TNIK基因多态性与抗精神病药疗效关联研究☆

李瑶婧 徐青青 禹顺英

精神分裂症患者对抗精神病药物的治疗反应存在显著差异[1]。研究显示基因多态性在药物疗效的个体差异中起重要作用，或可作为药物疗效预测的重要标记以指导临床用药[2]。多项研究表明肿瘤坏死因子受体相关因子-2和NCK相互作用蛋白激酶（traf2-and NCK-interacting kinase，TNIK）基因是重要的精神分裂症候选基因[3-4]，近期有研究则指出TNIK基因还是抗精神病药疗效相关基因，TNIK rs6444970和rs2088885与抗精神病药物疗效存在关联[5-6]。但目前有关TNIK基因多态性与抗精神病药疗效的关联研究较少，因此本研究选择既往文献报道过与精神分裂症相关的TNIK基因单核苷酸多态性位点 （single nucleotide polymorphism，SNP），就其与抗精神病药疗效的关联在中国汉族人群中进行探索。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2016年6月至2017年10月在上海市精神卫生中心确诊及治疗的住院患者。纳入标准：①符合《美国精神障碍诊断与统计手册第四版》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，Fourth Edition，DSM-Ⅳ）精神分裂症诊断标准；②性别不限；③年龄16～65岁；④中国汉族；⑤未经药物治疗，或经药物清洗期长于5个代谢半衰期。排除标准：①存在严重并发症或有药物滥用；②既往就诊记录显示存在抗精神病药抵抗；③具有明显的自杀或冲动行为；④生命体征显著异常，或存在未控制的重大疾病（如缺血性心脏病、心肌梗塞史等）。本研究方案经上海市人类遗传资源伦理委员会审查认证。所有入组受试者本人知情同意，并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 SNPs选择 SNPs选择标准：①来源于TNIK基因；②既往研究证实与精神分裂症发生相关；③在中国汉族人群中该SNP位点最小等位基因频率（minorallele frequency，MAF）＞0.1。通过系统检索文献和数据库 （dbSNP，HapMap，1000 Genome），共筛选出3个SNP位点（表1）。

1.2.2 外周血DNA抽提及基因分型 受试者服药前以EDTA抗凝管采集外周静脉血，-20℃保存。以血液基因组DNA提取试剂盒（上海莱枫生物科技有限公司）提取受试者全基因组DNA。利用AssayDesigner软件设计引物：rs2088885正向引物序列为 5＇-ACGTTGGATGGTGATGAGGTCTCAAC TTGC-3＇，反向引物序列为5＇-ACGTTGGAT GTCAGCAATTTGGTCACAAGC-3＇；rs7627954 正向引物序列为 5＇-ACGTTGGATGAGACCTAGAGGCT TACCTTC-3＇，反向引物序列为 5＇-ACGTTGGAT GACATGAGGACAGGCAAACAC-3＇；rs13065441 正向引物序列为 5＇-ACGTTGGATGCAAGGCCTAA CACTATTTTG-3＇，反向引物序列为 5＇-ACGTTG GATGAAACTCCTCTGGTAAGTTGC-3＇。引物委托上海捷瑞生物工程有限公司合成。DNA样本质量检测合格后，以Sequenom MassARRAY技术进行基因分型。

1.2.3 药物干预及临床疗效评估 受试者予以单一抗精神病药物治疗6周，服用药物包括利培酮（150 例）、喹硫平（37 例）、阿立哌唑（34 例）、奥氮平（10例）及奋乃静（29例）。其中，利培酮初始用药剂量为1 mg/d，第1周逐渐增至2～6 mg/d；喹硫平初始用药剂量为100～200 mg/d，第1周逐渐增至400～800 mg/d；阿立哌唑初始用药剂量为10 mg/d，第1周逐渐增至10～30 mg/d；奥氮平初始用药剂量为 5 mg/d，第 1周逐渐增至 5～20 mg/d；奋乃静初始用药剂量为 4 mg/d，第 1周逐渐增至 20～60 mg/d。按以上药物剂量维持治疗至第2周结束，然后根据个体耐受情况调整用药剂量。

表1 TNIK基因位点一般信息

药物疗效的评估采用阳性与阴性症状量表（positive and negative syndrome scale，PANSS），在入组当天和第6周治疗结束时各评估一次，由2名经过严格培训的高年资精神科医师独立进行，意见统一后产生一致评分，两位医师对受试者基因型并不知情。PANSS减分率评估药物疗效，PANSS减分率=（PANSS终点得分-PANSS基线得分）/（PANSS 基线得分-30）×100%，PANSS 减分率≥50%为有效，＜50%为未显效[8]。

