铁蛋白定量检测试剂盒性能评价

沈宣辛，赵彦庆，陈丽娟，蔡爱华，李伟华

吉林省医疗器械检验所 （吉林长春 130000）

目前，检测血清中铁蛋白的方法有放射免疫测定法、酶免疫测定法、免疫比浊法、化学发光免疫分析法等。本研究采用了量子点荧光免疫发光法，以免疫层析结合双抗体夹心法为原理。其中涉及的荧光微球，是指将荧光物质通过化学键合法、物理吸附法、包埋法等方法吸附或包埋到粒子内，形成直径在纳米至微米级范围内，被激发光源激发后发出荧光的固相球体。荧光微球是一种新型的功能性标记材料，具有比表面积大、表面反应能力强、吸附性强、凝集作用大等特点，并且具有稳定的形态结构和高效的发光效率，在生物医学领域中起到重要作用[1]。

本研究讨论的以量子点荧光免疫发光法为原理的铁蛋白定量检测试剂盒结合了量子点荧光微球的优势与免疫层析法操作简单、检测快速的特点，提高了检测的灵敏度，还能根据荧光强度的大小确定待测物的含量[1]。

本研究将以量子点荧光免疫发光法为原理的铁蛋白定量检测试剂盒与干式荧光免疫分析仪组成一个分析系统，通过测定试剂盒的线性、准确度、精密度、分析特异性，评价其性能。

1 仪器与方法

1.1 仪器

本研究所用干式荧光免疫分析仪及体外诊断试剂由吉林省爱诺德生物工程有限公司提供；体外诊断试剂名称为铁蛋白定量检测试剂盒（量子点荧光免疫发光法），批号20170123；铁蛋白标准物质由中国食品药品检定研究院生产，编号150540，批号150540-201602，规格790 ng/支。

1.2 方法

准备好试剂盒和待测样品，使用微量移液器吸取待测样品100 μl，垂直滴入检测卡的样品孔中，加样15 min后，将检测卡置于干式荧光免疫分析仪，在铁蛋白的检测模式下进行检测，在仪器的显示屏幕上读取结果。

仪器的校准采用多点校准，使用中国食品药品检定研究院生产的铁蛋白标准物质，用稀释液（0.01 M PBS，pH7.2，含10%正常人血清） 进行稀释配制成5个浓度点，分析线性回归，得到校准曲线y=0.0071662x-0.031971，r2=0.99919。

1.3 统计学处理

采用Excel 2007进行数据处理。

2 结果

2.1 线性

使用厂家提供的线性高值（400 ng/ml），用稀释液（0.01M PBS，pH7.2，含10%正常人血清） 进行稀释配制成6个浓度点（0、200、300、350、375、400 ng/ml），用试剂盒进行测试，每个浓度点测试3次，将重复测试结果的平均值与稀释比例进行直线拟合，在1～400 ng/ml范围内得到线性方程y=394.092x+0.182，r=1.00，符合产品技术要求关于r≥0.99规定。

2.2 准确度

用试剂盒测试中国食品药品检定研究院生产的铁蛋白标准物质，分别计算相对偏差，测试高值样品（200 ng/ml），得到相对偏差结果为-1.7%、-2.8%、-6.8%，测试低值样品（50 ng/ml），得到相对偏差结果为2.6%、-3.4%、-0.7%，符合产品技术要求关于测量结果的相对偏差不超过±15.0%的规定。

2.3 精密度

在满足我单位质量控制的前提下，用同一批号试剂盒测试高浓度（200 ng/ml）和低浓度（50 ng/ml）的样品，每个样品重复检测20次，计算变异系数，批内精密度结果为CV高值：2%，CV低值：4%。用3个批号试剂盒分别测试高浓度（200 ng/ml）和低浓度（50 ng/ml）的样品，每个样品重复检测10次，计算3批试剂相对极差，批间精密度结果为R高值：1%，R低值：5%，符合产品技术要求关于批内精密度变异系数CV应不大于15%，批间相对极差R应不大于20%的规定。

2.4 分析特异性

当样品中含有甘油三酯、胆红素、血红蛋白时，可能会对结果产生干扰，在分析此试剂盒的特异性实验中，分别测试含有干扰物的质控样本和不含干扰物的质控样本。（1）先使用30个检测卡，分成6组，测试分别含有规定浓度干扰物的高浓度质控样本和低浓度质控样本，第1组为200 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物胆红素10 mg/dl；第2组为200 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物甘油三酯900 mg/dl；第3组为200 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物血红蛋白200 mg/dl；第4组为50 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物胆红素10 mg/dl；第5组为50 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物甘油三酯900 mg/dl；第6组为50 ng/ml的铁蛋白溶液中加入干扰物血红蛋白200 mg/dl；每组重复检测5次。（2）再使用30个检测卡，分成6组，测试不含有干扰物的高浓度质控样本和低浓度质控样本，每组重复检测5次。含有干扰物的质控样本测试结果均值记为M，不含有干扰物的质控样本测试结果均值记为T，计算交叉反应率B =（M-T）/T×100%。该产品技术要求中规定：交叉反应率B≤15%。经计算，含干扰物胆红素10 mg/dl时，B高：-1%，B低：-3%；含干扰物甘油三酯900 mg/dl时，B高：0.05%，B低：-0.3%；含干扰物血红蛋白200 mg/dl时，B高：-0.4%，B低：-5%。所以，当样品中含有干扰物甘油三酯浓度≤900 mg/dl、胆红素浓度≤10 mg/dl、血红蛋白浓度≤200 mg/dl时，检测结果不引起干扰效应，符合产品技术要求规定。

3 讨论

铁蛋白是人体内一种贮存铁的可溶性组织蛋白，参与对造血和免疫系统的调控。正常人血清中含有少量铁蛋白，血清中铁蛋白水平可反映铁的储备情况及人体的营养状况。血清铁蛋白的测定是监测铁代谢的有效指标，铁蛋白浓度下降并伴有血红蛋白减少时，一般认为出现了铁缺乏[2]。铁蛋白含量低于10～15 ng/ml时，通常认为是缺铁性贫血[3]。肝内铁过量可能导致肝硬化和肝纤维化，血液检查会出现血清铁蛋白浓度升高的情况[4-5]。由感冒、肠炎、结核等各种感染性疾病引起的应激反应也会使血清铁蛋白升高[6]。检测血清中的铁蛋白，有利于缺铁性贫血、肝脏疾病及某些肿瘤疾病的诊断。监测血清中铁蛋白的动态变化，对于疾病的发展、转归、复发，都有积极的作用[7]。

本研究对试剂盒的线性、准确度、精密度、分析特异性进行评价，研究结果表明，被检验铁蛋白定量检测试剂盒，结果准确可靠，检测灵敏快速，测值准确，可满足临床检测要求。