儿童癫痫患者血清胱抑素C表达水平及检测意义*

史剑飞，卢北玲，宁远征△

1.西安市儿童医院检验科(西安710003)；2.西安市中医医院检验科(西安710021)

癫痫是一种以反复发作(间隔>24 h)及具有很强复发潜力(至少60%)为特征的慢性神经性疾病[1]。儿童癫痫是小儿时期常见的一种疾病，发病原因复杂多样，呈现反复发作并出现肌肉抽搐、精神意识和情感障碍等特征。血清胱抑素C(Cystatin C,Cys C)是一种重要的分泌型半胱氨酸蛋白酶抑制剂，可抑制组织蛋白酶B、H、K、L和S的活性，广泛存在于哺乳动物的体液和组织中[2]。Cys C可反映肾小球的滤过功能，其被广泛应用于肾功能早期损伤的诊断[3]。Cys C在许多细胞系统中发挥着广泛的生物学作用，比如促进细胞生长、抑制炎症、抗病毒及抗菌特性等[4]。Cys C在癫痫和阿尔茨海默病等神经退行性疾病也发挥着重要的神经保护作用，本文测定儿童癫痫患者血清的Cys C水平，并探讨Cys C与肾功能损伤指标尿素氮(Ureanitrogen,UA)、尿酸(Uricacid,UN)的相关性，为临床医生提供更多的理论依据。

资料与方法

1 一般资料 选取2018年5-12月在西安市儿童医院确诊为癫痫慢性病或癫痫长期的门诊患儿为研究对象，收集患者血清进行Cys C、UA及UN的浓度测定。根据患儿的发作病史结合患儿动态脑电图等辅助检查，由我院多名有经验的小儿神经内科主任医师确诊的病例为研究对象。患儿年龄选择为0d至13岁之间，其中男986例，女734例。同时收集同时期在我院儿童保健科健康体检的儿童229例作为阴性对照。

2 仪器与方法 长沙湘仪冷冻离心机，贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪，Cys C检测试剂为贝克曼库尔特原装检测试剂。UN和UA检测试剂为北京利德曼生化股份有限公司检测试剂。分别采用免疫胶乳比浊法、尿素酶-谷氨酸脱氢酶法和尿酸酶法对血清中Cys C、UN和UA的浓度水平进行检测。

结 果

1 1～13岁癫痫组患儿与正常对照组Cys C表达水平 1～13岁之间癫痫组患儿Cys C值(0.89±0.01 mg/L)与正常对照组儿童Cys C值(0.82±0.01 mg/L)相比，差异有统计学意义(t=5.676，P<0.05)；癫痫组男性患儿Cys C值(0.90±0.01 mg/L)与正常对照组男性儿童Cys C值(0.82±0.01 mg/L)相比，差异有统计学意义(t=5.120，P<0.05)；癫痫组女性患儿Cys C值(0.89±0.01 mg/L)与正常对照组女性儿童Cys C值(0.83±0.02 mg/L)相比，差异有统计学意义(t=2.457，P<0.05)。癫痫组男性患儿Cys C值(0.90±0.01 mg/L)与女性患儿Cys C值(0.89±0.01 mg/L)相比，差异无统计学意义(t=0.9411，P>0.05)；正常对照组男性儿童Cys C值(0.82±0.01 mg/L)与女性儿童Cys C值(0.830±0.02 mg/L)相比，差异无统计学意义(t=0.5626，P>0.05)。见表1，图1。

表1 1～13岁两组Cys C表达水平(mg/L)

图11～13岁癫痫组患儿与正常对照组儿童Cys C值(**P<0.05，nsP>0.05)

2 0 d至1岁癫痫组患儿与正常对照组Cys C表达水平 0 d至1岁患儿之间癫痫组患儿Cys C值(1.20±0.04 mg/L)与正常对照组儿童Cys C值(1.24±0.05 mg/L)相比，差异无统计学意义(t=0.5331，P>0.05)；癫痫组男性患儿Cys C值(1.23±0.06 mg/L)与正常对照组男性儿童Cys C值(1.33±0.08 mg/L)相比，差异无统计学意义(t=0.9384，P>0.05)；癫痫组女性患儿Cys C值(1.18±0.05 mg/L)与正常对照组女性儿童Cys C值(1.01±0.02 mg/L)相比，差异无统计学意义(t=0.8398，P>0.05)。见表2、图2。

表2 0 d至1岁两组Cys C表达水平(mg/L)

图20 d至1岁之间癫痫组患儿与正常对照组儿童Cys C值(nsP>0.05)

3 1～13岁癫痫组患儿血清中升高UN值与Cys C表达水平相关性 1～13岁癫痫组患儿血清中UN升高者为104例，其中男性患儿为63例，女性患儿41例。癫痫组患儿中血清升高UN值与Cys C表达之间无相关性，差异无统计学意义(P=0.5212)；癫痫组男性患儿血清升高UN值与Cys C的表达之间无相关性，差异无统计学意义(P=0.2366)；癫痫组女性患儿血清升高UN值与Cys C表达之间不存在相关性，差异无统计学意义(P=0.5449)。见图3。