1.3 统计学方法 利用SPSS 20.0进行统计学分析。有效组和未显效组中SNP位点基因分布频率是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡采用检验。年龄、PANSS评分组间比较采用独立样本t检验；性别、等位基因和基因型频率分布组间比较采用检验，多重检验采用Bonferroni法进行校正。单倍型分析，以及5种遗传模型（共显性、显性、隐性、超显性及加性遗传模型）下SNP位点基因型与药物疗效的关系，采用logistic回归分析。统计效能用Quanto 1.2.4（Gauderman and Morrison 2006）计算。检验水准α=0.05，双侧检验。

2 结果

2.1 一般资料招募260例精神分裂症患者，最终232例完成治疗并随访。79例治疗有效，153例治疗未显效，两组患者性别及PANSS基线评分差异无统计学意义 （P＞0.05），未显效组年龄大于有效组（t=-3.391，P=0.001），治疗 6周有效组的 PANSS评分低于未显效组（t=-13.582，P＜0.001）（表 2）。

2.2 Hardy-Wemberg遗传平衡检验 有效组与未显效组中3个SNPs的基因型分布均符合Hardy-Wemberg遗传平衡（均P＞0.05），即研究样本具有群体代表性。

2.3 抗精神病药物不同疗效组TNIK基因多态性rs2088885等位基因（=2.039，P=0.153）及基因型（=2.001，P=0.368）分布组间差异均无统计学意义；rs7627954等位基因（=0.949，P=0.330）及基因型（=1.598，P=0.450）分布组间差异无统计学意义；rs13065441等位基因（=4.501，P=0.034）及基因型（=4.601，P=0.032）分布组间差异均有统计学意义，但经Bonferroni校正后差异无统计学意义（P＞0.05）（表 3）。

表2 有效组和未显效组精神分裂症患者一般资料

表3 有效组和未显效组等位基因和基因型频率

2.4 连锁不平衡与单倍型分析 连锁不平衡分析显示rs2088885与rs7627954两个位点处于同一个单倍型区块中，存在较强连锁不平衡（D=0.958，r2=0.898），可进行单倍型分析。对频率大于0.05的单倍型进行分析：rs2088885与rs7627954组成的单倍型中，CT、AC频率分别为0.614和0.361，2种单倍型在有效组和未显效组间分布差异无统计学意义（P＞0.05）（表 4）。

2.5 5种遗传模型分析 在校正性别和年龄的情况下，5种遗传模型中rs2088885与rs76279545基因型分布在有效组和未显效组间的差异均无统计学意义（P＞0.05）。

2.6 统计效能 3个SNP位点最小等位基因频率为 0.1～0.5，OR＞1.5，α=0.05[9]，在当前样本量下（n=232），rs2088885、rs7627954、rs13065441基因分布比较分析的统计效能分别为87.13%、87.13%和81.83%。

3 讨论

本研究选择探索TNIK基因与抗精神病药疗效的关联，是基于TNIK基因是一种重要的精神分裂症易感基因[3，10]，且与抗精神病药物疗效相关，可能是精神分裂症治疗潜在的药物靶点[11]。既往有研究对995例精神分裂症患者SNP位点分型结果与抗精神病药疗效做关联分析，发现TNIK基因rs2088885与氯氮平疗效之间有关联（=4.450，P=0.035）[5]。另有抗精神病药疗效相关的全基因组关联研究，针对奥氮平、利培酮、喹硫平等常用抗精神病药，招募3792例精神分裂症患者（发现队列2413例，验证队列1379例）进行药物临床试验，最终确定5个位点与抗精神病药治疗反应相关，且达到全基因组显著性水平，其中便包括 TNIK rs6444970（P=4.85×10-9）[6]。

表4 TNIK rs2088885-rs7627954模块单倍型频率

本研究根据既往报道选择3个与精神分裂症相关的SNPs（rs2088885、rs7627954、rs13065441），探究TNIK基因多态性与抗精神药物疗效的联系。rs13065441位点等位基因C及基因型C/T的频率分布在治疗有效组及未显效组间存在差异，但遗憾的是，经Bonferroni校正后差异不具有统计学意义（P＞0.05），同时也未能证实 rs2088885 及 rs7627954等位基因和基因型分布在组间有统计学差异 （均P＞0.05）。这与既往研究报道结论不同，本研究未能证实TNIK基因位点多态性与抗精神病药物疗效的关联。这可能是由于研究所选位点确实与抗精神病药物疗效无关，但也有可能是由于利培酮、奥氮平、奋乃静、喹硫平、阿立哌唑作用机制存在差异，所以并不能完全排除这些基因位点与药物疗效相关的可能。

综上，有关TNIK基因位点多态性与抗精神病药物的关联仍值得做进一步探究。在今后的探索中，可扩大TNIK基因SNP位点的选择范围，同时将药物种类细分，以获得更具说服力的结果。此外，由于目前相关研究都局限在中国汉族人群，今后研究在扩大样本量的同时，还应在不同人群中开展，以进一步确认TNIK基因对于精神分裂症病因研究、用药指导及新药研发的意义。