广东清远地区非缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血基因型分布调查

叶韵婕，林金端，黄振勇，刘红伟

广州医科大学附属第六医院/广东省清远市人民医院：1.输血科；2.分子诊断中心，广东清远 511500

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是一组高发于中国南方沿海地区的严重威胁人类健康的单基因隐性遗传性血液病，可分为α地贫和β地贫两类。α地贫又可分为缺失型和非缺失型两类，其中α珠蛋白基因大片段缺失导致的缺失型α地贫是临床常见的变异类型。与缺失型α地贫相比，α珠蛋白基因或其调节序列发生点突变引起的非缺失型α地贫临床上较少见，以往常容易被临床忽视。非缺失型α地贫等位基因与东南亚型缺失(--SEA)或泰国型缺失(--THAI)杂合时可引发非缺失型血红蛋白H病(Hb H病)[1]，而非缺失型Hb H病的临床表现和血液学改变常比缺失型Hb H病更重[2]，部分非缺失型Hb H病患儿甚至需要不定期输血治疗[3-4]。因此,近几年来非缺失型α地贫以及其引起的Hb H病的产前诊断及干预越来越受到临床的重视。地贫基因突变具有高度的异质性，表现为明显的地域性或群体特异性，不同种族以及人群拥有不同的基因突变谱[5]。广东清远地处广东省西北山区，毗邻广西，南靠珠三角，且有少数民族聚居，地贫基因遗传背景复杂。目前有关广东清远地区非缺失型α地贫基因型分布的相关研究报道还很少，为了解本地区非缺失型α地贫基因的分布特征，本文将2014年4月至2018年12月本院非缺失型α地贫基因的检测结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2014年4月至2018年12月在本院门诊部及住院部进行α地贫基因检测的受检者9 047例，年龄1 d至89岁，其中男3 797例，女5 250例。

1.2方法

1.2.1标本采集 采用枸橼酸钠9∶1抗凝真空管抽取受检者外周静脉血2 mL。

1.2.2DNA提取 按照血液基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)说明书操作提取全血基因组DNA，提取的DNA标本于-20 ℃保存，剩余全血标本于-80 ℃冷冻保存。提取试剂盒由潮州凯普公司提供，试验过程严格按照试剂盒及仪器说明书操作。

1.2.3PCR扩增 按照地贫基因检测试剂盒说明书采用生物素标记的引物对3种常见的α珠蛋白基因缺失区域(--SEA、-α3.7、-α4.2)及3种常见的非缺失型α珠蛋白基因突变区域(αWSα、αCSα、αQSα)进行特异性扩增。扩增试剂盒由潮州凯普公司提供，核酸扩增仪由美国Applied biosystems公司提供，试验过程严格按照试剂盒及仪器说明书操作。

1.2.4膜杂交 将扩增产物加入导流杂交仪反应孔中，与标记有不同类型的地贫缺失或突变基因探针的尼龙膜进行杂交，经冲洗、封阻、酶标、洗涤、显色后判读结果。杂交试剂盒及杂交仪由潮州凯普公司提供，试验过程严格按照试剂盒及仪器说明书操作。

1.3统计学处理 采用SPSS22.0统计软件进行数据处理和分析，计数资料以例数或百分率表示。

2 结 果

9 047例受检者中，共检出非缺失型α地贫256例，其中男100例，女156例，非缺失型α地贫基因携带率为2.83%。研究中共检出12种非缺失型α地贫基因型，其中非缺失型α地贫基因携带者(αWSα/αα、αCSα/αα、αQSα/αα)203例，占79.30%；非缺失型Hb H病患者(--SEA/αWSα、--SEA/αCSα、--SEA/αQSα)39例，占15.23%，非缺失型Hb H病检出率为0.43%(39/9 047)；同时还检出非缺失α地贫双重杂合子(αCSα/αWSα)和纯合子(αQSα/αQSα)各1例。αWSα、αCSα、αQSα 3种常见的非缺失型α地贫等位基因构成比依次为48.84%(126/258)、30.62%(79/258)、20.54%(53/258)。见表1。

表1 256例非缺失型α地贫基因型及构成比(%)

3 讨 论

本研究共检出非缺失型α地贫256例，非缺失型α地贫基因携带率为2.83%，高于广西横县的2.14%[6]以及深圳地区的1.90%[7]。这与本研究中部分受检者先经过血细胞分析或血红蛋白电泳筛查，提示可能为α地贫基因携带者再进行α地贫基因检测有关。此前也有相关研究表明，清远地区人群α地贫基因总携带率为11.47%，高于广东省平均水平[8]。结合本次研究结果可知，广东清远地区非缺失型α地贫基因携带率也较高，因此在日常地贫防控工作中应对非缺失型α地贫的检测足够重视，以免漏诊。

同时本研究显示，清远地区3种常见的非缺失型α地贫等位基因构成比由高到低依次为αWSα、αCSα、αQSα。与陈咏珊等[9]报道的中山地区、姜碧等[10]报道的东莞地区以及屈艳霞等[4]报道的广州地区非缺失型α地贫等位基因构成比由高到低依次为αQSα、αWSα、αCSα有差异；与张满娥等[11]报道的福建龙岩地区非缺失型α地贫等位基因构成比由高到低依次为αCSα、αQSα、αWSα也有差异。说明αWSα、αCSα、αQSα 3种常见的非缺失型α地贫等位基因的分布在不同的地区和人群中存在差异，其分布具有一定的地域性或群体特异性。本研究所得结果与广西地区[12]及佛山地区[13]的调查结果较为接近。主要考虑有两方面原因：(1)清远市与广西接壤，与佛山地域接近，与两地人口交流较多；(2)清远市与广西均有瑶族、壮族等少数民族聚居，地贫基因遗传背景较为相近，因而非缺失型α地贫等位基因人群分布特征较为相似。因此，在制订地贫防控策略时除了要充分了解本地区人群的地贫基因分布特征外，还应注意地理位置、人口流动、经济水平等多方面因素的影响。

非缺失型α地贫是由于α珠蛋白基因或其调节序列发生点突变造成的，其中大多数的突变位于功能较强的α2基因内，当α2基因发生点突变时，α珠蛋白链产量的减少比α2基因发生缺失更明显。因此，与缺失型Hb H病患者相比，非缺失型Hb H病患者的临床表现和血液学改变较重[3]，对脾切除和铁螯合治疗的要求也较高[14]，部分非缺失型Hb H病甚至会引起水肿胎[5]。本研究共检出非缺失型Hb H病39例，检出率为0.43%，远高于广西横县的0.09%[6]。

清远地区人群α地贫基因总携带率(11.47%)[8]、非缺失型α地贫基因携带率(2.83%)及非缺失型Hb H病检出率(0.43%)均较高，说明本地的α地贫防控形势仍十分严峻，在制订α地贫产前预防及控制方案时应提高对非缺失型α地贫及非缺失型Hb H病的重视程度。建议在婚前检查及产前诊断工作中普及非缺失型α地贫基因检测，推行当夫妇一方确诊携带有--SEA或--THAI缺失型α地贫基因或者确诊携带非缺失型α地贫基因时，另一方需同时做缺失型和非缺失型α地贫基因检测。准确诊断出非缺失型α地贫，特别是重型非缺失型Hb H病(--SEA/αCSα、--SEA/αQSα)，及时进行产前干预，对减少重症地贫患儿的出生，提高出生人口质量有重大意义。