康复新液的体外抑菌活性研究

梁启聪，蔡娅娟

（中山大学附属第五医院药学部，广东 珠海）

0 引言

康复新液为美洲大蠊提取物，含有海藻糖、肌醇、苯丙氨酸、天冬酰胺等多种糖蛋白和氨基酸等，具有增强机体免疫力、保护肝脏、促进组织修复和广泛的抗肿瘤等作用[1]。内服可治疗瘀血阻滞如胃出血，胃、十二指肠溃疡等，以及肺结核、阴虚肺痨的辅助治疗[2]。外用可用于溃疡、外伤、烧伤、烫伤、褥疮等皮肤黏膜创口[3]。目前广泛应用于临床多个学科，体现多种药理作用，从药理学角度分析，康复新液富含多元醇类和多肽(表皮细胞生长因子EGF)，能促进表皮细胞生长和肉芽组织增生，改善局部血液循环，促进创面坏死组织脱落，加速创面修复；抗结核作用，肺结核病为结核杆菌引起的肺部特异炎症，其治疗主要通过抗结核药物的杀菌作用，而康复新液对非特异性炎症有一定消炎作用、抗癌作用，有学者提出恶性肿瘤的发展可能和身体防御机能的破坏、细胞免疫的缺陷、免疫监视失败以及机体抗肿瘤生长潜力的减少和不平衡有关；促进机体的新陈代谢，防止机体内的氧化损伤，提高机体的抗氧化酶活性，从而起到抗衰老的作用等[4]。而且康复新液属于纯天然昆虫——美洲大蠊的提取物，与传统西药相比，有安全性高、副作用小、使用方便、不易产生耐药性等优点。王奎等[5]研究发现，美洲大蠊乙酸乙酯提取物对供试的金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌3种革兰氏阳性菌具有一定抑菌作用，因此设计实验研究康复新液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌及黑曲霉这5种具有典型代表的菌是否具有广谱抑菌效果，探索康复新液体外抑菌的广谱性。

1 材料

1.1 受试药物

康复新液（100 ml/瓶，四川好医生攀西药业有限责任公司，批号：190409）。

1.2 仪器

SW-CJ-1F型净化工作台（苏州安泰技术有限公司），DHP300型电热恒温培养箱（武汉海声达仪器设备有限公司），HWS-12 电热恒温水浴锅( 上海一恒科技有限公司)，LMQR-3260B立式高压灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司），BHC-1500IIBl生物安全柜等。

1.3 试剂、菌株

无菌水，金黄色葡萄球菌（GIM1.64），大肠埃希氏菌 （GIM1.973），铜绿假单胞菌（GIM1.843），白色念珠菌（GIM2.194），黑曲霉（GIM 3.516）。以上菌株由广东微生物菌种保藏中心提供。

1.4 培养基

Mueller-Hinton 琼脂培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号190621）。Mueller-Hinton（MH）肉汤培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号190610），TTC显色剂（广东环凯微生物科技有限公司，批号190517）。

2 方法

2.1 实验原理

本试验采用琼脂稀释法将不同浓度的抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过细菌的生长与否，确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)[6]。

2.2 菌悬液的配制

刮取铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌18-20h的培养物，加入到含15ml无菌水的无菌试管中。摇匀，制成菌悬液。利用可见光光度仪，调菌悬液浓度为108/ml（白色念珠菌浓度为106/ml）。取培养成熟的黑曲霉用吐温-80水溶液做洗脱剂，洗掉黑曲霉，用血球计数板调菌液浓度为106/ml。

2.3 培养基的配制

培养基配制选用Mueller-Hinton（MH）肉汤培养基。培养基灭菌处理后冷却至45℃左右，加入TTC显色剂（含量为0.5g/L）。

2.4 体外抑菌试验

精密称量32g康复新液加入68g无菌水，均质摇匀，制成样品混合液。用5ml移液器吸取MH肉汤培养基5ml加入到无菌试管中待用，5根为一组（编号为1#、2#、3#、4#、5#），共五组，每组均重复以下步骤：用5ml移液器吸取样品混合液5ml加入1#试管，均质。从中吸取5ml加入2#试管，均质。按上述操作,制备二倍系列稀释样品匀液至1%。每递增稀释一次，换用1次5ml吸头。0.1%浓度吸取出的5ml倒于废液缸。三组试管分别加入铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌菌悬液每根各0.1ml。放入恒温培养箱37 ℃培养48±2h，观察结果。剩余两组试管分别加入白色念珠菌、黑曲霉菌液每根各0.1ml。放入恒温培养箱28 ℃培养5-7d，观察显色结果。

3 试验结果

结果显示康复新液对金黄色葡萄球菌的MIC为40g/L，对大肠埃希氏菌的MIC为80g/L，对铜绿假单胞菌的MIC为80g/L，对白色念珠菌的MIC为40g/L，对黑曲霉的MIC为80g/L，因此，在使用浓度为80g/L时，康复新液对这五种代表菌具有一定的广谱抑菌活性。结果见表1。

表1 康复新液最小抑菌浓度( MIC) 测定

4 讨论

本研究结果显示，康复新液中含有抗菌活性成分，对多种细菌及霉菌具有抑制作用，且抑菌效果在使用浓度80g/L有体现。康复新液抗菌有效物质可能与其所含的小分子化合物及抗菌肽有关，前者涉及不饱和脂肪酸、异黄酮化合物及甾醇类化合物，并分别获得个别单体成分；后者主要是美洲大蠊受到各种诱导源刺激后所产生的抗菌肽，并对其诱导与提取影响因素及初步杀菌机制进行了研究[7]。康复新液虽然对多株细菌具有抗菌活性，但抗菌的最小抑菌浓度相对较大，不适宜单独做抗菌剂使用，可复配其他抗菌剂或作辅助使用[8]。