王 丽
附子是一种毛茛科、乌头属植物的子根的加工品,通过炮制减轻毒性之后,可以进行入药,具有镇痛、抗炎、提高免疫功能等的作用[1,2]。本次研究通过对试验鼠分别给予5 g生药/kg剂量的炒附片、黑顺片、淡附片以及蒸附片进行试验,对大鼠使用鸡蛋清以及对小鼠使用二甲苯分别造成足肿胀和耳廓肿胀,通过观察大鼠足肿胀度、小鼠耳肿胀度以及肿胀度抑制率来对比不同附子的抗炎效果;对小鼠使用环磷酰胺使其免疫低下,通过观察小鼠的脏器指标来对比不同附子的免疫功能;对小鼠采用热板致痛试验,通过观察小鼠的痛阈值对比不同附子的镇痛效果,现报告如下。
1.1 研究药物不同炮制过程中的附子有炒附片、黑顺片、淡附片以及蒸附片,将500 g以上附片分别用10倍的水进行浸泡,30 min后将其取出进行煎煮浓缩至最高浓度,并将其用水进行稀释,制成生药0.5 g/ml[3]。
1.2 试验动物大鼠均为雄性,体重220~240 g,SD级;小鼠雌雄各一半,体重18~22 g,SPF级,均经过检疫后合格。
1.3 方法
1.3.1 耳廓肿胀试验将雌雄数量相同的50只小鼠,随机以每组10只作为黑顺片组、淡附片组以及蒸附片组,同时随机挑选10只设置为对照组作为参照。均采用灌胃的方式进行5 g的生药/kg给药,1次/d,持续给药7 d。7 d后,在给药1 h后对每只小鼠的右耳廓上涂抹二甲苯,剂量为0.04 ml/只,并在0.5 h将小鼠脱颈椎处死,分别测量耳廓肿胀度并进行对比。耳肿胀度=(右耳重量-左耳重量)/左耳重量×100%。
1.3.2 足肿胀试验将40只雄性大鼠,随机以每组8只作为刨附片组、炒附片组、黑顺片组、淡附片组以及蒸附片组,同时随机挑选8只设置为对照组作为参照。均采用灌胃的方式进行5 g的生药/kg给药,1次/d,持续给药6 d。6 d后,在给药1 h后对每只大鼠的右后足拓皮下注射新鲜的鸡蛋清,剂量为0.05 ml/只,分别测量右足1 h、2 h、4 h以及6 h的足容积,分别计算肿胀度并进行对比。将给药前后的右后足容积之差作为肿胀度=给药前的右后足容积-给药后的右后足容积。肿胀度抑制率=(正常肿胀度-附片组的评价肿胀度)/正常肿胀度×100%。
1.3.3 热板致痛试验采用智能热板仪进行试验,将小鼠舔后足的开始时间作为痛阂值,筛选出痛阂值为5~30 s的50只雌性小鼠,先将不同痛阂值的小鼠进行分类,再随机以每组10只作为炒附片组、黑顺片组、淡附片组以及蒸附片组,同时随机挑选10只设置为对照组作为参照。均采用灌胃的方式进行5 g的生药/kg给药,1次/d,持续给药6 d。6 d后,在给药后的于第6天给药后的0.5 h、1 h、1.5 h以及2 h分别采用智能热板仪测量小鼠的痛阂值并进行对比。
1.3.4 免疫试验将雌雄数量相同的60只小鼠,随机以每组12只作为炒附片组、黑顺片组、淡附片组以及蒸附片组,同时随机挑选12只设置为对照组作为参照。均采用灌胃的方式进行5 g的生药/kg给药,1次/d,持续给药10 d。在第1 d、3 d、5 d、7 d以及9 d分别在给药前将环磷酞胺进行皮下注射,剂量为50 mg/kg,并在1 d后对小鼠称重。最后将小鼠脱颈椎处死,将其肝脏、脾脏以及胸腺称重,分别计算脏器系数并进行对比。脏器系数=脏器重量/小鼠体重×100%。
2.1 对耳廓肿胀的影响不同附子组相比对照组的耳肿胀度均有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 对耳廓肿胀的影响 (只,
注:与对照组相比,1)P<0.05
2.2 对足肿胀的影响不同附子组在用药6 h相比对照组,除整齐附片组外,足肿胀度均有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05),同时在用药1 h炒附片组以及黑顺片组与对照组的差异明显。见表2。
组别1h2h4h6h肿胀度(g)抑制率(%)肿胀度(g)抑制率(%)肿胀度(g)抑制率(%)肿胀度(g)抑制率(%)对照组0.83±0.120.61±0.070.44±0.060.33±0.04炒附片组0.48±0.0441.250.43±0.031)28.010.27±0.0239.030.20±0.021)39.22黑顺片组0.63±0.0626.440.50±0.061)15.940.37±0.0614.840.21±0.051)38.31淡附片组0.55±0.0434.690.46±0.031)23.690.18±0.0258.960.13±0.011)64.62蒸附片组0.62±0.0625.910.55±0.061)6.530.35±0.0315.510.28±0.031)21.52
注:与对照组相比,1)P<0.05
2.3 对痛阂值的影响不同附子组相比对照组的痛阂值变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。
表3 对痛阂值的影响 (只,
2.4 对脏器免疫功能的影响不同附子组相比对照组脏器系数中,黑顺片组的脾脏系数上升,蒸附片组的脾脏系数下降,其他组的脾脏系数以及胸腺系数均上升,所有组的肝脏系数无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。
表4 对脏器免疫功能的影响 (只,
附子,又名乌头或附片,其含有的双酯型乌头碱类成分具有抗炎以及镇痛的作用,但具有一定的毒性[3,4]。附子具有增强心肌收缩力、加快心率、改善血液循环作用、降低血压作用、缓解心律失常以及抑制急性炎症的作用,在临床治疗中受到了广泛的使用[5]。根据相关研究资料显示,附子能够有效的抑制因二甲苯而引起的小鼠耳肿症状,同时还可以降低炎性渗出液的白细胞渗出[6~7]。也有研究显示,不同炮制过程中的附子要成品的乌头碱含量有明显的差异,总生物碱含量、双酯型生物碱含量较生的附子其含量程度不同的降低,由此可见通过炮制能有效的降低附子含有的毒性,但同时也会使附子的有效成分降低,不同的炮制方式能够控制其含量[8]。因此,在临床治疗上对附子的使用过程中,应以中医理论为依据,结合患者的实际情况来合理用药,保证不同炮制过程中的附子要成品用药安全的同时,最大限度的发挥能其药效,从而提高对患者的治疗效果[9,10]。
通过本次研究结果得出,不同附子组相比对照组的耳肿胀度均有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。不同附子组在用药6 h相比对照组,除整齐附片组外,足肿胀度均有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05),同时在用药1 h炒附片组以及黑顺片组与对照组的差异明显。不同附子组相比对照组的痛阂值变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。不同附子组相比对照组的痛阂值变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结果说明化经过不同炮制的附子所含有效成分含量的不同,随着给药时间的增长,各种附子作用有不同的稳定性。
综上所述,不同炮制过程中的附子均具有镇痛、抗炎、提高免疫功能等的作用,同时各种附子的效果根据炮制方式的不同,存在一定的差异,应该根据实际情况进行使用。