G试验对艾滋病患者合并真菌感染的诊断价值

曾江，彭海英，赖小菊

（赣州市第五人民医院，江西 赣州341000）

艾滋病（AIDS）是人体感染人类免疫缺陷病毒（HIV）后导致机体免疫力低下所引起的一种传染性疾病，随着现代生活方式的改变，艾滋病感染者逐年增多[1]。HIV病毒感染人体后，破坏机体的免疫系统，导致患者抵抗力降低，极易发生各种机会性感染，而真菌感染是较为常见的感染，由于其临床症状不明显、影像学表现不典型，直接涂片镜检检出率低以及培养时间长等影响早期诊断，从而影响治疗，病死率及致残率较高[2,3]，因此，早期特异性的诊断对于改善预后意义重大。目前国内外很多研究认为，G试验对于真菌感染的快速诊断有较大的应用价值,本研究旨在探讨G试验对HIV患者合并真菌感染的临床诊断价值,为真菌感染的早期诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 回顾性研究2017年1月至2017年12月在赣州市第五人民医院住院疑似合并真菌感染的HIV患者31例。入组标准：⑴由赣州市疾病与预防控制中心检测确诊,并符合2011年版中华医学会感染病学分会艾滋病学组颁布的 《艾滋病诊疗指南》[4]。⑵临床资料完整，且意识清楚，能与人正常交流者。所有患者中，男性19例，女性12例，年龄跨度为20~55岁。本研究所使用的病例经医院医学伦理委员会审核批准并取得所有患者知情同意并签署同意书。

1.2 方法

1.2.1 真菌培养 收集患者的纤支镜灌洗液进行真菌培养。患者纤支镜灌洗液标本收集后接种于细菌培养瓶,常规培养出真菌后转种至沙保罗培养基进行培养，观察细菌形态，并在高倍显微镜下进行鉴定。

1.2.2 （1,3）-β-D葡聚糖的检测 采集患者的静脉血和纤支镜灌洗液进行G试验检查，应用丹娜（天津）生物科技有限公司生产的试剂。⑴血标本和灌洗液离心后取上清液作为样品待用；⑵向微孔板标准品对应孔中加入60μl标准品a~e溶液制成标准曲线；⑶向微孔板样品孔中加入20μl样品和40μl处理液，震动混匀后 37°C 孵育 10min；⑷向加有标准品和样品的微孔板中加入100μl反应主剂溶液，微孔板震动5~10s后在37°C下，波长405nm下进行检测40min，反应结束后得出吸光度变化的平均速率；根据标准曲线计算样品中的的（1,3）-β-D葡聚糖含量。以（1,3）-β-D葡聚糖浓度＞95pg/ml判定为G试验阳性。

1.3 统计学分析 检验结果用SPSS17.0分析系统软件进行统计学分析处理,以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

对31例疑似合并真菌感染的HIV患者进行灌洗液真菌培养、血G试验检查以及灌洗液G试验检查，见表1：真菌培养阳性例数为15例，阳性率为48.4%，其中马尔尼菲青霉菌10例，念珠菌2例，新型隐球菌3例。血G试验阳性例数为21例，阳性率为67.7%，灌洗液G试验阳性例数为23例，阳性率为74.2%。经统计学分析，血G试验阳性率高于真菌培养阳性率，差异无统计学意义（P=0.123），灌洗液G试验阳性率高于真菌培养阳性率，差异有统计学意义（P=0.037），两种G试验方法相比较，灌洗液G试验的阳性率高于血G试验，差异无统计学意义（P=0.576）。

表1 真菌培养与G实验阳性率比较

3 讨论

艾滋病是严重危害人民群众健康的公共卫生问题，我国AIDS疫情严峻，流行范围较广，且越来越年轻化，已经严重影响到国家的经济发展和社会稳定[5]。艾滋病病毒感染人体后，大量破坏CD4+T淋巴细胞，导致机体免疫力低下，从而使人体因丧失对各种疾病的抵抗能力而发病[1]。由于艾滋病患者免疫力低下，极易合并病毒、细菌、真菌等多种病原菌感染，且通常伴有二重或多重感染，因此艾滋病合并真菌感染患者临床症状多表现为非特异性，易被误诊或漏诊[6]。临床上常用的真菌感染的确诊方法有赖于真菌培养，该方法不仅能明确病原菌，还能做相应的药敏检测。虽然其诊断准确，因其耗时长，无法在感染早期做出诊断，从而延误治疗。因此，找出一种快速，灵敏及特异的真菌感染的检查方法尤为重要。

G试验检测是真菌细胞壁的多糖成分 （1,3）-β-D葡聚糖，作为真菌抗原成分具有较高特异性的（1,3）-β-D葡聚糖，广泛存在于除隐球菌和接合菌（毛霉菌）以外的所有真菌细胞壁中。当巨噬细胞吞噬或消化侵入人体组织或血液中的真菌后，（1,3）-β-D葡聚糖就能持续释放进入血液或其他体液，极易被检测出来[7,8]。而在浅部真菌感染中，（1,3）-β-D葡聚糖不被释放,其血液浓度也不高，因此临床将血液或其他体液中检测到的 （1,3）-β-D葡聚糖作为深部真菌感染的标志[9,10]。本研究结果显示,血G试验和灌洗液G试验的阳性率都高于真菌培养的阳性率,表明G试验的敏感性高于真菌培养，而灌洗液G试验的阳性率高于血G试验。可能由于本研究实验数据较少,血G试验与真菌培养之间以及两种G试验方法之间的差异无统计学意义。

真菌培养是真菌鉴定的金标准，但真菌培养也存在假阴性。同样，G试验也存在一定的假阴性，本研究中有1例真菌培养阳性的患者血G试验和灌洗液G试验都阴性,可能是因为这类真菌数量较少，经巨噬细胞吞噬、消化后，（1,3）-β-D 葡聚糖从细胞壁释放太少有关[9,11]。当然，G试验也会出现假阳性,分析原因包括：静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；接受香菇多糖和以真菌为原料制成的抗菌药物；链球菌血症；血液透析者1周内进食真菌类食物等，都会造成（1,3）-β-D葡聚糖的假阳性[12,13]，因此，检测时要排除这些干扰。

综上所述,真菌培养法虽然为真菌感染诊断的金标准，但因其培养时间长，培养阳性率低，不能区分定植菌、感染菌和污染菌，且感染初期不容易取得阳性培养结果[14,15]，因此影响了艾滋病合并真菌感染的早期诊断。而G试验作为一种辅助诊断方法，有较高的敏感性,主要是检测时间短，弥补了传统培养方法的不足,为艾滋病合并真菌感染的早期诊断和早期治疗提供了条件,改善患者预后。