全蝎最细粉长期毒性实验研究*

梁 刚 ，吴春红 ，张 红 ，张 丹 ，刘明华 △

（1.西南医科大学附属中医院，四川 泸州 646000； 2.西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；3.成都大学，四川 成都 610106）

中药全蝎味辛，性平，有息风止痉、通络止痛、攻毒散结等功效[1]。现代药理研究表明，全蝎不仅能抗炎、镇痛[2]，还能抗癫痫[3]、抗凝、抗血栓[4]和抗肿瘤[5]等。全蝎应用于临床始见于《开宝本草》，距今已有千年历史，用途十分广泛，近年对其主要化学成分、药理机制、配方组成等研究较多，但全蝎有一定毒性，而对全蝎最细粉的长期毒性研究极少。本研究中参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》（2005版）设计大鼠实验，观察全蝎最细粉的长期毒性、剂量与毒性反应的关系及靶器官是否受影响等，为临床安全使用全蝎最细粉提供参考。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

动物:SPF级SD大鼠88只，雌雄各半，体质量120～140 g，由西南医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号XSCK（川）2013-17。实验前1周，SPF级实验动物房内适应性饲养大鼠，在此期间记录大鼠体质量，观察外观体征和行为活动变化。实验环境设施合格证号SCXK（川）2013-065，实验环境为SPF级。温度为空调恒温20～26℃，相对湿度为40% ～70%。

药材:全蝎最细粉（泸州百草堂中药饮片有限公司，批号为140119，原产地河南），凉暗处干燥保存。

试药:白蛋白（ALB）试剂盒（批号为 150915）、总蛋白（TP）试剂盒（批号为 150916）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号为 D1509023）、总胆红素（TBil）试剂盒（批号为 D1507013）、肌酸激酶（CK）试剂盒（批号为D1501103）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号为 D1507073）、三酰甘油（TG）试剂盒（批号为 150609）、碱性磷酸酶（ALP）试剂盒（批号为151008）、总胆固醇（TC）试剂盒（批号为 150416）、肌酐（CR）试剂盒（批号为 D1510033）、血糖（Glu）试剂盒（批号为 D1511053），均购自上海复星长征医学科学有限公司；M-68FO染液（批号为 2015032102）、M-68FIV染液（批号为2015020201）、M-68FR 染液（批号为 2015060401）、稀释液（批号为2015080404）、M-68LB溶血剂（批号为2015091306）、M-68LD 溶血剂（批号为 2015091406）、M-68 稀释液（批号为 2015052004）、M-68LN（批号为2014102801）、M-68LH 溶血剂（批号为 2015040104），均购自迈瑞＜南京＞生物技术有限公司。

1.2 方法

将88只SD大鼠随机分为阴性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，各22只，雌雄各半。灌胃给药，剂量分别为 0（予 0.9% 氯化钠溶液），0.2，0.4，0.8 g ／（kg·d），相当于临床剂量 0 倍、10 倍、20 倍和 40 倍。给药容积均为每100g体质量1mL。每周给药5d，每天1次，连续10周。每周称体质量1次，以此调整给药剂量。大鼠在给药期间自由饮食饮水，恢复期停止给药，自由饮食、饮水，处死前12 h禁食不禁饮。经股动脉取血后处死大鼠，称定相关组织器官质量并进行病理检验。

1.3 观测指标

一般观测:给药后每周称定大鼠体质量，每天观察其饮食饮水、行为活动、体表黏膜和皮毛、大小便情况和精神状态等行为活动和生理指标。

血液学指标和血生化指标:分别在给药4周、10周及停药4周后检测。血液学指标:白细胞计数（WBC）、中性粒细胞百分比（NEUT%）、淋巴细胞绝对值（LYMPH）、单核细胞百分比（MONO%）、淋巴细胞百分比（LYMPH%）、红细胞数（RBC）、血红蛋白量（HGB）、红细胞比容（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）、红细胞分布宽度（SD）、血小板计数（PLT）、血小板平均体积（MPV）、血小板压积（PCT）、血小板分布宽度（PDW）。血生化指标:TP，ALB，ALT，AST，TBil，TG，TC，CK，CR，尿素氮（BUN）、Glu、钠（Na）、钾（K）、氯（Cl）。

系统尸体解剖和组织病理学检查:停药4周后将大鼠麻醉，称质量，解剖，经股动脉取血，对大脑、甲状腺、心脏、肺脏、胸腺、肝脏、脾脏、肾脏、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾等脏器进行称质量，并计算脏器系数（脏器系数=脏器质量／体质量×100%），最后进行组织病理学检查，观察脏器病理变化。

1.4 统计学处理

采用SPSS19.0统计学软件分析。计量资料以表示，行t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 动物死亡情况

