肾双支，活血化瘀为主。益肾降浊胶囊在临床上主要用于补肾降脾、逆降清浊。因此本文通过灌胃给予腺嘌呤构建慢性肾衰竭大鼠，探讨益肾降浊胶囊对大鼠慢性肾功能衰竭的保护作用。

高浓度腺嘌呤的摄入是常用的CRF大鼠模型造模方法，腺嘌呤可以被机体代谢从而阻塞损伤肾小管间质导致肾功能减退[6]。在本研究结果中，模型组大鼠出现明显的体重减轻，肾指数升高，血清及尿液中的的生化指标升高，以及肾脏组织出现肾小球及肾小管的病理变化，提示造模成功。

本文通过对CRF大鼠灌胃给与益肾降浊胶囊药物后，测定各组的肾功能指标，与CRF模型组大鼠相比，各治疗组大鼠血清中的Scr、BUN以及24h尿液中的蛋白含量均显著降低，且随着益肾降浊胶囊剂量的增加，大鼠的各项肾功能指标降低的越明显。同时对各组大鼠的肾组织进行病理分析显示，益肾降浊胶囊组能够显著改善CRF大鼠肾组织病理形态，改善大鼠肾功能，促进机体代谢。表明益肾降浊胶囊对腺嘌呤所致的大鼠慢性肾衰具有一定的治疗作用，不同剂量的治疗作用具有差异性。