4 1-13岁癫痫组患儿中血清中升高UA值与Cys C表达水平相关性 1～13岁癫痫组患儿血清中Urea升高128例，其中男性患儿61例，女性67例。癫痫组患儿中血清升高UA值与Cys C表达之间不存在相关性，差异无统计学意义(P=0.1580)；癫痫组男性患儿血清升高UA值与Cys C表达之间不存在相关性，差异无统计学意义(P=0.4381)；癫痫组女性患儿血清升高UA值与Cys C表达之间不存在相关性，差异无统计学意义(P=0.1398)。见图4。

图3 1～13岁癫痫组患儿血清升高UN值与Cys C相关性

讨 论

癫痫在所有年龄段的人群中均可发病，其对患者的社交行为、人身健康等方面以及患者家人承受的负担方面均有重要的影响，估计全世界有超过5000万的人都受此影响[5]，其中80%的癫痫患者生活于中低收入国家，绝大多数癫痫患者，经过充分的治疗，能够过上正常的生活。然而，存在有严重的精神障碍和精神发育迟滞等并发症的癫痫患者预后很差甚至威胁其生命。儿童癫痫在年龄越小的癫痫患儿中病死率更高，早发癫痫患儿每1000例中就有14.5例患儿发生死亡[6]。Sillanpaa等人通过前瞻性随访40年研究245例癫痫患者的发作预后与病死率，他们发现儿童期发作的癫痫与突发性癫痫以及无法解释的死亡等有密切关系，其中在癫痫发作不能缓解的儿童中病死率更高[7]。

图4 1～13岁癫痫组患儿血清升高UA值与Cys C相关性

本文研究发现1～13岁癫痫患儿Cys C表达水平升高，同时其水平的升高与UN和UA表达水平的升高无明显的相关性，Cys C升高可能在儿童癫痫的发生发展过程中发挥重要的作用。研究发现Cys C在人类癫痫发作、神经退行性疾病动物模型中以及包括面神经切断术、脊髓穿孔路径横断、垂体切除术、短暂性前脑缺血等刺激和诱导癫痫的过程中表达水平显著增加[4,8-12]。这提示由于损伤等应激引起的Cys C表达水平的上调可能是一种内在的可阻止疾病进展的神经保护机制。Cys C是通过细胞外分泌途径被靶向摄取到细胞中。Tizon等[13]通过外源性Cys C对神经毒性刺激下的神经元细胞发挥作用，发现Cys C以浓度依赖性方式来保护神经元细胞免受死亡。同时他们发现神经元细胞在营养剥夺和氧化应激等刺激下， 增加的Cys C通过进一步抑制mTOR途径诱导细胞发生自噬，虽然诱导水平不足以维持细胞的存活。在正常细胞中，自噬主要维持细胞翻转，且在病理环境如营养性压力、营养缺乏、缺氧和缺血等细胞功能发生障碍的条件下，细胞自噬增加。自噬通过消除受损的线粒体和其他有可能引发细胞凋亡的细胞器来保护细胞免受凋亡[14-17]。Kaur等[18]在小鼠体内实验发现Cys C表达的增加可以减弱由于Cys B基因敲除小鼠癫痫模型神经元的伤害，并减少其变性。Cys B的表达在小脑的发育中发挥着重要的作用。Cys B基因敲除小鼠在2个月就开始出现肌阵挛性癫痫发作和共济失调，同时在其小鼠正在发育的大脑中观察到小脑颗粒细胞，海马神经元和内嗅皮质内细胞发生变性[19-20]。Kaur通过采用实时荧光定量PCR(qPCR)，Western blot和免疫组化方法进行分析，发现 Cys B敲除小鼠大脑内的Cys C表达水平显著增加，通过在Cys B敲除小鼠体内杂交过表达Cys C后可阻止组织蛋白酶的表达增加，在Cys B和Cys C两基因均敲除的小鼠中因Cys B缺乏诱导的神经病理学特征更明显。Cys C可保护因Cys B功能丧失引起的包括运动协调丧失、小脑萎缩、小脑和大脑皮层神经元细胞丢失和胶质增生等产生一系列的临床和神经元病理机制的特征[21]。刘凤英等[22]发现成人非症状性癫痫患者中血清Cys C的表达水平(1.14±0.41mg/L)显著高于正常组中Cys C的表达水平(0.86±0.15mg/L)。本文研究0 d至1岁以内儿童癫痫患者Cys C表达水平并无统计学差异，且表达水平均较1-13岁患儿的表达水平高，分析可能是因为Cys C的分泌还没有趋于稳定导致，不排除0d至1岁的患儿标本数量过少导致。同时本研究发现Cys C的表达水平与UA和UN的表达水平并无相关性，推测 Cys C水平的表达升高不是因为肾脏损害所导致，其本身可能是癫痫患儿的保护因子。

综上所述，Cys C在儿童癫痫患者的表达水平升高，在癫痫的发生发展过程中可能发挥神经保护作用，推测可能是儿童癫痫病情评估及预后的新的生物标志物，其为研究儿童癫痫的发病机制提供了一个新视角。