给药后第25，51日，高剂量组大鼠死亡2只；给药后第43，59日，中剂量组大鼠死亡2只；给药后第58日，低剂量组大鼠死亡1只。经尸检，大鼠的大脑、心、肺、肝、脾、肾等脏器均未见明显异常。

2.2 一般生理指标比较

与阴性对照组比较，各给药组雄鼠体质量增长缓慢，雌鼠增长相对更明显，详见图1。

图1 给药10周及停药恢复4周大鼠体质量变化曲线图

2.3 血液学和血生化指标检查

血液学指标:灌胃给药10周后，阴性对照组与低剂量组的 WBC，NEUT% ，MONO% ，RBC，HGB，HCT，MCV，MCH，MCHC，SD，PLT，PCT，MPV，PDW 等血液学指标无显著差异（P＞0.05）。但高剂量组的LYMPH%显著低于阴性对照组（P＜0.05）。详见表 1。

血生化指标:灌胃给药第4周，与阴性对照组比较，高剂量组的AST较高（P＜0.05），各组其他指标比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；灌胃给药第10周，高剂量组的AST和低剂量组的BUN均显著高于阴性对照组（P＜0.05）；停药恢复期，高剂量组 AST和ALT均显著高于阴性对照组（P＜0.05）；Na，TG，TP，CK，Glu 虽有显著差异，但并未反映脏器毒性，其他指标如ALB，TBil，TC，CR，K，Cl与对照组比较无显著差异（P＞0.05）。详见表2。

表1 4组大鼠血液学LYMPH%检查结果比较（±s，%）

表1 4组大鼠血液学LYMPH%检查结果比较（±s，%）

注:与阴性对照组比较，*P＜0.05。表3同。

给药时间4周10周停药恢复82.48 ±3.4683.69 ± 4.1465.62 ±26.6286.38 ± 5.0374.48 ± 8.21*74.96 ±5.7986.75 ± 3.4777.97 ± 5.5264.70 ± 27.9482.50 ± 1.3778.30 ± 1.6063.18 ± 25.44阴性对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组

表2 4组大鼠血液生化学指标比较（±s）

表2 4组大鼠血液生化学指标比较（±s）

注:与阴性对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01。

指标AST（U ／L）ALT（U ／L）BUN（mmol／L）Na（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）CK（U ／L）Glu（mmol／L）给药时间4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复4周10周停药恢复阴性对照组124.67±12.42107.33±24.01136.00±30.1642.50±8.1947.13±4.6449.14±8.677.50±1.725.96±0.986.98±0.90140.25±0.96138.88±1.13141.86±0.900.91±0.260.76±0.470.66±0.2352.25±3.8656.25±2.8258.71±3.15991.25±307.221 008.75±231.54958.71±248.047.73±1.398.86±1.208.17±1.31高剂量组158.00±26.04△160.50±33.85△167.00±31.44△38.33±4.9341.67±5.1359.80±3.90△5.48±0.767.29±2.55△7.67±1.49139.17±1.17141.20±1.92▲141.20±0.840.61±0.340.60±0.301.13±0.18△51.17±3.1661.60±5.64△62.20±8.64825.50±117.89563.33±278.64▲493.80±140.63△11.08±10.757.20±1.20▲8.38±0.97中剂量组138.40±22.06120.17±15.17125.75±32.0239.60±6.5045.83±7.7846.75±10.375.56±0.766.50±0.616.88±0.94137.80±1.64△140.33±1.51141.75±0.960.51±0.190.77±0.210.83±0.2953.00±3.0860.67±3.20△61.75±3.77901.80±176.56639.50±159.80▲782.00±234.349.43±1.098.13±1.117.10±1.38低剂量组135.83±14.62124.80±27.29115.40±21.8246.33±12.9640.60±6.8845.20±5.456.48±0.656.39±1.216.48±0.74138.83±1.72140.00±0.89141.40±0.890.63±0.280.76±0.240.75±0.6053.67±3.6158.33±3.4457.6±3.78952.00±265.15624.4±152.07▲754.40±259.398.34±1.128.26±0.597.51±0.54

2.4 脏器湿质量及脏器系数

全蝎最细粉中、低剂量组恢复期大脑湿质量明显大于阴性对照组（P＜0.05），其余各给药组各期脏器如心、肺、肝、胸腺、脾、肾、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾等的湿质量与阴性对照组相当（P＞0.05）。低剂量组恢复期肾脏脏器系数明显低于阴性对照组（P＜0.05），其余各给药组各期脏器如大脑、心、肺、胸腺、肝、脾、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾等脏器系数指标与阴性对照组相当（P＞0.05）。详见表 3。

