HPV亚临床感染和细胞免疫功能的相关研究

冯明涛 黎四平 苏小华

人类乳头瘤病毒（HPV）亚临床感染属于一种特异性的感染形式，而对于HPV 亚临床感染患者而言，在临床上没有特异性的症状与体征，并且与其有着一致性的细胞学异常，在临床是能够利用宫颈刮片、阴道镜、醋酸白试验等方式进行检验[1]，在临床上的相关研究也比较少，近年来，随着大量流行病学资料的分析，在HPV 亚临床感染中典型尖锐湿疣更为多见，属于一种具有传染性的疾病，还会诱发患者出现尖锐湿疣或宫颈癌。根据临床研究表明，患者的细胞免疫功能往往会出现异常，本次研究对本院HPV 亚临床感染患者的细胞免疫功能进行分析，探究其CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为HPV 亚临床感染患者，总例数为40，将其作为实验组，同时再选取40 例未出现HPV 亚临床感染的正常患者作为对照组。研究时间为2018 年4 月—2019 年4 月，对照组40 例中，纳入男性16 例，纳入女性24 例，年龄为23～62 岁，平均年龄值（42.1±2.3）岁；实验组40 例中，纳入男性为23 例，纳入女性为17 例，年龄在22～63 岁，年龄平均值为（41.2±2.1）岁。纳入标准：（1）泌尿生殖系统皮肤黏膜无肉眼辨认皮损；（2）醋酸白试验呈现阳性；（3）HPV 核酸检测呈现阳性。排除标准：（1）心、肝、肾、造血系统存在器质性病变；（2）免疫增强剂、免疫抑制剂应用，伴有免疫性疾病患者；（3）其他病毒感染患者；（4）妊娠期妇女。研究已将参与研究患者病历资料送入伦理委员会，并获得同意，患者及其家属也支持研究，两组患者资料数据差异不影响研究科学性。

1.2 方法

给予醋酸白试验，由皮肤科专业检测人员，采用棉签对患者皮肤黏膜分泌物进行清除，采用5%的冰醋酸棉拭子压在皮疹之上，观察5 min 后，如检查部位变白，边缘清晰，若周围正常组织不变色为阳性。给予HPV 检测，采用取材刷在检查部位皮肤黏膜进行搓动，取出后放入明确标识的取样管当中，采用专用的细胞保存液，将瓶盖拧紧，送往实验室检测。采用人乳头瘤病毒检测试剂盒，采用HPV 核酸扩增试剂，HPV 杂交检测试剂组成，采用基因扩增技术，利用杂交检测扩增产物，采用碱性磷酸酶系统进行定性检测，对HPV 基因进行分型检测。给予T 淋巴细胞亚群检测方法，采用标本采集的方式，取患者静脉空腹外周血，采用免洗淋巴亚群分析试剂盒，采用溶血素、流式细胞仪。将每个患者的样本管标识为A 管与B 管，采用加样枪吸取20 μL 的试剂，并加入到A 管当中，同时吸取20 μL 试剂加入到B 管当中，分别在两管中加入50 μL的新鲜抗凝血，在室温下孵育15 min 后，分别加入500 μL 溶血素，对结果进行判定。

1.3 观察指标

观察指标为：（1）CD3+；（2）CD4+；（3）CD8+；（4）CD4+/CD8+。

1.4 统计学处理

用SPSS 22.0 统计学软件对所得数据进行分析研究。计量资料用（±s）表示，采用t检验；计数资料采用n（%）表示，以χ2检验，当P＜0.05 时，差异有统计学意义。

2 结果

研究可得，两组患者的CD3+水平、CD8+水平、CD4+/CD8+指标不具备统计学意义（P＞0.05）；实验组患者CD4+指标与对照组存在差异，差异统计值合理（P＜0.05）。见表1。

3 讨论

HPV 亚临床感染是患者HPV 感染后发展成为尖锐湿疣的一个重要的过程，临床资料表明，HPV 亚临床感染的临床病变比较多样化[2]，是亚临床感染当中的一种常见形态，总体占比34%，并且目前公认HPV 亚临床感染与潜伏感染是尖锐湿疣复发的主要原因，同时与宫颈癌、肛周鳞状细胞癌等疾病密切相关，因此引发了人们的重视。但是由于临床诊断较为困难[3]，仅靠肉眼难以分辨，临床上容易出现漏诊症状。因此在临床上，HPV 亚临床感染的诊断方法有两种，分为直接检查与间接检查两种，其中醋酸白试验、阴道镜检查[4]、组织病理检查属于直接性的检查方案，而分子生物学方法检测、原位杂交、免疫印迹检查等方式则属于间接检查方案，在临床上一般采用醋酸白试验检查，但是在检查过程中的假阳性比例比较高，而再用核酸检查方案又无法区分亚临床感染与潜伏感染两种，采用这两种方法联合检测能提高检出率[5]，减少临床上的误诊。另外细胞免疫是控制HPV 激活与消退的重要方式，对治疗反应方面起着重要的调节作用，而对T 淋巴细胞亚群而言，其在机体抗病毒细胞免疫当中有着重要作用，对于正常的机体内T 淋巴细胞亚群相互作用，并且维持一定的平衡，保证细胞免疫功能的正常[6]。

而当人体不同淋巴细胞亚群的数量与功能出现异常改变的情况下会导致机体免疫系统紊乱，进而引发一系列的病理改变[7]，而细胞免疫在消毒过程中有着两类主要的效应细胞起着关键作用，一方面是CD4+具有辅助性的T 淋巴细胞，其二是CD8+的细胞毒性T淋巴细胞，数量在一定程度上反映着功能，对于HPV患者而言，其T 细胞存在着相关免疫缺陷，出现频发HPV 相关性感染与肿瘤，并且与免疫抑制的过程有着直接联系[8]。对于特异性的CD8+，细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）是宿主识别病毒抗原肽的免疫细胞亚群[9]，而趋化至病灶后与MHCI 病毒抗原肽复合物的细胞相互接触[10]，在辅助分子与细胞因子的共同作用之下，用颗粒酶、肿瘤坏死因子（TNF）、Fas-Fasl 等方式杀灭受染的细胞而清除病毒，根据临床研究表明[11]，CD3+指标正常、CD8+指标升高、CD4+指标降低，而CD4+/CD8+比值却有所下降[12]，其他的并未出现异常现象，对于HPV 亚临床感染患者而言[13]，其细胞免疫状态与尖锐湿疣患者不同，其细胞免疫功能降低也无法直接清除病毒，但是可以进一步阻止病毒感染[14]，形成一种胶着状态，同时还能对患者HPV感染加重的情况进行预防，形成一种暂时的平衡状态[15]。

表1 两组患者各类细胞免疫功能指标对比（±s）

表1 两组患者各类细胞免疫功能指标对比（±s）

注：#与对照组相比，P ＜0.05

本次研究的研究结果可得，两组患者的CD3+水平、CD8+水平、CD4+/CD8+指标不具备统计学意义（P＞0.05）；实验组患者CD4+指标与对照组存在差异，差异统计值合理（P＜0.05）。

综上所述，HPV 亚临床感染的机制在临床上难以完全清楚，从目前的情况上看，临床上多种治疗方法都无法取得满意疗效，考虑与患者的细胞免疫功能异常相关，而在进一步明确免疫机制之后，从中制定针对性的治疗方案，本研究可知，在HPV 亚临床感染中，患者会出现细胞免疫功能降低的情况，有着密切的相关性。