秦巴山区野生树莓抗氧化能力比较研究

孙莹莹

(陕西省安康市农业科学研究所，陕西 安康 725021)

树莓(RubuscorchorifoliusL. f.)，是蔷薇科悬钩子属中的一种落叶灌木的聚合浆果[1]，又名悬钩子、三月泡、山莓等，中药名为覆盆子，既是常用的药用植物，又属于第三代新兴水果[2]，为药食同源植物。树莓在我国分布广泛，野生资源丰富，多生于向阳山坡、溪边、山谷、荒地和疏密灌丛中潮湿处[3]。据研究，树莓果实营养丰富，含有多种维生素、氨基酸及酚类物质[4～6]，具有抗氧化、抗菌、抗炎症、抗肿瘤[7～9]、抗肥胖、预防心血管疾病和美白皮肤等多种功效[10～12]。树莓果实可鲜食、也可加工成果汁、果酒、果醋、果冻、果酱、乳制品[13～18]等产品，甚至在香精、染料、化妆品、医药[19～21]等领域也用广泛的应用，发展前景十分广阔。

目前我国栽培的树莓品种大多引自国外，本土品种少之又少。安康位于秦巴山区，多山地，少平原，粮食产量低，农民种田积极性低，适合发展特色经济产业，树莓就是其中之一。本研究共收集6种秦巴山区野生树莓，均移栽至安康市农业科学研究所野生经济植物资源圃。在抗寒性、抗病性、扦插成活率及产量等农艺性状都较好的前提下，选取4种为研究对象，通过测定果实中多酚、黄酮含量及还原能力，筛选出抗氧化能力较强的品系，为当地树莓优良品种选育提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

四种树莓果实均采自安康市农业科学研究所野生经济植物资源圃。

福林酚试剂：上海荔达生物科技有限公司；没食子酸标准品：成都曼斯特生物科技有限公司；芦丁标准品 美国Sigma公司；无水碳酸钠、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁等常规试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

UV-1700紫外-可见分光光度计 日本岛津公司；分析天平 北京塞多利斯天平有限公司；台式离心机 湖南凯达科学仪器有限公司；超声波提取器 上海兰仪实业有限公司；HH-S4恒温水浴锅 北京科伟永兴仪器有限公司；PB-10型pH计 德国sartorius公司；202-00干燥箱 北京化玻医疗器械有限公司；移液枪 上海大龙医疗设备有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 树莓中总酚含量的测定方法 准确称取10g新鲜树莓样品，加入适量60%的乙醇研磨成浆后置于250mL三角瓶中，加入100 mL 60%的乙醇溶液，搅拌均匀，在超声波提取器中75℃提取50 min。提取液以3 000 r·min-1离心20 min，上清液定容至200 mL，采用福林-酚比色法测定总酚含量[22]，以没食子酸为标准品，每个样品重复三次。

1.3.2 树莓中黄酮类化合物含量的测定方法 准确称取10 g新鲜树莓样品，加入适量60%的乙醇研磨成浆后置于250 mL圆底烧瓶中，加入100 mL 60%乙醇，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取1 h，提取液以,3 000 r·min-1离心20 min，上清液定容至200 mL。采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定黄酮类化合物的含量[23]，以芦丁为标准品，每个样品重复三次。

1.3.3 树莓果实还原能力的测定 准确称取10 g新鲜树莓样品，加入适量70%的乙醇研磨成浆后置于150 mL三角瓶中，加入70 mL 70%的乙醇溶液，搅拌均匀，在超声波提取器中40℃提取1 h，提取液以3 000 r·min-1离心20 min，上清液定容至100 mL。采用普鲁士蓝法，以100 mg·L-1抗坏血酸(VC)为参照[24]，进行测定，每个样品重复三次。

1.4 数据处理与分析

研究用DPS软件进行相关性分析,图表绘制采用Excel。

2 结果与分析

2.1 树莓果实中总酚含量的分析

植物中的酚类物质具有很好的抗氧化功能，一般来说总酚含量越高，其抗氧化活性就越强[25]。由图1可见四种品系的野生树莓果实中的总酚含量差异较大，其中品系2的总酚含量最高，达到379.85 mg·kg-1，其次是品系4，品系3最低。其中除了品系1和品系4外，几种品系的野生树莓果实相互之间总酚含量差异极显著(p<0.01)。

2.2 树莓果实中黄酮含量的分析

黄酮类化合物在植物体中广泛存在，具有抗肿瘤、抗炎、保肝、抗氧化自由基等多种生物活性[26]。由图2可见四种品系的野生树莓果实中的黄酮含量差异较大，依然是品系2的最高，其次是品系4，品系3最低，这与总酚含量的高低排序一致。4种品系的野生树莓果实相互之间黄酮含量差异极显著(p<0.01)。

2.3 树莓果实还原能力分析

还原能力也常用来评价抗氧化剂活性，其原理是样品中的还原物质与铁氰化钾反应生成亚铁氰化钾，再与Fe3+反应生成普鲁士蓝，在波长700 nm处有特异吸收，吸光值越大，样品的还原能力就越强，即抗氧化活性也越强。由图3可以看出四种品系的野生树莓果实还原能力的强弱与总酚及黄酮含量排序一致，品系2最高，其次是品系4，品系3最低。4种品系的野生树莓果实相互之间还原能力差异极显著(p<0.01)。

2.4 总酚含量、黄酮含量及还原能力的相关性分析

由表1可以看出，四个品系的野生树莓果实中总酚含量和黄酮含量之间相关性达显著水平(p<0.05)，总酚含量和黄酮含量与还原能力之间都极显著相关(p<0.01)，此分析结果说明酚类和黄酮类物质是树莓果实中主要的抗氧化物质，与前人研究结果一致[27]。

图1 不同品系的树莓总酚含量比较分析

图2 不同品系的树莓黄酮含量比较分析

图3 不同品系的树莓还原能力比较分析

项目总酚含量黄酮含量VCEAC总酚含量10.92∗0.97∗∗黄酮含量0.92∗10.98∗∗VCEAC0.97∗∗0.98∗∗1

注：* 显著相关p<0.05；** 极显著相关p<0.01。

3 结论

品系2树莓果实的总酚及黄酮含量都最高，还原能力也最强。品系4次之，品系3最低。

四个品系的野生树莓果实相互之间总酚含量(其中除了品系1和品系4之间)，黄酮含量及还原能力都差异极显著(p<0.01)。

四个品系的野生树莓果实中总酚含量和黄酮含量之间相关性达显著水平(p<0.05)，总酚含量和黄酮含量与还原能力之间都极显著相关(p<0.01)。

品系2和品系4可做为优良品系进行人工驯化与栽培，或作为树莓新品种选育的亲本。