表3 给药10周及恢复4周大鼠大脑湿质量及肾系数比较（±s）

表3 给药10周及恢复4周大鼠大脑湿质量及肾系数比较（±s）

指标肾系数大脑湿质量时间4周10周停药恢复4周10周停药恢复阴性对照组0.60 ±0.0780.66 ±0.0680.67 ±0.0620.71 ±0.1901.42 ±0.0921.07 ±0.400高剂量组0.51 ±0.2500.70 ±0.0700.77±0.051*1.07 ±0.2701.44 ±0.0891.39 ±0.087*中剂量组0.35 ±0.0320.71 ±0.0590.72 ±0.4300.76 ±0.1101.34 ±0.2001.42 ±0.046*低剂量组0.35 ±0.0320.73 ±0.0870.72 ±0.0500.95 ±0.2401.39 ±0.2001.36 ±0.160

2.5 病理组织学检查结果

给药第4周，各剂量组未发现明显组织学病便变化。给药第10周:1）各给药组均发生了肺病变，高剂量组轻度炎症2例，中剂量组轻度炎症1例，轻度纤维化1例；低剂量组轻度炎症1例；2）肝脏病变，高、中、低剂量组轻度水肿各2例，高、中剂量组肝中度纤维化各1例，高剂量组肝细胞坏死1例；3）肾病变，高剂量组轻度纤维化1例；4）睾丸病变，高剂量组睾丸凝固性坏死1例。恢复期:1）肺部病变，高剂量组轻度炎症1例，重度纤维化1例，中剂量组轻度炎症1例，轻度纤维化1例；2）肾病变，轻度纤维化1例。详见图2。

3 讨论

我国全蝎入药历史悠久，由于临床用途较多，研究也较深入，包含了全蝎来源与鉴别、组方配伍[6]、炮制与加工方法[7]、指纹图谱与质量控制[8]、成分及其含量[9]、结构、作用及机制[10]、提取工艺及提取物[11]、现代药理[12]和毒理[13]等诸多领域。目前，临床服用全蝎引发中毒的事件时有发生，大量服用可能引发呼吸困难、发绀、昏迷等症状，患者可死于呼吸麻痹[14]。且同一种药物的不同剂型对人体产生的疗效和毒副反应不尽相同。

最细粉是指能100%通过6号筛，且95%以上能通过7号筛的粉末[15]。中药最细粉与传统饮片相比具有以下优点:减少用药剂量，节约药材；避免有效成分损失和浪费；能增加有效成分的生物活性，提高治疗效果[16]；便于储存、携带和服用；能有效避免湿度、温度等外界环境对药效的影响，保证质量[17]。但也有其弊端:有一些中药不适宜制成最细粉；最细粉的微小颗粒会黏附胃肠黏膜，可能影响胃肠功能；中药细胞壁被破坏，细胞内活性成分的结构和性质可能会发生改变，可能导致一系列毒副作用。因此，对中药微粉化后进行安全性评价研究很有必要，如长期毒性试验、急性毒性试验、人群毒副反应流行病学研究等[18]。

长期毒性试验的作用主要体现以下几个方面[19]:发现药物在急性毒性试验中未发现的毒性作用，为重新评估药物毒副反应提供依据；明确中毒反应的性质和程度；明确受到慢性和亚慢性毒影响的靶器官、毒性剂量-反应（效应）关系及毒性损害的可逆性；探讨可能的毒副作用机制；明确不同动物种类对药物长期毒效应的差异。本研究中所采用的长期毒性试验结果显示，全蝎最细粉对SD大鼠体质量变化影响不大，而有个别剂量组AST，ALT，BUN高于阴性对照组，同时病检发现肺轻度炎性、肺纤维化病变、肝细胞轻度水肿、肾轻度纤维化，据此可初步得出结论，全蝎最细粉主要毒性靶器官为肺、肝和肾，对大脑和睾丸的毒性需进一步的实验验证，对其他靶器官几乎无毒性作用；给药周期越长，剂量越大，越容易引起毒性反应。

图2 给药10周及停药恢复4周病理组织学检查结果（HE，×200）

但要注意，药物的“治”与“毒”是相对的，不可因噎废食。许多药物的毒性作用潜藏于治疗作用中，而毒副作用开启了治疗作用的大门。中药也是如此，毒性中药是中药的重要组成部分，我国现行药典共收载有毒中药83种，其中“大毒”10种，如斑蝥、川乌、马钱子等；“有毒”42种，如全蝎、蜈蚣、附子等；“小毒”31种，如土鳖虫、水蛭、九里香等[20]。本研究的方法和数据可为其他有毒中药最细粉的毒性研究、安全性评价提供参考。